Оценка иммунорегуляторного звена. Показатели иммунорегуляторного звена иммунитета
настоящее время важное значение придают оценке иммунорегуляторного звена. Хотя до сих пор методы оценки числа и функций регуляторных Т-клеток трудоемки, некоторые из них находят применение в практике клинической иммунологии. Более доступны методы определения:
• соотношения числа CD4+ и CD8+ T-лимфоцитов; • соотношения про- и противовоспалительных цитокинов в сыворотке и различных биологических жидкостях; • количества регуляторных Т-клеток фенотипа CD4~ CD25 FoxP3 и их функциональных свойств при совместном культивировании с клетками-мишенями in vitro.
Соотношения числа CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов в периферической крови называют иммунорегуляторным индексом. В норме иммунорегуляторный индекс составляет 1,6-2,2. В зависимости от природы иммунопатологии значения этого показателя могут изменяться в сторону снижения (характерно для приобретенных форм иммунодефицитов, в частности для прогрессирующей ВИЧ-инфекции) или повышения (например, при аутоиммунных и других иммунопатологиях).
Возможные варианты соотношения иммунорегуляторных клеток были изображены авторами в виде «иммунологического компаса» . Принцип «иммунологического компаса» был воспроизведен в США [Ueno H. et al., 2007], но в основу его заложено соотношение между конкретной парой цитокина и его антагониста (например, ИФН-у и ИЛ-4, ФНО-ос и ИФН-а и др.).
Наиболее показательно соотношение между ИФН-у и ИЛ-4. При аллергопатологии обычно возрастает уровень ИЛ-4 (продуценты — Тh2-клетки), а при многих воспалительных заболеваниях — ИФН-у (продуценты — Тh1-клетки). Изменившееся под влиянием самых разнообразных факторов направление стрелки «иммунологического компаса» может служить важным показателем вмешательства в иммунорегуляторные механизмы. Приводим пример, как изменяются показатели «иммунологического компаса» при анализе соотношения между провоспалительным (ИЛ-8) и противовоспалительным (ИЛ-10) цитокинами в семенной жидкости больных хроническим бактериальным простатитом до и после лечения иммунотропным препартом суперлимфом.
В перспективе планируют оценивать соотношения между различными субпопуляциями CD4+ Т-клеток (Тh1, Th2, Thl7. Treg и др.) и соотношения цитокинов, определяющих их развитие.
Клеточно-цитокиновая сеть с ее саморегулирующимися механизмами создает основу для оптимального функционирования иммунной системы. В нормальных условиях изменения в этой сети могут легко компенсироваться за счет положительных или отрицательных взаимосвязей. Однако стойкие (патологические) сдвиги в регуляторной сети, выходящие за рамки самоконтроля, приводят к тяжелым заболеваниям иммунной системы. На декомпенсацию регуляторной сети могут влиять многочисленные факторы эндогенной (генетические, метаболические, гормональные и др.) и экзогенной природы (патогенные микроорганизмы, физические и химические воздействия, токсины и др.).
Поиск лекарственных средств для направленной коррекции конкретных клеточных и молекулярных дефектов в иммунорегуляции — одна из важнейших задач клинической иммунологии. В настоящее время разрабатываются методы генетической коррекции иммунопатологии.
Регуляторные функции клеток врожденного иммунитета (моноцитов/ макрофагов, нейтрофилов и др.) оцениваются в тестах на образование цитокинов, презентацию антигена (ДК) и др.
Т-звено
Исследование клеточного иммунитета необходимо для выявления первичного или вторичного иммунодефицитов, а также для контроля за проведением иммуностимулирующей терапии. Клеточный иммунитет представлен различными популяциями Т- и В-лимфоцитов, соотношение которых играет важную роль для оценки состояния этого звена иммунитета.
На своей поверхности В-клетки несут молекулы Ig, которые функционируют как рецепторы для Аг. Наряду с этим они имеют рецепторы к Fс-фраг-ментам Ig и к компонентам комплемента. В-система имеет непосредственное отношение к выработке Ig, ответственных за иммунные реакции организма. Сами по себе В-клетки неспособны распознать чужеродные Аг без Т-клеток.
Т-лимфоциты несут на своей поверхности маркёры — Аг, которые объединены в кластеры дифференцировки (CD). Т-лимфоциты выступают в роли первичных стимуляторов В-лимфоцитов и моноцитов крови, тканей. Это достигается либо посредством выделения ими гуморальных факторов (ИЛ и лимфокинов), либо путём прямого контакта с В-клетками. Для оценки Т-звена клеточного иммунитета исследуют количество Т-лимфо-цитов, Т-хелперов, Т-киллеров, Т-супрессоров, а также оценивают функциональную активность Т-лимфоцитов.
Фагоцитоз — это процесс « поедания» , поглощения клеткой (фагоцит), крупных частиц, видимых в микроскоп (например, микроорганизмов, крупных вирусов, повреждённых тел клеток и т.д.). Процесс фагоцитоза можно подразделить на две фазы. В первой фазе частицы связываются на поверхности мембраны. Во второй фазе происходят собственно поглощение частицы и её дальнейшее разрушение.
Исследование системы фагоцитоза помогает в диагностике вторичных иммунодефицитных состояний, приводящих к часто рецидивирующим гнойно-воспалительных процессам, длительно не заживающим ранам, склонности к послеоперационным осложнениям.
