Добавил:
Sekretar
kiopkiopkiop18@yandex.ru
t.me/Prokururor I Вовсе не секретарь, но почту проверяю
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Ординатура / Хирургия / @xirurgi_2025 / @xirurgi_2025 - 1158 - файл
.pdf
https://t.me/medicina_free
ГЛАВА 2.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объекты исследования:
2.1.1. Экспериментальная часть работы проводилась на 250
лабораторных крысах обоего пола средним весом 160 г., которые были
разделены на 2-е группы: 1) модель обширной асептической раны; 2) модель
гнойной раны мягких тканей. Все манипуляции на животных проводили под
эфирным наркозом. Животные содержались в клетках при температуре 18-
22С и 24-х часовом световом режиме (12 часов - свет, 12 часов - темнота).
Крысы получали ad libitum сбалансированный по белкам и углеводам
витаминизированный стандартный кормовой рацион. Доступ к воде и пище
был свободным.
Исследования проводились в соответствии с Хельсинкской
декларацией 1975 г. и ее пересмотром в 1983 г. Содержание животных,
питание и уход за ними проводились согласно «Санитарным правилам по
устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических
клиник (вивариев) от 06.04.1973 г.» и не противоречили Женевской
Конвенции 1985 г. о «Международных принципах биомедицинских
исследований с использованием животных».
Материалом для исследования послужили мягкие ткани в норме, после
создания обширной асептической раны и гнойной раны.
Модель обширной асептической раны межфасциального пространства
в области спины создавалась путем тунельного отсепаровывания кожи с
подкожной жировой клетчаткой и поверхностной фасции от прилежащих
мягких тканей площадью до 6 см
краю разреза кожи.
2
, в последующем рана ушивалась только по
71
е
и
ы
а
ы
https://t.me/medicina_free
В первой группе опытов, состоящей из трех подгрупп, (контроль – без
лечения) происходило спонтанное приживление вдоль отсепарованного
межфасциального пространства. Во второй подгруппе перед ушиванием
обширной хирургической раны межфасциальное пространство
обрабатывалось наночастицами серебра, в третьей – хитозаном, а в четвертой
(основной) – комплексом: перекись водорода+хитозан+нааносеребро. Оценка
состояния процессов заживления раны и эффективности лечения
проводилась до 14 суток. Распределение животных по сериям и срокам
представлено в таблице 2.1.1.1.
Таблица 2.1.1.1 - Распределение животных по сериям и срокам (в сутках)
Серии
Сутки
1 3 7 14 21 45 Всего
Норма 10 10
Модель
Спонтанное заживлени
5 5 5 5 5 5 30
обширной
асептической
(контроль)
Лечение наночастицам
5 5 5 5 5 5 30
раны
серебра
Лечение хитозаном 5 5 5 5 5 5 30
Модель
гнойной ран
Традиционное лечение
5 5 5 5 5 5 30
Перекись водорода 5
5 5
5
5
30
5
Гель с наночастицами
5 5 5 5 5 5 30
серебра
Перекись водорода с
5 5 5 5 5 5 30
наночастицами серебр
Модель
Комплекс:
гнойной ран
(опытная
группа)
Итого: 250 крыс
перекись водорода
наночастицы серебра
хитозан
5 5 5 5 5 5 30
72
https://t.me/medicina_free
В работе использовали наночастицы серебра, синтезированные с
помощью плазменной технологии, дисперсность частиц серебра 10-15 нм. В
исследовании использовали 120 белых беспородных крыс массой 160±20 г.
Техника моделирования гнойной раны мягких тканей: после депиляции
и обработки кожи, в асептических условиях, под наркозом в межлопаточной
области иссекали кожу в виде квадрата 1×1 см² (100 мм²) по контуру,
предварительно нанесенным трафаретом. Края и дно раны раздавливали
зажимом Кохера. В рану вносили 0,1 мл взвеси суточной культуры
клинических штаммов S. aureus в количестве 5×10
количестве 5×10
6
КОЕ/мл. Штаммы микроорганизмов получали из
6
КОЕ/мл и С. albicans в
республиканской баклаборатории. На 3-и сутки происходило формирование
гнойной раны с обильной экссудацией.
На протяжении всего эксперимента учитывались наличие и характер
воспалительной реакции, состояние краев и дна раны, сроки очищения раны
от некротических тканей и появления грануляций, сроки начала
эпителизации ран.
В группе сравнения обработку проводили путем удаления
некротических тканей и нанесения на раневую поверхность препаратов.
