Раствор не кипятить!

Синька Мансона при хранении в темном сухом месте пригодна к использованию в течение многих лет. Количество краски Мансона, добавляемое к рабочему раствору краски Романовского, устанавливают опытным путем: нередко достаточно добавить к 1 л рабочего раствора несколько капель краски.

Способы окрашивания и промывки “тонкого мазка” и “толстой капли” по Романовскому-Гимза

Окрашивание препаратов крови можно проводить двумя способами:

1. Препараты крови вертикально погружают в рабочий раствор краски, налитый в специальные ванночки или контейнеры, без соприкосновения друг с другом. Данный способ окраски наиболее приемлем, когда есть необходимость окраски большого количества препаратов крови. В стандартном контейнере можно окрасить 20 препаратов при вместимости 90 мл краски. Повторное использование краски может привести к ее истощению, которое не всегда можно предусмотреть, что отрицательно отразится на окрашивании последующих препаратов.

2. Препараты располагают горизонтально (мазками вверх) на стеклянных рельсах, лежащих на кюветах. Осторожно наносят краску. Этот способ окраски чаще применяют, при окрашивании небольшого количества препаратов крови. Расход краски составляет примерно 4 мл на 1 препарат.

Данный способ окраски требует тщательной фильтрации маточного раствора краски, так как есть вероятность выпадения осадка на препарат крови. что приведет к трудности в диагностике кровепаразитов при микроскопии.

Время окрашивания зависит от температуры окружающей среды. При температуре 20-23 “тонкий мазок” окрашивают - 40-50 минут, “толстую каплю” - 20-25 минут. При более низкой температуре - время окрашивания увеличивают. При очень высокой температуре (около +30) - время окрашивания капель, но не мазков, может быть сокращено до 15 минут. “Толстые капли”, предварительно обработанные забуференным раствором метиленового синего, окрашивают 6-10 минут.

При подозрении на малярию препараты крови помечаются “cito!” Окрашиваются и исследуются немедленно.

Ошибки при окраске препаратов крови и способы их устранения приведены в таблице 1 Приложения I.

Способ промывки “тонких мазков”, фиксированных до окраски - под струей воды или погружением в емкость, не имеет значения, важно только не обесцветить препарат.

При промывке “толстых капель”, особенно свежеприготовленных, необходима осторожность, так как капли могут оторваться от стекла. Препарат медленным движение погружают в емкость с чистой водой 1-2 раза.

Микроскопия окрашенных препаратов крови

Препараты крови исследуют под микроскопом с применением масляной иммерсии: объектив 90 или 100, окуляр 7.

Сначала микроскопируют “толстую каплю”, затем для уточнения вида возбудителя - “тонкий мазок”.

При низкой паразитемии исследование только “тонкого мазка” может привести к гиподиагностике малярии.

В толстой капле паразиты распределены неравномерно. Поэтому проводят перекрестный просмотр 200-300 полей зрения препарата, что занимает примерно 10 мин¹. Целесообразно также обратить внимание на краевую зону, более тонкую часть «толстой капли», где эритроциты могут располагаться в 1 слой и может выявляться не только относительно неизмененная морфология паразита, но и пораженного эритроцита. Если вероятность малярии у пациента велика, а паразиты не выявляются, рекомендуется не увеличивать время просмотра той же самой капли, а просмотреть вторую каплю.

Препарат считается отрицательным, если паразиты не обнаружены после просмотра 200-300 полей зрения “толстой капли”.

После первого обнаружения паразитов исследование продолжают, чтобы не пропустить смешанную инфекцию, а также, чтобы убедиться в наличии или отсутствии гаметоцитов, что имеет важное прогностическое значение в случае тропической малярии.