диссертации / 17

131

является маркером повышенного риска развития БА у подростков бурятской национальности (ОШ = 6,55; 95%ДИ [3,3–12,9]).

Выявлена ассоциация БА и полиморфного локуса rs7216389 гена

GSDMB у русских подростков. Частота аллеля rs7216389*Т у русских боль-

ных с БА составила 80,6% по сравнению с контрольной группой - 62%

(р=0,009, ОШ=2,54; 95%ДИ [1,3-5,2]). Гомозиготный генотип rs7216389*ТТ встречался в 1,5 раза чаще у больных с БА (66,7%), чем в контроле (40%;

р=0,04, ОШ=3,00; 95%ДИ [1,2-7,3]) (табл. 30).

Значимых межэтнических различий в частоте аллелей и генотипов rs7216389 гена GSDMB у больных БА не определено (р>0,05).

Не выявлено достоверно значимых ассоциаций в частоте аллелей и ге-

нотипов полиморфизма rs7216389 гена GSDMB со степенью тяжести заболе-

вания, повышенным уровнем IgE в сыворотке крови у бурят и русских, боль-

ных БА (р˃0,05). Раннее начало БА до 6 лет у бурят ассоциировано с алле-

лем *С rs7216389 GSDMB (0,276 против 0,133; р=0,04; ОШ=2,48; 95%ДИ

[1,0-6,1]) (табл. 32).

Полученные данные по ассоциации rs7216389 гена GSDMB с развитием БА у агинских бурят и русских Забайкалья согласуются с данными литерату-

ры. Так, доказана ассоциация rs7216389 гена GSDMB с формированием дет-

ской БА у европеоидов: англичан (61,7% против 49,7%), немцев (57,0% про-

тив 47,3%), шотландцев (56% против 46%), американцев северо-

европейского происхождения (54,9% против 50,9%) [293, 348, 366], в объ-

единенной выборке татар, башкир, русских - жителей Волго-Уральского ре-

гиона (59,6% против 45,0%) [53]; а также у японцев (78,2% и 71,3%) [209].

Не установлено также ассоациии с повышенным уровнем IgE и поли-

морфизмом rs7216389 гена GSDMB у англичан, корейцев, китайцев с БА

[144, 236, 259, 398].

132

Таблица 32. Значимые различия в частотах аллелей и генотипов генов

GSDMB rs 7216389, THOI (STR), ассоциированных с началом манифестации бронхиальной астмы

По данным GWAS, объединившего 23 исследования выявлена стати-

стически значимая ассоциация rs 2305480 гена GSDMB с развитием детской астмы (ОШ=0,76; р<0,0001) [292]. Установлена ассоциация минорного алле-

ля G и генотипа GG rs 2305480 гена GSDMB с развитием БА у жителей Вол-

го-Уральского региона (татар, башкир, русских) (ОШ=1,67) [53].

В настоящем исследовании не выявлено ассоциации полиморфизма rs

2305480 гена GSDMB с бронхиальной астмой у подростков Забайкалья (бурят и русских). При сравнительном анализе больных БА и контрольной группы у бурят (43,4% и 49,5%) и русских (58,4% и 48%) статистических различий в

133

частоте минорного аллеля rs 2305480*G и гомозиготного генотипа GG гена

GSDMB не выявлено (р˃0,05) (табл. 30).

Установлены межэтнические различия частот аллелей и генотипов по полиморфизму rs 2305480 гена GSDMB среди больных БА. Так, у русских больных БА частота минорного аллеля G составила 0,583; у бурят - 0,434

(р=0,04), частота гомозиготного генотипа АА выше у бурят (0,382), чем у русских (0,111), суммарно частоты генотипов AG+GG rs 2305480 гена

GSDMB превалировали у русских (0,889) по сравнению с бурятами (0,618;

р=0,004) (табл. 31).