Данная экспериментальная группа по способам лечения состояла из
следующих подгрупп: 1) традиционное лечение (левомиколь); 2) перекись
водорода; 3) гель с наночастицами серебра; 4) перекись водорода с
наночастицами серебра; 5) комплекс: перекись водорода с наночастицами
серебра + хитозан. Во всех 5-ти подгруппах обработку поверхности раны
повторяли 1 раз в день ежедневно. Бактериологическое исследование
экспериментальной раны включало качественное и количественное изучение
раневой микрофлоры в динамике на 3-и, 7-е, 14-е сутки лечения.
С целью изучения особенностей течения послеоперационного периода
и оценки репаративного процесса и для объективного контроля за
процессами заживления ран, мягкие ткани области обширной хирургической
73
https://t.me/medicina_free
раны исследовались общепринятыми макро-микроскопическими,
гистологическими и морфометрическими методами.
Материал фиксировали в растворе Лилли (4% раствор
параформальдегида на фосфатном буфере, рН 7,4). Далее гистологический
материал проводили по общепринятой методике. Срезы окрашивали
гематоксилином и эозином, азур II-эозином - для обзорных целей и
пикрофуксином по Ван-Гизон – для выявления соединительно-тканных
элементов, толуидиновым синим на тучные клетки (ТК) [23].
Морфологическое исследование ТК проводилось с учетом
расположения их по отношению к ЛС и степени их дифференцировки, для
чего ТК были разбиты на 3 группы по степени зрелости: зрелые,
созревающие и юные. Функциональную активность тучно-клеточной
популяции оценивали тремя степенями дегрануляции: слабой, умеренной и
сильной [49, 52].
Морфометрия тканевых структур проводилась при помощи окулярмикрометра МОВ-1-15х на светооптических микроскопах "Люмам-I-2",
МБИ-15 и МБС-10 в соответствии с общепринятыми требованиями [4, 44,
62]. Во всех группах опытов, мягкие ткани области моделирования
хирургической раны исследовались макро-микроскопическими,
гистологическими и морфометрическими методами.
Характеристика морфофункционального состояния прилежащих
мягких тканей складывалась из суммарной оценки признаков, наблюдаемых
при визуальном изучении гистологических препаратов и количественных
методов исследования.
2.1.2. Клиническая часть работы проводилась (исследование 160
пациентов хирургического профиля, находящихся на стационарном лечении
в отделениях) на базе Научного центра реконструктивно-восстановительной
хирургии МЗ КР и Чуйской областной объединенной больницы. Наблюдение
за пациентами проводилось начиная с первичного обращения к хирургу и до
74
https://t.me/medicina_free
выписки из стационара за 2018–2020 гг. Проведен сравнительный анализ
традиционного метода лечения и предложенного способа
послеоперационных хирургических ран в клинических условиях.
Всем пациентам в экстренном порядке была выполнена операция –
вскрытие, некрэктомия и дренирование гнойного очага. От каждого пациента
было получено информированное согласие на участие в исследовании в
соответствии с утвержденным протоколом, этическими принципами
Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации (Сеул, 2008),
трехсторонним Соглашением по надлежащей клинической практике (ICH
GCP) и действующим законодательством РФ. Критерии включения в
исследование: возраст пациентов от 18 до 65 лет, наличие гнойносептического очага (инфицированные раны, эпи- и субфасциальные
флегмоны, абсцессы мягких тканей, инфицированные трофические язвы
сосудистой этиологии).
Критерии исключения из исследования: возраст меньше 18 и больше 65
лет; сопутствующие онкологические заболевания; гормонотерапия и
химиотерапия в анамнезе; наркомания, токсикомания; иммунодепрессивные
состояния, в т.ч. ВИЧ-инфекция; отягощенный преморбидный фон
(патологии сердца, легких, печени, почек, органическая патология
центральной нервной системы), наличие декомпенсированного сахарного
диабета в анамнезе, септические состояния.
Все пациенты были разделены на 2 группы: 1) обширные асептические
послеоперационные раны; 2) гнойные раны мягких тканей.
В I группу (n=42) включены пациенты: а) традиционное ведение
послеоперационных ран; б) с дополнительной обработкой наночастицами
серебра.
Во II группу (n=118) включены пациенты: а) традиционное ведение
гнойных ран мягких тканей; б) дополнительное использование перекиси
водорода с наночастицами серебра; в) применение комплекса перекиси
75
https://t.me/medicina_free
водорода и наночастиц серебра + хитозан (бактерициднолимфостимулирующий коктейль).
