Приготовление буферного раствора

Необходимые реактивы:

1. Дистиллированная вода - 1 л.

2. Фосфат калия однозамещенный безводный - KH₂PO₄ - 0.27 г.

3. Фосфат натрия двузамещенный безводный - Na₂HPO₄ - 0.67 г.

Техника приготовления:

1. Соли растворить в дистиллированной воде (1/3 объема) комнатной температуры, после полного растворения довести до метки (1,0 л).

2. Приготовленный раствор должен иметь рН 7,0  0,2. Точное соблюдение требуемой реакции буфера важно для правильной окраски. Если рН<6.8, то следует добавить Na₂HPO₄, если рН>7.2, то добавляется KH₂PO₄. Количество реактивов, необходимых для доведения pH, подбирается опытным путем.

Буферный раствор следует хранить в хорошо закупоренной посуде в холодильнике (до 1 месяца). Для приготовления краски используется буферный раствор комнатной температуры.

Нельзя использовать буферный раствор с осадком, который после окраски затрудняет просмотр препарата и даже может привести к диагностическим ошибкам.

Режим и правила работы в лабораториях, выполняющих исследования крови на малярию

Возбудители малярии относятся к 3-й группе возбудителей патогенных микроорганизмов, что определяет режим работы КДЛ ЛПУ, ведомственных учреждений, паразитологических лабораторий (подразделений) Центров Госсанэпиднадзора.

Лаборатории ЛПУ и других организаций, имеющих лицензию на лабораторную деятельность, должны получать разрешение сроком на 5 лет на право выполнять работу с возбудителями 3-4 групп патогенности от режимной комиссии территориальных центров Госсанэпиднадзора.

Личная гигиена лаборанта

1. Работа с кровью проводится обязательно в резиновых перчатках.

2. После работы следует вымыть руки с мылом под проточной водой, затем обработать ватным тампоном с 70% спиртом (можно использовать дезсредства для гигиенической и хирургической обработки рук, например: “Велтосепт”, “Асептинол С”).

3. При длительной микроскопии лаборанту для профилактики утомляемости глаз необходимо делать зарядку, попеременно прикрывая рукой один глаз, при этом другим смотреть вдаль на деревья, дома и т. п.

4. Необходимо иметь индивидуальные шкафы для халатов, сменной обуви и для личной одежды; перед выходом из лабораторного помещения снимать лабораторные халаты.

Правила дезинфекции при работе с препаратами крови

1. На рабочих столах должны быть емкости с дезрастворами для полного вертикального погружения пипеток, предметных стекол, лабораторной посуды и т.п., используемых при работе с кровью.

2. Исследуемый материал (сгустки крови, нефиксировованные и неокрашенные препараты крови) обезвреживают автоклавированием или с применением дезрастворов.

3. Рабочие поверхности лабораторных столов обрабатывают 70% спиртом.

4. Дезрастворы готовят в соответствии с приложением 5.4. к Санитарным правилам ОП 1.2.011-94.

Взятие проб крови для исследования на малярию

1. Кровь для паразитологического исследования берут из пальца руки (у взрослых - обычно безымянного, у детей - из большого), у новорожденных детей - из большого пальца ноги (но не мочки уха).

2. Периферическую кровь для исследования берут вне зависимости от температуры и клинических проявлений.

3. Для прокола кожи пальца используют стерильные одноразовые скарификаторы или специальные стерильные разового использования иглы.

4. В целях безопасности пациента взятие крови на малярию производят на стерильные предметные стекла, так как во время взятия крови возможно их касание к месту прокола.

5. Перед проколом кожу пальца тщательно протирают ватным тампоном смоченным в 70% спирте, чем достигается не только предупреждение инфицирования места прокола, но и попадание с кожи пальца бактерий, различных посторонних частиц на препарат крови, которые могут затруднить диагностику при микроскопии.

6. Первую каплю крови, выступившую после прокола, вытирают сухим стерильным ватным тампоном, чтобы избежать фиксации эритроцитов остатками спирта, которым дезинфицировали кожу.

7. Последующие капли (выступающие самостоятельно или при надавливании на палец массирующими движениями) используются для приготовления препаратов крови. При этом кровь забирают в стерильный сухой гематологический капилляр, из которого быстро переносят на предметное стекло, либо выступившую кровь непосредственно наносят на предметные стекла . Если кровь набирают в капилляр, то можно использовать нестерильные стекла.

8. Из крови, нанесенной на предметные стекла, от одного пациента готовят не менее 2-4 “толстых капель” - по две на стекле и 2 “тонких мазка” крови.

При косвенных показаниях о наличии малярии у обследуемого,

но отрицательном первичном результате, кровь исследуют повторно через каждые 6-12 часов в течение 2-х суток.

ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПРЕПАРАТОВ КРОВИ, ИХ МАРКИРОВКА И ФИКСАЦИЯ

Существует несколько методик. Некоторые из них приводятся ниже.