5. Возбудитель паратуберкулеза. Морфология, культивирование, биохимические свойства. Устойчивость во внешней среде. Патогенез. Микробиологическая диагностика. Иммунитет.

Род: Mycobacterium.

Вид: Myc. paratuberculosis.

Паратуберкулез - хроническая инфекционная болезнь, характеризующаяся сначала периодическим, затем постоянным расстройством деятельности желудочно-кишечного тракта, истощением и летальным исходом.

Восприимчивые животные.

Myc. paratuberculosis поражает крупный рогатый скот (особенно молодняк), буйволов, верблюдов, овец и коз.

Патогенез и факторы вирулентности:

заражение происходит алиментарным путем;

Myc. paratuberculosis проникает в ворсинки кишечника где фагоцитируется (фагоцитоз незавершенный) и вызывая деструктивные изменения, приводит к нарушениям функции желез кишечника;

основными факторами вирулентности являются эндотоксины.

Возбудитель (М. paratuberculosis) — тонкие палочки с закругленными концами, длиной 0,5—1,5 мкм, шириной 0,2 —0,5 мкм. Способны сохраняться в навозе до 8 мес, в речной, прудовой воде до 5,5—9 мес, рассеянный солнечный свет убивает их через 10 мес. Очень медленно (до 4—6 мес) растут на яичных и других специальных питательных средах с добавлением фактора роста — экстракта из М. phlei.

Эпизоотологические данные. В нашей стране паратуберкулез в основном проявляется в виде спорадических случаев среди крупного рогатого скота, чаще встречается у овец. Источник возбудителя — больные животные, выделяющие микобактерии задолго до проявления клинических признаков, факторы передачи — инфицированные корма, вода, почва. Заражается молодняк с первых дней жизни (телята до шестимесячного возраста) исключительно алиментарным путем.

У молодняка верблюдов болезнь проявляется в 2—3-летнем возрасте, олени болеют в возрасте 2 лет и старше.

Патогенез. Микобактерии задерживаются в заднем отрезке тонких кишок, попадают в ворсинки, где захватываются макрофагами и размножаются в них, вызывая пролиферацию эпителиоидных клеток. Процесс с пораженных ворсинок распространяется на слизистую оболочку, подслизистый слой, брыжеечные лимфатические узлы и сосуды, вызывая нарушение секреторной и всасывающей функции кишечника. Установлены также генерализованные формы болезни с поражением паренхиматозных органов.

Клинические признаки. Инкубационный период может быть от 10 мес до 6 лет и более. Болезнь, особенно у овец, в основном протекает бессимптомно, клинические признаки проявляются большей частью при ухудшении условий содержания, после отела (окота). Наряду с диареей и истощением наблюдают отеки в области подчелюстного пространства, подгрудка, живота.

Патологоанатомические изменения. У крупного рогатого скота их обнаруживают в тощей и подвздошной кишках, мезентериальных лимфатических узлах и сосудах. Слизистая оболочка кишок утолщена в несколько раз, собрана в толстые, извилистые поперечные и продольные складки, обильно покрытые вязкой слизью. Пораженные участки кишечника чередуются с неизмененными. Складки при разглаживании не расправляются, слизистая оболочка серо-белого цвета с участками гиперемии и точечных кровоизлияний, илеоцекальный клапан отечный, темно-красного или багрового цвета с синюшным оттенком.

Утолщение слизистой оболочки обусловлено развитием в ней специфической грануляционной ткани, состоящей в основном из эпителиоидных, а также из лимфоидных и плазматических клеток. Встречаются также гигантские клетки и клетки типа Лангганса. В брыжеечных лимфатических сосудах образуются гранулемы, лимфатические узлы увеличены, содержат серо-белые очаги различной величины, состоящие из эпителиоидных клеток.

У овец наряду с поражением кишечника нередко обнаруживают в брыжеечных лимфатических узлах и сосудах обызвествленные казеозные очаги. Такие же очаги могут быть и в глубоких слоях слизистой оболочки кишечника.

