Дефекты методики окрашивания препаратов крови по романовскому-гимза и их устранение

Хараутер дефекта

Внешний вид

препарата

Вид окрашенных элементов крови и паразитов при

микроскопировании

Меры предупреждения и исправления

дефектов

Кислая реакция краски.

Препарат макроскопически розового цвета.

Тонкий мазок - эритроциты ярко-розовые, специфическая зернистость не выявляется, паразиты плохо различимы, ядра лейкоцитов и паразитов окрашены слабо, цитоплазма паразитов имеет розовый оттенок.

Толстая капля – не достигается полный гемолиз эритроцитов. Интенсивно розовый фон. Ядра паразитов сливаются с цитоплазмой.

Проверить рН буферного раствора.

Препараты перекрасить после предварительного обесцвечивания.

Для обесцвечивания:

Свежеприготовленные препараты - погрузить в дистиллированную воду, при сильном перекрашивании в воду добавить 1% раствор уксусной кислоты (1-2 капли на 50 мл воды).

Ранее приготовленные препараты - смочить ватный тампон смеси Никифорова, 1-2 раза осторожно провести по препарату. Сразу после обработки результат проконтролировать под сухой системой микроскопа (окуляр 7, объектив 40), в случае необходимости обработку повторить.

Необходимо иметь в виду, что улучшить качество окраски возможно преимущественно в случае “тонкого мазка”. “Толстые капли” плохо поддаются переокраске. При повторной окраске время окрашивания должно быть сокращено.

Избыточно-щелочная реакция краски.

Препарат макроскопически синего цвета без фиолетового оттенка.

Тонкий мазок – эритроциты голубые или синие, зернистость пораженных эритроцитов выявляется с трудом. Ядра лейкоцитов и паразитов окрашены в синий цвет и с трудом отличимы от цитоплазмы.

Толстая капля – все элементы имеют синюю окраску. Ядро и цитоплазма паразита дифференцируется с трудом.

Проверить рН буферного раствора или качество отмывки предметных стекол от щелочи; заведомо щелочные стекла (синего цвета) не использовать.

В случае необходимости попытаться перекрасить препарат. (см. выше)

Недостаток азура в краске Романовского.

Препарат макроскопически синего цвета

Азурофильные элементы окрашены плохо; отсутствует характерный фиолетово-красный цвет ядер паразитов и лейкоцитов, а также специфической зернистости пораженных эритроцитов.

В рабочий раствор добавить синьку Мансона. Препараты дополнительно докрасить. (см. выше)

Недокрашен-ные препараты.

Препарат макроскопически бледный.

Форменные элементы крови, их структуры и все структуры паразита бледные. Паразиты выявляются с трудом только по пигменту.

В тонком мазке специфическая зернистость эритроцитов плохо прокрашена или не прокрашена

Докрасить тонкий мазок в течение 20-30 минут, толстую каплю в течение 10-15 минут.

Перекрашен-ные препараты.

Препарат макроскопически темно-фиолетовый.

Тонкий мазок – ядра лейкоцитов чернильного цвета, бесструктурные, ядра паразитов часто неотличимы от темно окрашенной цитоплазмы.

Толстая капля - паразиты становятся похожи на обломки ядер лейкоцитов.

В случае необходимости перекрасить препараты. (см. выше)

Аутофиксиро-ванная “толстая капля”.

Препарат макроскопически имеет металлический оттенок.

Гемолиз в процессе окраски не достигается. Микроскопия таких препаратов практически невозможна. Плотный фон состоит из многослойно расположенных эритроцитов.

Этот дефект неустраним. Для предупреждения следует:

1. Окрашивать свежеприготовленные “толстые капли”;

2. Исключить возможность аутофиксации толстых капель. (см. стр. 22)