Данное исследование проводилось по программе «возможности
применения наноструктур с наночастицами серебра для ускорения
регенераторного процесса при применении лимфотропных технологий в
морфологии и хирургии ран для профилактики послеоперационных
осложнений» и в рамках решения по подготовке нормативной документации
на препарат «бактерицидно-лимфотропный коктейль» - лечебное средство
для проведения доклинических и клинических испытаний.
Во II группу (n=38) включены пациенты, у которых в
послеоперационном периоде для местного лечения ран применялись мазевые
повязки с антибактериальными мазями на водорастворимой основе –
левосин, левомеколь. Исследуемая подгруппа (традиционное лечение)
пациентов включала 45% мужчин и 55% женщин, средний возраст – 37,2±6,2
года (t=0,3231; р>0,05). Статистически значимых различий между группами
пациентов по полу не выявлено (χ
2
=0,001; p>0,05).
При поступлении все пациенты второй группы (с гнойными ранами
мягких тканей) прошли общеклинические лабораторные и инструментальные
исследования. Всем было выполнено вскрытие и дренирование гнойной
полости либо первичная хирургическая обработка инфицированной раны в
первые сутки после поступления. Раны промывались раствором антисептика
(3% р-р перекиси водорода), накладывалась асептическая повязка.
Пациенты обеих исследуемых групп получали одинаковую
антибактериальную терапию широкого спектра действия. Местное лечение
гнойной раны начиналось на следующие сутки после операции. Перевязки
выполнялись ежедневно. Во время перевязки раневой дефект промывался 3%
раствором перекиси водорода, затем накладывались марлевые мазевые
повязки. В динамике изучались следующие показатели: характер раневого
отделяемого, наличие отека и гиперемии тканей вокруг раны, сроки
очищения раневого дефекта, температурная реакция организма,
76
https://t.me/medicina_free
лейкоцитарная реакция, результаты посева на микрофлору и
чувствительность к антибактериальной терапии на 1, 5, 10-е сутки после
операции, а также сроки госпитализации. Бактериологическое исследование
раны включало качественное и количественное изучение раневой
микрофлоры в динамике на 1-е, 5-е и 10-е сутки лечения. Биоптат с
поверхности гнойной раны суспендировали в изотоническом растворе NaCl и
высевали на плотную питательную среду, помещали в термостат при 37С на
24 часа, затем производили подсчет колоний.
Планиметрические методы исследования: для получения объективных
показателей заживления ран вторичным натяжением использовали
планиметрический метод Л.Н. Поповой, основанный на регистрации
скорости уменьшения раневой поверхности во времени. Исследования
осуществляли следующим образом: на рану помещается стерильная
пластинка полимера, на нее наносится контур раны, затем подсчитывали
площадь раны.
2.2. Характеристика перекиси водорода
Синонимы: Водорода пероксид, Раствор перекиси водорода, Водорода
перекись медицинская, Hydrogen peroxide, Solutio Hydrogenii peroxydi dilute.
Описание. Действующее вещество - водорода пероксид, содержит до
3,3 % перекиси водорода Н
. Пероксид водорода — редкое химическое
2O2
соединение, почти не встречающееся в природе, действует как сильнейший
антисептик.
Фармакологическое действие. Раствор перекиси водорода дезинфицирующее и дезодорирующее средство. При контакте перекиси
водорода с поврежденной кожей или слизистыми оболочками
высвобождается активный кислород, при этом происходит механическое
очищение и инактивация органических веществ (протеины, кровь, гной).
Антисептическое действие не является стерилизующим, при его применении
происходит лишь временное уменьшение количества микроорганизмов.
77
https://t.me/medicina_free
Обильное пеноoбpaзование способствует тромбообразованию и остановке
кровотечений из мелких сосудов.
Н
обладает такими качествами: 1) бактерицидное - при обработке
2O2
ран предотвращает развитие инфекций, т.к. останавливает размножение
бактерий; 2) гемостатическое - останавливает поверхностное кровотечение,
т.к. при прямом контакте с повреждённой кожей образуется пена, которая
закупоривает кровоточащие мелкие сосуды; 3) антибактериальное препятствует проникновению вредоносной микрофлоры в кровоток,
поскольку обеззараживает и дезинфицирует гноящиеся раны, подавляя
размножение бактерий.
Антисептический препарат Н
входит в группу лучших оксидантов.