Диагноз. Применяют туберкулиновую пробу с использованием туберкулина для птиц, серологический метод (РСК), микроскопию комочков слизи из фекалий и соскобов прямой кишки. Микобактерии в мазках, окрашенных по Цилю-Нильсену, темно-красного цвета, расположены обычно большими скоплениями, кучками, палисадами. Состояние сенсибилизации и наличия специфических антител в крови не постоянно, РСК более эффективна и специфична, чем туберкулиновая проба.

Решающими в установлении диагноза служат результаты патологоанатомического и лабораторного исследований. Определяют характер изменений, проводят микроскопию материала из пораженных участков на микобактерии и гистологическое исследование. Культуральные методы исследования обычно не применяют в связи с трудностью получения и поддержания культур, особенно от овец. Отсутствие надежной лабораторной модели препятствует применению и других бактериологических методов исследований.

Профилактика и меры борьбы в основном направлены на уничтожение больных животных и защиту молодняка от заражения. Во многих странах молодняк животных вакцинируют аттенуированными штаммами возбудителя паратуберкулеза или культурами вирулентных штаммов, инактивированными теплом, в смеси с адъювантом.

Иммунизация в раннем возрасте достаточно надежно предохраняет животных от заболевания. После введения вакцины развивается состояние повышенной чувствительности к туберкулину для млекопитающих и в крови появляются антитела, что создает препятствие к исследованию животных на туберкулез аллергическим и серологическим методами. В нашей стране иммунизация против паратуберкулеза не проводится.

Методы диагностики.

Бактериологическая диагностика.

Материал для исследования:

кал, пораженные участки слизистой тонкого кишечника, комки слизи, брыжеечные лимфатические узлы.

Микроскопия.

методы окраски:

по Цилю-Нильсену и Граму.

микрокартина:

Myc. paratuberculosis длиной 0,5-1,5, шириной 0,2-0,5 мкм. Располагаются бактерии в виде глыбок, кучек, редко встречаются поодиночке или по 2-4 клетки.

грамположительны;

спор не образуют;

капсул не образуют;

неподвижны.

Культивирование.

посев на питательные среды:

плотные (яичные среды Петраньяни, Гельберта, Левенштейна, агаризированная среда Сотона) и жидкие (Данкина, Вишневского, Дорсета, Бокэ, Генлея) с экстрактом бактерийной массы микобактерий тимофеевой травы (Mic. phlei);

особенности выделения возбудителя:

аэроб;

оптимальная температура 38oС;

срок культивирования от 6 нед до 7 мес;

для дифференциации Myc. paratuberculosis от других кислотоустойчивых микобактерий высевают материал после обработки 5 %-ным раствором серной кислоты на элективные и обычные питательные среды. Культуры атипичных микобактерии вырастают относительно быстро в течение первых 3 сут, иногда через 10 сут. Микобактерии туберкулеза, находящиеся в материале, отличаются от паратуберкулезных своим расположением, а также специфической патогенностыо для лабораторных животных.

культуральные свойства:

на плотных питательных средах вначале возникают изолированные серовато-желто-белые маленькие колонии. С течением времени появляется складчатое наложение;

на жидких средах Myc. paratuberculosis образует нежную беловато-сероватую пленку, которая через 3-4 мес культивирования увеличивается в объеме и падает на дно пробирки.

Биопроба.

лабораторные животные невосприимчивы.

Устойчивость.

В почве и навозе Myc. paratuberculosis сохраняется до 10-12 мес, в кормах и воде непроточных водоемов - 8-10 мес, в моче - 7 дней. Солнечный свет убивает возбудителя через 10 мес. В молоке в закрытых сосудах при нагревании до 63 оС Myc. paratuberculosis гибнет через 30 мин, при 65 оС - через 25 и при 85 °С - в течение 1-5 мин.Для дезинфекции рекомендуют 10 %-ный и 20 %-ный растворы хлорной извести, 5 %-ный раствор формалина и лизола, феносмолина, фенолятов натрия.

Серологический метод:

в сыворотке крови животных при помощи РСК обнаруживают комплементсвязывающие антитела. Эта реакция подтверждает клинические формы паратуберкулеза у 85 % исследуемых животных.