Не выявлено достоверно значимых ассоциаций в частоте аллелей и ге-

нотипов полиморфизма rs 2305480 гена GSDMB со степенью тяжести заболе-

вания, началом манифестации заболевания (до 6 лет), повышенным уровнем

IgE в сыворотке крови у бурят и русских, больных БА (p˃0,05).

Активация клеток воспаления продуктами дегрануляции тучных клеток индуцирует низкоафинный IgE-рецептор (FceRII, CD23), ответственный за цитотоксичность клеток воспаления, IgE-зависимое представление антигена Т-лимфоцитам, адгезию В-лимфоцитов друг к другу, участвует в апоптозе,

регуляции синтеза IgE in vivo [342].

Ген FCER2 увеличивает риск развития неконтролируемой астмы, ас-

социирован с повышенным риском госпитализации пациентов, с тяжелыми обострениями астмы и повышенной потребностью в ИГКС [275, 363].

При анализе полиморфизма T2206C гена FCER2 у бурят и русских не выявлено ассоциации с бронхиальной астмой. Различия частоты минорного аллеля *C полиморфизма T2206C гена FCER2 между выборками больных БА и контрольной группой статистически не значимы: соответственно у бу-

рят - 0,176 и 0,205 (р>0,05), у русских - 0,347 и 0,220 (р=0,06) (табл. 30).

Выявлены межэтнические различия у больных БА. У русских больных БА частота минорного аллеля *C полиморфизма T2206C (0,347 против 0,176;

р=0,006) и генотипа *CC по гену FCER2 (0,139 против 0,029; р=0,03) выше,

чем у бурят. У бурят с БА по частоте преобладал аллель *T полиморфизма

134

T2206C гена FCER2 - 0,824 по сравнению с русскими - 0,653 (р=0,006) и ге-

нотип T/T - 0,676 против 0,444 (р=0,02) (табл. 31).

Не установлено достоверно значимых ассоциаций в частоте аллелей и генотипов полиморфизма T2206C гена FCER2 со степенью тяжести заболе-

вания, началом манифестации заболевания (до 6 лет) у бурят и русских боль-

ных БА, повышенным уровнем IgE в сыворотки крови у бурят, больных БА

(p˃0,05).

Установлена ассоциация гена FCER2 (T2206C) у русских больных БА с повышенным уровнем IgE. Частота минорного аллеля C гена FCER2

(T2206C) у пациентов с повышенным IgE составила 0,471, что значимо выше,

чем у больных БА с нормальным уровнем IgE - 0,237 (р=0,04; ОШ=0,86; 95%ДИ [1,1-7,8]) (табл. 33).

Полученные данные, согласуются с ранее опубликованными результа-

тами об отсутствии ассоциации гена FCER2 (T2206C) с развитием БА у детей

[244, 275, 330, 363]; и показавшими ассоциацию трех однонуклеотидных по-

лиморфизмов гена FCER2 (T2206C) с повышенным уровнем сывороточного

IgE [363].

Таблица 33. Значимые различия в частотах аллелей и генотипов генов

FCER2 (T2206C), THOI (STR), асссоциированных с уровнем общего IgE у русских больных бронхиальной астмой

135

THOI (STR)

Ген β2-адренергического рецептора (ADRB2) является одним из ос-

новных и наиболее доказанных генов предрасположенности к БА. Он отвеча-

ет за чувствительность пациентов к терапии β2-адреномиметиками, ассоции-

рован также с наличием или отсутствием ночных симптомов болезни, брон-

хиальной гиперреактивностью [174, 189, 214].

В исследованной нами выборке детей из Агинского Бурятского округа Забайкальского края не получено ассоциации полиморфизмов Arg16Gly и Gln27Glu гена ADRB2 с БА ни у бурят, ни у русских (табл. 30). У больных с БА также не определено межэтнических различий в частоте аллелей и гено-

типов Arg16Gly и Gln27Glu гена ADRB2 (р˃0,05).

