Глава 6, Заметка 8b. Спектральный анализ

В сотрудничестве с Carlos Huesca-Mejia и Priscilla Teitelbaum мы изучили несколько тысяч проб препаратов липидов путем спектрального анализа, в ультрафиолете и первой порции видимого света, a также, реже - в инфракрасном свете, используя спектрофотометр Beckman. Здесь мы приведем лишь некоторые главные выводы, к которым мы пришли.

1) Учитывая методики химической изомеризации, мы смогли показать важность температуры, которая применялась при обработке смеси жирных кислот. Конъюгация in vitro, обычно происходящая с этиленгликолем или глицерином в качестве растворителей, как было установлено, приводит к образованию препаратов со слишком малыми количествами тетра-, пента- и гексаеновых членов. Сравнительно быстрое исчезновение конъюгированных образований с 4, 5 и 6 двойными связями, как было показано, было индуцировано высокой использованной температурой. Это побудило нас использовать новый метод конъюгации, при более низких температурах. Используя этиловый спирт в качестве растворителя, получены препараты с высокими конъюгированными образованиями.

2) Мы использовали спектральный анализ для количественного определения не только ди-, три- и тетраенов, как выполняют обычно, но также и для пентаенов и гексаенов. С этой целью мы определяли коэффициент затухания, соответствующий указанным пентаеновым и гексаеновым образованиям. Это оказалось возможным благодаря выделению соответствующих пентаеновых и гексаеновых конъюгированных членов с помощью подходящих растворителей.

3) Мы изучили разные материалы и, особенно, разные органы для того, чтобы провести корреляцию их обогащенности в разных жирных кислотах с их биологической активностью, используя спектральный анализ конъюгированных in-vitro жирных кислот, как приведено выше.

4) Идентично, мы попытались провести корреляцию существования характерных пиков в кривой спектрального анализа неомыляемых фракций органов с их биологической активностью.

5) Мы использовали спектральный анализ для изучения эффектов разных агентов, таких как хлор, серная кислота или кислород, в отношении жирных кислот.

6) Мы показали, что минимальные изменения индуцированы в неполярных группах конъюгированных жирных кислот путем изменения их полярной группы с карбоксила на первичный спирт благодаря обработке литиево-алюминиевым гидридом.

7) Мы изучили влияние, оказываемое конъюгированными жирными кислотами на канцерогены. Его можно частично выявить по охлаждающему действию, индуцированному в отношении флуоресценции агентов, указанных последними.

8) Мы предприняли широкое исследование влияния, оказываемого облучением в отношении жирных кислот in-vitro и in-vivo. Это влияние характеризовалось появлением конъюгированных триенов и представлено в Главе "Облучение" и в других Заметках.

Заметка

627

Глава 6, Заметка 8c. Фракцонирование жирных кислот испарением

В группе экспериментов для изучения жирных кислот мы применили газовую хроматографию. Главной целью считали исследование ценности информации, предоставляемой указанным методом, о наличии конъюгированных жирных кислот. Это исследование выполнено в сотрудничестве с Ivan Bier и Winston Dindial, которые готовили пробы.

Были получены метиловые эфиры элеостеариновой кислоты, линолевая кислота и ее конъюгированные изомеры; из жирных кислот льняного масла и конъюгированный препарат; из жирных кислот жира печени трески и конъюгированные препараты; а также пробы жирных кислот, полученные от животных и из тканей при нормальных и ненормальных состояниях. Путем парового фракционирования мы анализировали указанные разные препараты в качестве таковых, препараты, полученные путем конденсации на холодных пальцах во время дистилляции в вакууме при разных температурах, a также различные фракции, полученные путем дистилляции в вакууме. Для всех указанных тестов мы использовали паровой фракционизатор Perkin-Elmer с колонкой из сукциниловых полимеров, нагретых до 235°C. При указанных условиях между соответствующими конъюгированными и неконъюгированными веществами различий не выявлено. РИС. 250 и 251 демонстрируют примеры таких анализов препарата жирных кислот жира печени трески и препарата, полученного после обработки гидроокисью калия в бутиловом спирте.

РИС. 252 демонстрирует спектральный анализ продукта, указанного последним. При условиях проведенного анализа метод газовой хроматографии не позволяет провести идентификацию присутствующих конъюгированных изомеров. В этом состоит причина, почему указанный аналитический метод не может указать на присутствие подобных членов в материалах, полученных в ненормальных условиях. Конъюгированные изомеры могут быть идентифицированы другими методами—такими как спектральный анализ и, особенно, щавелевокислотный показатель—после окислительного расщепления.

Сейчас мы пытаемся получить колонки, позволяющие работать при много больших температурах, что позволит нам идентифицировать указанные конъюгированные жирные кислоты. В связи с тем, что для анализа требуется лишь минимальное количество материала, а достигаемая степень точности при этом достаточна, приспособление указанного метода для идентификации конъюгированных членов будет представлять особую ценность.