Аллергический метод:

- паратуберкулезный скот реагирует на альттуберкулин для птиц в 80 % и на паратуберкулин (ионии) в 94 % случаев. Кроме этого, используют альттуберкулин для птиц и стандартный сухой очищенный (ППД) туберкулин для птиц. Крупный рогатый скот исследуют двойной внутрикожной аллергической пробой. Реакцию учитывают после первого введения через 48 ч с помощью измерения величины кожной складки кутиметром. Положительной реакцией считают появление на месте введения туберкулина разлитого отека без строгой конфигурации и границ, размерами приблизительно 35х45 - 100х120 мм и больше, напряженного в центре и тестоватой консистенции по краям, горячего па ощупь и болезненного при дотрагивании. Животным, давшим сомнительную реакцию и нереагирующим, альттуберкулин вводят повторно. Реакцию учитывают через 24 ч.

6. Возбудитель эмфизематозного карбункула. Морфология, культивирование, биохимические свойства. Устойчивость во внешней среде. Восприимчивость сельскохозяйственных жи­ вотных. Факторы патогенности. Антигенная структура. Патогенез. Микробиологическая диагностика. Иммунитет. Биопрепараты.

Эмфизематозный карбункул (Rauschbrand, Black leg, Gangrena emphysematosa) — инфекционная, неконтагиозная, энзоотически протекающая болезнь преимущественно крупного рогатого скота. Проявляется она крепитирующими отеками мышечной ткани и лихорадкой; известна с древнейших времен (до 70-х годов XIX в. ее отождествляли с сибирской язвой).

Возбудитель (Cl. chauvoei) — грамположительная (по мере старения в культуре появляются грамотрицательные клетки), подвижная палочка с закругленными концами, капсул не образует, строгий анаэроб. В мазках из патологического материала микробные клетки располагаются в виде одиночных или попарно лежащих палочек (реже цепочки из 2—4 члеников) и спор, которые находятся в центре или ближе к одному из концов палочки (центрально или субтерминально). Споры неопределенно длительное время сохраняют жизнеспособность в почве, что служит причиной стационарного неблагополучия отдельных участков ферм и пастбищ.

На МППБ – помутнение, осадок, газообразование незначительное. На сахарном кровяном МПА – колонии в виде “перламутровой” пуговицы, узкая зона гемолиза.

Микроб хорошо растет на жидких питательных средах с образованием газа, на агаре с добавлением глюкозы и крови барана образует следующие формы колоний: гладкие, выпуклые, блестящие, правильно контурированные (перламутровая пуговица) или плоские с изрезанными краями (виноградный лист).

Колонии окружены яркой зоной гемолиза. Cl. chauvoei разлагает с образованием кислоты и газа глюкозу, лактозу, мальтозу, сахарозу, галактозу, левулезу, но в отличие от Cl. septicum не разлагает салицилин. На мозговой среде растет без почернения субстрата.

Из лабораторных животных восприимчива морская свинка.

Наиболее восприимчив крупный рогатый скот в возрасте от 3 мес до 4 лет, чаще болеют животные в возрасте от 1 года до 1,5 лет. Значительно реже отмечают вспышки болезни у овец, у которых она протекает в форме раневой инфекции (злокачественный отек). Восприимчивы также буйволы, а из диких животных — лоси.

Источник возбудителя — больное животное, а основной резервуар его — почва, обсемененная спорами Cl. chauvoei. В естественных условиях животные заражаются при пастьбе по грубому травостою (стерне), который способствует травмированию слизистой оболочки ротовой полости и пищевода.

Образовавшиеся микротравмы (уколы, парезы, царапины) служат воротами, через которые споры микроба проникают в кровь и локализуются в мышечной ткани, где прорастают, размножаются, выделяя газ, токсины и агрессины. В результате образуется крепитирующий отек, возникает общая интоксикация, приводящая в 85—95 % случаев к гибели животного. Клинические признаки.

Инкубационный период – 2-5 дн. Болезнь протекает остро и сопровождается повышением температуры тела до 40-41оС. В течение первых 48 ч болезни в разных частях тела (чаще в ягодичной и бедренной группах мышц, шеи, подчелюстного пространства) образуются болезненные, плотные, горячие опухоли, издающие при надавливании хрустящие звуки (крепитация), которые в дальнейшем становятся холодными и малочувствительными. Кожа пораженных участков тела приобретает багрово-синюшный оттенок, волосы легко снимаются.