Не определено достоверно значимых ассоциаций в частоте аллелей и генотипов полиморфизма Arg16Gly и Gln27Glu гена ADRB2 со степенью тя-

жести заболевания, возрастом манифестации заболевания (до 6 лет), повы-

шенным уровнем IgE в сыворотке крови у бурят и русских, больных БА

(р˃0,05).

Полученные нами данные согласуются с результатами, полученными как у тайваньских подростков с БА, у которых не было выявлено ассоциации заболевания с генотипами по гену ADRB2, так и у китайцев, японцев, корей-

цев, якутов [97, 174, 186, 241, 245, 255, 266, 340, 402]. У них также не было выявлено ассоциации с тяжестью заболевания [113] и уровнем общего IgE [241].

Фактор некроза опухолей α (TNFA), является мощным провоспали-

тельным цитокином, отвечающим за позднюю фазу аллергического воспале-

136

ния, которая определяет ремоделирование стенок дыхательных путей и про-

гноз болезни [334].

При анализе полиморфизма -308G˃A гена TNFA не выявлено ассоциа-

ции данного ДНК-локуса с развитием бронхиальной астмы у бурят и рус-

ских. Статистически значимых различий частоты встречаемости аллеля *А

полиморфизма -308G˃A гена TNFA у бурят, больных БА, и в контрольной группе (0,125 и 0,075; р>0,05) не установлено. Частота минорного аллеля *А

в выборке русских больных БА составила 0,125, в контроле - 0,110 (р˃0,05) (табл. 30).

Межэтнических различий в частоте аллелей и генотипов (-308G˃A) ге-

на TNFA у больных БА не установлено (р>0,05).

Не выявлено достоверно значимых ассоциаций в частоте аллелей и ге-

нотипов полиморфизма (-308G˃A) гена TNFA со степенью тяжести заболева-

ния, возрастом манифестации заболевания (до 6 лет), повышенным уровнем

IgE в сыворотке крови у бурят и русских, больных БА (р˃0,05).

Полученные результаты согласуются с данными исследователей, не обнаруживших ассоциации полиморфизма гена TNFA с развитием БА у ки-

тайцев и малазийцев; тайваньских и корейских детей и подростков с БА [215, 267, 360], не определивших ассоциацию со степенью тяжести заболевания у англичан, бельгийцев [143, 271], с повышенным уровнем IgE у азиат - китай-

цев и корейцев [215, 267, 247], у европеоидов - австралийцев, бельгийцев, че-

хов [153, 271, 291], что диктует целесообразность проведения анализа ассо-

циаций полиморфных вариантов гена TNFA отдельно в каждой этнической группе.

Глютатионтрансфераза М1, кодируемая геном GSTM1, относится к ферментам второй фазы биотрансформации ксенобиотиков. Высокое содер-

жание глутатиона определяется в слизи, покрывающей цилиндрический эпи-

телий бронхов, основной функцией которого является мукоцилиарный кли-

ренс [60]. Глутатион-S-трансферазы помимо детоксикации участвуют в био-

синтезе и метаболизме лейкотриена B4 и простогландина Е2, обладающих

137

хемотаксическим действием для нейтрофилов [318].

При анализе полиморфного варианта гена GSTM1 не определено ассо-

циации данного ДНК-локуса с бронхиальной астмой у обследованных под-

ростков, бурят и русских. Сравнительный анализ частоты нулевого генотипа

GSTM1 (0/0) у больных БА и в контрольной группе у бурят (0,353 и 0,420) и у русских (0,472 и 0,420) статистических различий не выявил (р˃0,05) (табл.

30). Межэтнических различий в частоте генотипов по гену GSTM1 у больных БА не установлено (р>0,05).

Не выявлено достоверно значимых ассоциаций в частоте аллелей и ге-

нотипов гена GSTM1 со степенью тяжести заболевания, возрастом манифе-

стации заболевания (до 6 лет), повышенным уровнем IgE в сыворотке крови у бурят и русских, больных БА (р˃0,05).

