Принцип метода паразитологической диагностики малярии

Паразитологическая диагностика малярии основана на обнаружении бесполых и половых форм возбудителя при микроскопическом исследовании крови, что возможно только в период его развития в эритроците. Для обнаружения плазмодиев и определения вида используют препараты крови “тонкий мазок” и “толстая капля”, окрашенные по Романовскому-Гимза. Оба метода, имеющие свои преимущества и недостатки, являются взаимодополняющими.

Основной метод - “толстая капля”. Благодаря распределению относительно бóльшего объема крови на меньшей площади, за один и тот же промежуток времени просматривается количество крови в 30-40 раз большее, чем в “тонком мазке”, что значительно повышает шанс обнаружения паразитов, особенно при низкой паразитемии. Начинать надо всегда с просмотра “толстой капли”.

Чувствительность метода “толстой капли” такова, что при просмотре 100-150 полей зрения можно обнаружить около 8 паразитов в 1 мкл крови. Концентрация исследуемой крови на ограниченной площади приводит к многослойному расположению эритроцитов. Для того, чтобы паразиты были видимы, “толстую каплю” окрашивают нефиксированной; это приводит к гемолизу эритроцитов и паразиты подвергаются деформации. Несмотря на определенную специфичность, такая деформация иногда может препятствовать идентификации вида паразита. Ограничиться просмотром “толстой капли” можно только, если вид паразита был первоначально установлен. “Толстая капля”, относительно быстро, может позволить выявить и других паразитов крови: трипаносом, микрофилярий, спирохет, бабезий и др. Отрицательный паразитологический результат изучения “толстой капли”, но обнаружение повышенного содержания лейкоцитов, их видовой состав, а также повышенное содержание остатков незрелых эритроцитов, позволяют быстро предположить иное заболевание, не связанное с малярией.

В “тонком мазке”, фиксированном до окраски, сохраняются морфологические особенности как пораженного эритроцита, так и присущие данному виду паразита. Большое значение для дифференциального диагноза имеет характер изменения пораженных эритроцитов. “Тонкий мазок” крови делают в дополнение к “толстой капле” при:

• подозрении на малярию у лиц, прибывших из эндемичных по малярии районов ближнего и дальнего зарубежья;

• массовых обследованиях, когда обнаружены малярийные паразиты, но вид не установлен;

• в специальных целях, например, для изучения изменения морфологии паразита при воздействии разных противомалярийных препаратов.

Необходимые реактивы и оборудование

1. Этиловый спирт-ректификат 96.

2. Азур-эозин по Романовскому-Гимза, маточный раствор или сухая краска.

3. Метиленовый синий.

4. Глицерин.

5. Тетраборат натрия (бура).

6. Калий фосфат однозамещенный безводный - KH₂PO₄.

7. Натрий фосфат двузамещенный безводный - Na₂HPO₄.

8. Смесь Никифорова (смесь этилового спирта и эфира в равных частях).

9. Дистиллированная вода.

10. Индикаторная бумага (диапазон pH 5.0-8.0).

11. Детергент.

12. Фильтровальная бумага.

13. Мерная посуда: цилиндры на 10 и на 100 мл, колба на 1 л, сосуды для промывания препаратов крови.

14. Фарфоровая ступка.

15. Аптечные весы.

16. Эмалированные кюветы.

17. Пинцеты.

18. Часы песочные или сигнальные.

19. Мостики или специальные контейнеры для окрашивания препаратов крови.

20. Емкости для фиксации “тонких мазков”.

21. Приспособление для высушивания препаратов крови.

22. Скарификаторы одноразовые.

23. Стерильные марлевые шарики.

24. Перчатки резиновые.

25. Стерильные предметные стекла.

26. Микроскоп (монокуляр или бинокуляр) с осветителем, объективом 90 или 100 , окуляром 7.

27. Термостат на 37.

28. Холодильник.