Химико-седиментационный метод

Необходимые реактивы и оборудование

1. Азотнокислый натрий

2. Раствор уксусной кислоты 1 %-ный

3. Раствор уксусной кислоты 10 %-ный

4. Эфир этиловый медицинский

5. Ареометр

6. Воронки стеклянные

7. Марля (бинт)

8. Центрифужные пробирки

9. Предметные и покровные стекла

10. Пипетки стеклянные

11. Стеклянные или деревянные палочки

12. Центрифуга

13. Микроскоп

Подготовка к работе

Приготовить рабочие растворы:

1) азотно-кислого натрия с удельным весом 1,15

• готовят из расчета 800—900 г вещества (необходимо подобрать количество индивидуально, т. к. химическое вещество из разных расфасовок может дать разный удельный вес) на 1 л горячей воды в эмалированной посуде, соль кладут в емкость с горячей водой порциями при подогревании на плите и постоянном помешивании до полного растворения;

• после остывания приготовленного раствора проводят измерение удельного веса ареометром при комнатной температуре.

Если раствор готовится заранее, необходимо приготовить с более высоким удельным весом, т. к. уже через 24 ч удельный вес начинает падать;

2) растворы уксусной кислоты 1 %-ный и 10 %-ный.

Ход исследования

• В градуированную центрифужную пробирку налить 6 мл рабочего раствора азотнокислого натрия.

• В другую пробирку налить 7 мл 1 %-ного раствора уксусной кислоты.

• В пробирку с уксусной кислотой внести пробу фекалий 0,5—1 г (до отметки 7,5— 8 мл).

• Тщательно перемешать фекалии стеклянной палочкой.

• Процедить через воронку с одним слоем марли (бинта) в пробирку с азотно-кислым натрием.

• Центрифугировать при 1500—2000 об/мин в течение 5 мин.

• Слить надосадочную жидкость из пробирки.

• В пробирку с осадком добавить 3—4 мл 10 %-ного раствора уксусной кислоты и 0,5 мл эфира.

• Закрыть резиновой пробкой и, придерживая пробку, энергично встряхнуть (в вытяжном шкафу).

• Провести повторное центрифугирование в течение 1 мин.

• Слить надосадочную жидкость.

• Осадок перенести на предметное стекло пипеткой.

• Каплю (или несколько капель) осадка накрыть предметным стеклом.

• Микроскопировать при увеличении: объектив х 8 или х 10, окуляр х 7 или х 10; для уточнения морфологического строения яиц гельминтов - объектив х 40.

Эффективность метода

• После дополнительной обработки осадка химреактивами в нем остаются только яйца гельминтов, что облегчает их выявление.

• По эффективности выявления примерно одинаков с уксусно-эфирным осаждением, но более трудоемок.

Применение метода

• Применяется для выявления яиц гельминтов кишечника, печени.

Примечание. В основе методов седиментации (осаждения) лежит разность удельного веса используемых химреактивов и яиц гельминтов, когда удельный вес яиц большой и они концентрируются в осадке.