Полученные нами результаты об отсутствии ассоциации нулевого ге-

нотипа GSTM1 с БА, с тяжестью заболевания согласуются с данными других исследователей [54, 55, 182, 213, 254, 276, 339].

Таким образом, нами показано, что бронхиальная астма у бурят ассо-

циирована с генами NOS3 (VNTR) и GSDMB (rs7216389), у русских - с генами

NOS2 (CCTTT)n и GSDMB (rs7216389).

Выявлены аллели и генотипы повышенного риска формирования БА,

одинаковые для обеих изучаемых этнических групп - носительство аллеля Т и гомозиготного генотипа T/Т полиморфизма rs7216389 гена GSDMB. В тоже время установлены и этнические различия. Так, маркерами повышенного риска заболевания бронхиальной астмой являлись у бурят - носительство ал-

леля *4 и генотипов 4/4 и 4/5 гена NOS3 (VNTR), а у русских - аллелей, со-

держащих короткое число тандемным повторов (CCTTT)n гена NOS2.

Показаны межэтнические различия между больными БА при сравнении генов. Частота минорных (мутантных) аллелей и генотипов NOS3 (VNTR),

NOS2 (CCTTT)n, GSDMB rs 2305480, FCER2 (T2206C) оказалась выше у рус-

ских, больных БА.

138

Не выявлено достоверно значимых ассоциаций изучаемых генов-

кандидатов с тяжестью заболевания у бурят и русских, больных БА (р˃0.05).

Установлена ассоциация аллеля rs7216389*С GSDMB с ранним нача-

лом (до 6 лет) бронхиальной астмы у бурят.

Определена ассоциация минорного аллеля C гена FCER2 (T2206C) с

повышенным уровнем IgE в сыворотке крови у русских, больных БА.

Полученные межэтнические различия ассоциаций генов-кандидатов с формированием БА, с возрастом манифестации заболевания и повышенным уровнем IgE могут обусловливать особенности регуляции иммунных меха-

низмов, играющих роль в патогенезе БА.

5.2 Анализ взаимосвязей генов-кандидатов предрасположенности к табакокурению THOI и CHRNA5 у больных бронхиальной астмой и здо-

ровых подростков бурят и русских

Нами проведено исследование ассоциаций аллелей и генотипов по 2

генам-кандидатам табакокурения у 168 респондентов бурят и 86 русских.

При анализе распределения частот генотипов полиморфизма THOI

(STR) у бурят и русских в контрольных группах и у больных БА не выявлено отклонения от равновесия Харди-Вайнберга (HWE) (табл. 34).

Исследована ассоциация полиморфизма коротких тандемных повторов,

расположенного в 1-м интроне HUMTHOI, или микросателлита THOI (STR),

гена тирозингидроксилазы человека (TH), с развитием БА. Фермент тирозин-

гидроксилаза превращает тирозин в ДОФА, лимитирует скорость всего про-

цесса биосинтеза катехоламинов и ингибируется его конечными продуктами

[136, 319].

В выборке бурят выявлено 5 аллелей и 15 генотипов, у русских 5 алле-

лей и 13 генотипов по STR полиморфизму гена THOI. Ввиду большого числа установленных генотипов (15) гена THOI (STR) аллели с числом повторов меньше ≤ 9 обозначены как «короткие» аллели (S), аллели с числом повторов

139

9.3 и более, как «длинные» аллели (L), соответственно генотипы обозначены как SS, SL, LL.

При анализе STR полиморфизма THOI не установлено ассоциации дан-

ного ДНК-локуса с развитием бронхиальной астмы у бурят и русских (табл.

34).