Наиболее информативным для оценки активности фагоцитоза считают: фагоцитарное число - среднее количество микробов, поглощённых одним нейтрофилом крови (характеризует поглотительную способность нейтрофилов, норма — 5-10 микробных частиц); количество активных фагоцитов — абсолютное количество фагоцитирующих нейтрофилов в 1 л крови (норма — 1,6-5,0х109 в 1 л крови); индекс завершённости фагоцитоза - отражает переваривающую способность фагоцитов (норма — более 1).
Фагоцитарная активность нейтрофилов обычно повышается в начале развития воспалительного процесса. Её снижение ведёт к хронизации воспалительного процесса и поддержанию аутоиммунного процесса, так как при этом нарушается функция разрушения и выведения иммунных комплексов из организма.
Для оценки "переваривающей" способности нейтрофилов используют НСТ-тест (НСТ - это нитросиний тетразолий). Поглощение фагоцитами микробов сопровождается повышением потребления кислорода этими клетками и образованием перекиси водорода и свободных радикалов кислорода (активных форм кислорода - АФК). Суть реакции состоит в том, что нитросиний тетразолий в присутствии активных форм кислорода окрашивается в синий цвет, а при их отсутствии остается бесцветным.
Повышение спонтанного теста с НСТ отмечают при антигеном раздражении вследствие бактериального воспаления (продромальный период, период острого проявления инфекции при нормальной активности фагоцитоза), хроническом гранулематозе, лейкоцитозе, усилении антителозависимой цитотоксичности фагоцитов, аутоаллергических заболеваниях, аллергии.
По реакции бластной трансформации лимфоцитов (РБТЛ), судят о функциональной активности Т- и В-лимфоцитов (способность Т-лимфоцитов к трансформации и размножению под воздействием антигенов, аллергенов и митогенов.), с использованием митогенов — ФГА, КонА, латекса, липополисахаридов и др.
Пролиферативный ответ лимфоцитов на антигены даёт представление о выраженности специфической сенсибилизации организма.
Повышение показателя возникает при: гиперактивности иммунной системы при аллергических и аутоиммунных заболеваниях, остром процессе первичной инфекции.
Вам необходима консультация иммунолога и получения рекомендаций перед планируемой беременностью.
Данные результаты иммунологического ответа могут быть связаны как с инфекционным процессом, так и с аутоиммунным заболеванием, проведение лечения и профилактики которых необходимо до беременности, во избежании невынашивания и осложнений беременности.
НСТ-тест - это тест восстановления нитросинего тетразолия. Он ставится для проверки способности врожденного механизма иммунитета, под названием фагоцитоз, убивать бактерии. Фагоцитоз - это поглащение клетками иммунной системы бактерий с их дальнейшим уничтожением и перевариванием. Когда фагоцит поглотил бактерию он старается ее убить. Это называется киллинг бактерий. Он бывает двух типов: кислородонезависимый и кислородозависимый. Сначала он пытается убить бактерии с помощью кислородонезависимого механизма. Это действие ферментов, катионных белков и др. веществ. Если это не помогает, то фагоцит прибегает к кислородзависимому киллингу. Он более сложный и энергозатратный, но когда приперает ..... Так вот, при задействовании этого механизма киллинга активируется специальный фермент - НАДФ-оксидаза, который приводит к появлению в фагоците активных форм кислорода - чрезвычано опасных и токсичных для клетки веществ (это супероксид-анион радикал, перекись водорода, радикал гидроперекиси и др.). Выброс таких веществ в клетке называется кислородный (респираторный) взрыв. Вот как раз его можно зарегестрировать с помощью НСТ-теста. При постановке этого теста к фагоцитам добавляют вещество нитросиний тетразолий, оно поглащается клеткой и в присутствии активных форм кислорода переходит в темно-синие окрашенное вещество - диформазан. Сам нитросиний тетразолий бледно-желтый. Вот такие темно-синие гранулы диформазана в клетке говорят об респираторном взрыве. Чем их больше, тем больше образовалось активных форм кислорода, тем сильнее кислородзависимый киллинг. НСТ-тест ставится в двух вариантах: спонтанный и индуцированный. При постановке спонтанного НСТ-теста фагоциты культивируют в присутствии НСТ без предварительной активации клеток, при проведении индуцированного НСТ-теста в среду культивирования добавляют активатор фагоцитарной реакции. Постановка НСТ-теста в двух вариантах позволяет рассчитать функциональный резерв клеток, который представляет собой разницу между числом (интенсивностью) индуцированных диформазанпозитивных клеток и количеством (интенсивностью) спонтанных диформазанпозитивных клеток. По мнению комитета экспертов ВОЗ, проба с нитросиним тетразолием (НСТ) является признанным показателем бактерицидной функции фагоцитов (1973 г.). Значения индуцированного НСТ-теста характеризуют активность фагоцитирующих клеток в присутствии антигенного раздражителя и рассматриваются как критерий их готовности к завершенному фагоцитозу. Спонтанный НСТ-тест позволяет оценить степень активации кислородзависимых механизмов киллинга неактивированных фагоцитов. Он характеризует степень активации внутриклеточных микробоцидных систем. Показатели НСТ-теста повышаются в начальный период острых бактериальных инфекций, при гнойно-воспалительных процессах, тогда как при подостром и хроническом течении инфекционного процесса они снижаются. Намного хуже снижение этого показателя, так как это говорит о недостаточности фагоцитоза.