Животное часто погибает в первые 2—4 сут при явлениях угнетения и резкого ослабления сердечной деятельности.

Диагноз и дифференциальный диагноз основаны на анализе эпизоотологических, клинических данных, патологоанатомических изменений и результатов лабораторных исследований. Патологический материал (кусочки пораженных мышц, печени и отечный экссудат) отбирают из свежих трупов и в летнее время консервируют в 30 %-ном глицерине.

Исследуют мазки-отпе¬чатки из пораженных мышц, окрашенные по Граму или краской Муромцева. При микроскопии мазков в положительных случаях обнаруживают отдельные или попарно лежащие полиморфные, зернистые, грамположительные палочки или палочки со спорами. Споры могут лежать свободно.

Биопробу ставят на морских свинках, которых подкожно заражают суспензией из патологического материала или выделенной культурой возбудителя. Свинки погибают через 24—96 ч с момента заражения. При их вскрытии отмечают характерные изменения: мышцы брюшного пресса, груди, реже тазовых конечностей темно-красного цвета; в паховых и подмышечных областях незначительные скопления пузырьков газа, желчный пузырь переполнен. В мазках-отпечатках с диафрагмальной поверхности печени, окрашенных по Граму или краской Муромцева, обнаруживают отдельно лежащие палочки, редко цепочки из 2—4 члеников. Из сердца морской свинки, убитой в агональном состоянии, выделяют чистую культуру возбудителя.

Эмфизематозный карбункул необходимо отличать от злокачественного отека и карбункулезной формы сибирской язвы. При злокачественном отеке отсутствует крепитация, в мазках с поверхности печени — нити или длинные цепочки. При сибирской язве отеки также не крепитируют, в мазках из крови уха капсульные формы В. anthracis.

Иммунитет и средства специфической профилактики.

Для иммунизации используют концентрированную формолвакцину или живую вакцину из штамма 2/14. Прививают крупный рогатый скот в возрасте от 3 мес до 4 лет. Вакцины вводят внутримышечно, однократно по 2 мл. При использовании формолвакцины иммунитет наступает на 10—14-й день и длится 6—7 мес, формирование иммунитета при использовании живой вакцины заканчивается через 4—5 дн. с продолжительностью более одного года. Живую вакцину прививают крупному рогатому скоту один раз, а инактивированный препарат — дважды в течение одного года. Поэтому живую вакцину целесообразно применять в зонах, где пастбищный период более 6 мес. В начальной стадии болезни хорошим терапевтическим действием обладают: пенициллин в дозе 4—8 тыс. ЕД/кг, наиболее результативен дибиомицин в растворе глицерина в дозе 40 тыс. ЕД/кг. Препарат в лечебной концентрации сохраняется в организме животного 7—8 дн. Профилактика и меры борьбы. При возникновении болезни на хозяйство, ферму, отделение накладывают карантин и в дальнейшем поступают в соответствии с Инструкцией.

Эмкар (Эмфизематозный карбункул) - Cl. chauvoei.

Острое инфекционное заболевание КРС. Характерны отечные припухлости мышечной ткани. Восприимчивы КРС, реже – овцы и козы.

ТРУПЫ НЕ ВСКРЫВАТЬ(заражение почвы)!

В лабораторию кусочки пораженных мышц, экссудат из крепитирующего очага, кусочек печени, селезенка, кровь и сердце.

Палочки, располагаются отдельно, попарно, имеют форму веретена, шара, груши, споры центрально или субтерминально.

На МПА и МПБ не растет.

Среда Кита-Тароцци – пышный рост, газо-е, помутнение, потом рыхл белый осадок.

Агар Цейсслера – в форме круглой пуговицы или листа винограда колонии с зоной гемолиза.

Биохим – синтез протеазы(разжиж желатин), сахарозу, глюкозу, лактозу и пр до к-ты и газа.

Биопроба для окончательного диагноза.

Гр +, сп +, кп -, двж +.