При сравнении больных БА, бурят и русских, выявлены достоверные различия в частоте длинных аллелей L. У русских частота аллеля L выше

(0,181), чем у бурят (0,074; р=0,02). При анализе частот отдельных аллелей и генотипов определены также достоверные различия. Аллель *8 у бурят

(0,184) встречался чаще, чем русских (0,056; p=0,011); аллель *9.3 у русских

(0,181) - чаще, чем у бурят (0,074; p=0,02); частота генотипа *6/*7 у русских больных БА выше (0,278), чем у бурят (0,044; p=0,0011) (табл. 34).

Не выявлено ассоциации гена THO1 с тяжестью заболевания в обеих изучаемых этнических группах; у бурят, больных БА, - с началом заболева-

ния до 6 лет и повышенным уровнем IgE (р˃0,05).

У русских больных раннее начало БА связано с аллелем L, содержа-

щим тандемные повторы 9.3 гена THO1, (0,262 против 0,067; р=0,03;

ОШ=4,97; 95%ДИ [1,01-24,38]) (табл. 32).

При анализе микросателита THOI (STR) определена ассоциация с по-

вышенным уровнем IgE у русских, больных БА. Частота аллеля S, содержа-

щего короткие тандемные повторы (6-9), у больных с высоким содержанием

IgE выше (0,941), чем у больных с нормальным содержанием IgE – 0,711

(р=0,01; ОШ=6,52; 95%ДИ [1,3-32,0]). Частота генотипа SS гена THOI (STR)

составила 0,882 у больных БА с повышенным уровнем IgE и 0,526 c нор-

мальным содержанием IgE, различия достоверны (р=0,02; ОШ=6,75; 95%ДИ

[1,2-38,0]) (табл. 33).

Ген ацетилхолинового никотинового рецептора CHRNA5 относится к генам-кандадатам никотиновой зависимости и ХОБЛ у взрослых.

При анализе распределения частот генотипов полиморфизма rs16969968 гена CHRNA5 у бурят в контрольных группах и у больных БА не

140

выявлено отклонения от равновесия Харди-Вайнберга (HWE), однако опре-

делено некоторое отклонение от равновесия в контрольной группе русских подростков (избыток гетерозигот; р<0,0001)).

Анализ полиморфизма rs16969968 гена CHRNA5 выявил ассоциации данного ДНК-локуса с бронхиальной астмой у русских больных БА; у бурят ассоциации с заболеванием не определено.

Выявлены достоверные различия в частоте аллеля G полиморфизма rs16969968 гена CHRNA5 у русских больных по сравнению с контролем

(0,806 и 0,560, соответственно; р=0,0014, ОШ=3,26; 95 %ДИ [1,6-6,6]). Гомо-

зиготный генотип GG полиморфизма rs16969968 гена CHRNA5 у русских больных с БА встречался чаще, чем в контроле (0,667 и 0,120, соответствен-

но; p<0,0001). Носительство гомозиготного генотипа GG полиморфизма rs16969968 гена CHRNA5 является фактором повышенного риска развития БА у подростков русской национальности (ОШ=14,67; 95%ДИ [4,9–44,0]).

Значимых различий в частоте аллелей и генотипов rs16969968 гена

CHRNA5 у бурят с БА не выявлено. Межэтнических различий частот аллелей и генотипов по данному гену у больных БА также не установлено (табл. 34).

Не определено достоверно значимых ассоциаций в частоте аллелей и генотипов полиморфизма rs16969968 гена CHRNA5 со степенью тяжести за-

болевания, возрастом манифестации заболевания (до 6 лет), повышенным уровнем IgE в сыворотке крови у бурят и русских, больных БА (р˃0.05).

Таким образом, нами не выявлено ассоциации STR полиморфизма гена

THOI с бронхиальной астмой у бурят и русских.

Генетическими факторами повышенного риска развития БА у русских являются аллель G и гомозиготный генотип GG полиморфизма rs16969968

гена CHRNA5.

Определены межэтнические различия у больных БА в частоте аллеля

*9.3 STR полиморфизма гена THOI: у русских частота аллеля *9.3 выше

(0,181), чем у бурят (0,074; р=0,02).