2O2
При контакте с повреждённой кожей - перекись распадается, образуя
молекулярный кислород, именно эта составляющая даёт дезинфицирующий
эффект. Таким образом, происходит мгновенное очищение, а также
инактивация (окисление) органических компонентов клеток (кровь, гной,
протеины). Атомарный кислород уничтожает вредоносные микроорганизмы,
которые попали в его зону воздействия.
Пенообразование механическим путём очищает рану. Для организма
такое взаимодействие безвредно, поэтому 3% перекись водорода применяют
для полоскания слизистых оболочек полости рта и горла. При правильном
использовании средство подходит для взрослых и детей. Во время
окислительной реакции болезнетворная флора погибает, рана
обеззараживается. Пенообразование форсирует переход фибриногена в
фибрин, при кровотечении это обуславливает свёртывание крови, что
помогает замедлить или остановить капиллярный кровоток.
2.3. Характеристика используемого в работе наносеребра
В настоящее время широко применяют повязки и мази с добавлением
нитрата серебра, а также 0,1-0,2% раствор нитрата серебра для наружной
обработки послеоперационных ран. В концентрации 5% данный раствор
78
https://t.me/medicina_free
оказывает прижигающее действие, поэтому применяется только при
выраженном воспалении и мокнутии раны.
Биоцидная активность НЧС объясняется их огромной удельной
поверхностью за счет малых размеров и тем, что они атакуют
микроорганизмы сразу по нескольким направлениям. Из зарубежных
источников известно, что наночастицы размером 9-15 нм наиболее активно
уничтожают более 600 видов болезнетворных микроорганизмов, грибов и
вирусов. Они могут также стать основой препаратов, альтернативных
антибиотикам. Известно, что к действию любого антибиотика
болезнетворные микроорганизмы, мутируя, приспосабливаются за 7-10 лет.
В то же время не обнаружено ни одного случая, когда бы они
приспособились к действию наночастиц серебра. Наночастицы серебра,
благодаря своим уникальным свойствам, нашли уже широкое применение за
рубежом при производстве разнообразных товаров и материалов с
биоцидными свойствами.
Преимущество серебряных наночастиц, синтезируемых сотрудниками
лаборатории нанотехнологии НИИнститута химии и фитотехнологий НАН
КР их размер не более 5-10 нм и, благодаря этому, удельная поверхность в
разы превышающая удельную поверхность коллоидных наночастиц и
наночастиц, синтезированных с использованием лазерной абляции, УФоблучения, золь-гель технологии, методов восстановления и чистота.
Наночастицы, используемые как носители антигенов, стимулируют
фагоцитирующую активность макрофагов и влияют на функционирование
лимфоцитов, что, вероятно, может обуславливать их иммуномодулирующий
эффект. Кроме того, привлекает простота и доступность способа
предлагаемого сотрудниками лаборатории нанотехнологии НИИ химии и
фитотехнологий НАН КР одностадийного синтеза наноструктур с
использованием импульсной плазмы, создаваемой в жидкостях.
79
https://t.me/medicina_free
2.4. Характеристика используемого в работе комплекса перекиси
водорода и наносеребра для клинического применения
Специалистами Концерна «Наноиндустрия» разработана технология
производства наночастиц серебра в водных коллоидных растворах под
маркой «AgБион-2». В результате установлено, что «AgБион-2» обладает
уникальным сочетанием бактерицидных, вирулентных, фунгицидных
свойств. Концентрат наночастиц серебра «AgБион-2» с содержащейся в нём
концентрацией серебра 0,28мг/л относится к 4 классу нетоксичных веществ,
малоопасных для человека и животных. Они не наносят вреда и окружающей
среде.
Однако, коллоидные растворы не проникают глубоко в ткани и
действуют только по поверхности. Поэтому мы для экспериментальных и
последующих клинических испытаний предпочли препарат, изготовленный в
лаборатории нанотехнологии НИИ химии и фитотехнологий НАН КР,
состоящий из комплекса перекиси водорода и наносеребра с последующей
стерилизацией кварцеванием.
2.5. Характеристика хитозана
В связи с недостаточной эффективностью традиционных методов
лечения осложнившихся нагноением хирургических ран, не всегда
приводящих к ожидаемому результату, диктует необходимость поиска новых
подходов к санации данной патологии [69] направленных на ускорение
регенераторных процессов.
Известно, что методы насыщения тканей лекарственными препаратами
через лимфатическую систему весьма эффективны [15, 16, 46, 72] и
основываясь на результатах многочисленных исследований об особенностях
строения и функции лимфатической системы, можно предположить, что
разработка лимфотропных методов терапии является перспективным
направлением.
80
Соседние файлы в папке @xirurgi_2025