Фиксация “тонких мазков”

1. Фиксацию мазков проводят в одном из спиртовых растворов: метиловом - 1-2 минуты, этиловом - 10 минут, смеси Никифорова - 20 минут.

2. Мазки погружают и извлекают из фиксирующей жидкости пинцетом.

3. Препараты по окончании фиксации, высушивают на воздухе.

Препарат “толстая капля” не фиксируют !

При длительном хранении (особенно в жарком климате) неокрашенных “толстых капель” может произойти их аутофиксация. При необходимости хранения “толстых капель” для предотвращения аутофиксации препараты до окраски следует обработать забуференным раствором метиленового синего (1 г метиленового синего + 3 г Na₂HPO₄ + 1 г КН₂РО₄ + 300 мл дистиллированной воды). “Толстую каплю” после высыхания погружают в этот раствор на 1 секунду, промывают водой и высушивают. В таком виде каплю можно хранить длительное время. Перед исследованием окрашивают по Романовскому меньше, чем обычное время - в течение 6-10 минут.

Окраска препаратов крови

Одним из основных условий правильной паразитологической диагностики малярии является качественная окраска препаратов крови.

Приготовление рабочего раствора краски Романовского-Гимза

Для окрашивания препаратов крови используется 5-10% рабочий раствор краски Романовского-Гимза.

1. Маточный раствор краски Романовского (промышленного изготовления или приготовленный из сухой краски) перемешать и обязательно профильтровать;

2. Приготовить 5% (10%) рабочий раствор краски: к 95 (90) мл буферного раствора добавить 5 (10) мл маточного раствора краски, что соответствует 1 - 2 каплям краски на 1 мл раствора;

3. Готовый рабочий раствор перемешать;

4. При необходимости ускорения окраски можно использовать более концентрированный раствор, сократив время окраски.

Рабочий раствор для окраски препаратов крови использовать только свежеприготовленный!

Качество каждой новой серии краски необходимо оценить. С этой целью производят пробную окраску препаратов “тонкого мазка” и толстой капли крови от здорового человека (если нет крови с малярийными паразитами). Концентрацию рабочего раствора и время окрашивания можно подобрать самостоятельно, так как они зависят от качества исходного раствора краски и от температуры окружающей среды.

Показатели качественного окрашивания. Правильно окрашенный препарат макроскопически имеет синий цвет с сиреневым оттенком, а при его микроскопии:

• ядра лейкоцитов фиолетово-красного цвета с различимой структурой;

• зернистость базофилов фиолетового цвета;

• зернистость эозинофилов красного цвета;

• у моноцитов на фоне серо-голубой цитоплазмы - может быть розовая зернистость;

• зрелые эритроциты - розового цвета с сероватым оттенком;

• ретикулоциты - сиренево-голубые;

• тромбоциты – сиренево-розового цвета с различимой сетчатостью

Иногда в фабричных сериях маточного раствора краски Романовского недостаточно азура, что обусловливает слабое окрашивание азурофильных элементов (ядер малярийных паразитов и лейкоцитов, зернистости пораженных эритроцитов и лейкоцитов). Результаты окрашивания мазков и капель могут быть значительно улучшены при добавлении к рабочему раствору краски Романовского так называемой синьки Мансона, которую готовят впрок следующим образом: 1.5 г метиленового синего и 2.5 г буры растирают в ступке и добавляют к 100 мл дистиллированной воды. Для созревания флакон с краской оставляют на 10-12 дней при комнатной температуре. Процесс созревания можно ускорить, поместив флакон на водяную баню на 40-60 минут при 60-80.