9. Реакции лизиса (бактериолиза и гемолиза).

Для постановки реакции лизиса и реакции связывания комплемента (РСК) используют комплемент, который содержится в сыворотке крови морских свинок. Гемолитическая активность комплемента термолабильна и полностью утрачивается при прогревании сыворотки в течение 30 мин при 56°С. При адсорбции комплемента на комплексе антиген — антитело его действие проявляется в реакции лизиса антигена, если это клетки, или не сопровождается никакими видимыми изменениями, если это мелкодисперсные или растворимые антигены. Для учета результатов данной реакции РСК вводят вспомогательную (индикаторную) гемолитическую систему. Она состоит из взвеси эритроцитов барана в изотоническом растворе хлорида натрия и гемолитической сыворотки кролика, полученной путем его иммунизации упомянутыми эритроцитами. Положительная РСК характеризуется задержкой гемолиза вследствие адсорбции комплемента системой антиген — антитело (рис. 60). Отрицательная РСК характеризуется наличием гемолиза, поскольку свободный комплемент связывается с системой эритроциты барана — гемолитическая сыворотка кролика. РСК обладает высокой чувствительностью й специфичностью, что позволяет использовать ее для серодиагностики многих заболеваний, а также для выявления антигенов в крови больного. Кроме того, ее применяют для идентификации бактерий, вирусов и других антигенов.

10. Реакция связывания комплемента.

Реакция связ-ния комплемента

Сущность РСК в том, что если в сыворотке, полученной от больного животного, есть АТ, то они со специфическими АГ могут образовать комплекс, связывая комплемент, и гемолиза не будет, реакя «+»

Компоненты:

1. Сыворотки – исследуемая, позитивная и нормальная – в разведении 1:5 или 1:10, инактивные.

2. Антиген в разведении согласно титру.

3. Гемолизин (гемолитическая сыворотка).

4. Комплемент.

5. Эритроциты барана.

6. Физиологический раствор.

Этапы постановки РСК:

1.разведение и титрование гемолизина

2.титрование комплемента в гем. и бакт. системе.

3.проведение основной реакции.

Главный опыт РСК

Комплимент+сыворотка больного+антиген

+

Гемолизин+эритроциты барана= гемолиза нет, реакция «+», животное больное

Оценка реакции

++++ полное осаждение, нет гемолиза

+++ жидкость над осадком желтовата

+ резко выражен гемолиз – реакция «-»

Стандартная схема постановки РСК предусматривает проведение первой фазы —соединение антигена, испытуемой сыворотки и комплемента при 37°С в течение 30 мин. При постановке РСК на холоду эту фазу проводят при 0—4°С в течение 18—20 ч, что повышает чувствительность реакции.

Стандартная схема постановки РСК предусматривает проведение первой фазы —соединение антигена, испытуемой сыворотки и комплемента при 37°С в течение 30 мин. При постановке РСК на холоду эту фазу проводят при 0—4°С в течение 18—20 ч, что повышает чувствительность реакции.

После добавления в каждую пробирку по 0,4 мл гемолитической системы пробирки встряхивают и выдерживают 20—30 мин при 37°С. Результаты опыта оценивают, отмечая наличие или отсутствие гемолиза во всех пробирках (см. табл. 19): реакцию считают положительной при полной задержке гемолиза, когда жвдкость в пробирке бесцветна и эритроциты оседают на дно, отрицательной—при полном лизисе эритроцитов, когда жидкость интенсивно окрашена («лаковая кровь»). Степень задержки гемолиза оценивают в зависимости от интенсивности окраски жидкости и величины осадка эритроцитов на дне.