Работа № 1. Определение скорости свертывания крови

Кровь, выпущенная из кровеносного русла, обладает способностью сверты­ваться. Свертывание крови - это биологический ферментативный процесс, играю­щий защитную роль и направленный на сохранение жизни организма. При нару­шении целостности кровеносного сосуда образуется сгусток - тромб, который закупоривает сосуд. Таким образом прекращается кровотечение и не происходит значительной потери крови.

Скорость свертывания крови зависит от взаимодействия свертывающих, противосвертывающих и фибринолитических факторов.

В клинической практике используют несколько методов определения скорости свертывания крови (см. ниже). Данные методы позволяют выявить лишь грубый дефицит факторов свертывания.

Объект исследования: кровь.

Оборудование: скарификатор, предметное стекло, часовое стекло, стеклян­ные палочки, капилляр Панченкова, секундомер, фильтровальная бумага, спирт, эфир, йод/вата.

Ход работы: Скорость кровотечения измеряется временем от начала появления крови из сосуда до образования сгустка.

1. Сделайте разрез кожи пальца обычным способом и поместите каплю крови, появившуюся из разреза, на предметное стекло. Через каждые 10 сек. наклоняйте стекло. Момент, когда капля при наклоне стекла не будет менять свою форму, соответствует началу свертывания крови (способ Ли - Уайта).

2. Каплю крови поместите на часовое стекло и осторожно помешивайте стек­лянной палочкой. Первая нить фибрина на палочке свидетельствует о начале свер­тывания крови (способ Моравица) Нормальные показатели скорости свертывания крови при использовании данного метода 5-8 мин при комнатной температуре.

3. Отметьте время прокола пальца, через каждые 10 сек. прикасайтесь к выпуклой поверхности капли крови фильтровальной бумагой. Отпечаток капли на бумаге с каждым прикосновением становится все меньше. Скорость свертывания отмечается временем от появления первой капли до прекращения появления следов крови на бумаге (способ Дюна). В норме скорость свертывания крови по способу Дюна составляет 4 мин.

4. На покрытое парафином часовое стекло поместите каплю вазелинового масла. Из пальца капилляром, предварительно смоченным изнутри вазелиновым маслом, возьмите каплю крови и поместите ее в каплю вазелинового масла на стекле. Каждые 2 мин кровь снова насасывайте в капилляр, выдувая ее обратно на часовое стекло. С момента свертывания насосать кровь становится невозможно. Заметьте время от момента взятия крови до начала свертывания. В норме у человека при температуре воздуха 15-20°С оно равно 8-12 мин (способ Маса и Марго). Сопоставить время свертывания крови, определенное каждым из описанных способов.

Рекомендации к оформлению результатов работы: запишите время свертывания крови.

Выводы и обсуждение результатов работы: сравните полученные вели­чины с нормой. Опишите нейрогуморальные механизмы стабилизации агрегатного состояния крови при временной активации свертывающей или противосверты-вающей систем.

Работа № 2. Механизм свертывания крови

Кровь, выпущенная в пробирку, образует кровяной сгусток, вокруг которого находится прозрачная жидкость - кровяная сыворотка. Сыворотка в отличие от плазмы не содержит белка - фибрина. Сгусток крови - это тесно переплетенные нити фибрина, между которыми «застревает» большое количество эритроцитов.

В реакции свертывания крови участвует ряд веществ, часть из них содержится в плазме, а часть - в форменных элементах крови. Белок фибрин растворен в плазме в неактивном состоянии (фибриноген) и активируется только при действии на него фермента тромбина. Последний тоже находится в плазме в неактивном состоянии (протромбин) и переходит в активный фермент - тромбин - при действии тромбопластина (так называемого фермента ферментов), который содержится в тромбоцитах, лейкоцитах, в стенках кровеносных сосудов и в мышечной ткани. Протромбин активируется при обязательном участии ионов кальция.

Если кровь, только что выпущенную из сосуда, взбивать специальной мете­лочкой, то происходит разрушение тромбоцитов и из них освобождается тромбо-пластин. Он переводит протромбин в тромбин и активирует фибриноген. Последний переходит в нерастворимое состояние, образуя тонкие белесоватые нити, которые извлекаются из крови при помешивании. Этот процесс называется дефибриниро-ванием крови.

При высокой температуре скорость свертывания крови увеличивается, при низкой замедляется. Цитрат и оксалат натрия (лимоннокислый и щавелевокис­лый натрий) способны присоединять ионы кальция, что предотвращает свертывание крови.

На основании такого свойства цитрат натрия используется при консервиро­вании крови. К веществам биологического происхождения, предотвращающим свер­тывание крови, относятся гирудин (вырабатывается у пиявок), гепарин (выраба­тывается в печени), змеиный яд и др.

Введение в кровь веществ, содержащих ионы кальция, экстрактов тканей, желатина и др., ускоряет свертывание крови.

Объект исследования: кровь животного.

Оборудование: 6 пробирок, из которых одна внутри покрыта парафином, центрифужная пробирка, пипетки, мерная пипетка, металлическая метелочка, центрифуга, 2%-ный раствор хлористого кальция, 5%-ный раствор лимоннокислого натрия, 10%-ный раствор гепарина.

Ход работы: 1. Пронумеруйте пробирки, начиная с парафиновой, на центри­фужной укажите номер 6.

2. В пробирку №4 налейте 1-2 капли раствора гепарина; в пробирку №5 - 0,5 мл 5%-ного раствора лимоннокислого натрия.

3. Возьмите кровь у животного и добавьте в пробирки согласно схеме:

№п/п	1	2	3	4	5	6	7
Объем крови, мл	1,5	1,5	2,5	1	4-5	-	-

4. Определите время свертывания крови в пробирках №1 и №2. Сравните полученные результаты.

5. Кровь в пробирке №3 взбейте метелочкой (10-15 мин) до образования нитей фибрина. Отмойте фибрин от форменных элементов крови. Рассмотрите сет­чатую структуру фибрина.

6. В пробирке № 4 пронаблюдайте воздействие гепарина на процесс сверты­вания крови.

7. В пробирке № 5 тщательно перемешайте кровь с раствором лимонно­кислого натрия. Отметьте влияние лимоннокислого натрия на процессы свертывания крови.

8. Отлейте из пробирки № 5 два мл крови в пробирку № 6 (центрифужная). Пробирку №6 отцентрифугируйте 5 мин при 1000 об/мин. Отсосите полученную плазму в пробирку № 7.

9. Добавьте по 1-2 капли раствора СаСЬ в пробирки № 5 и № 7. Наблюдайте образование соответственно красного и белого тромба.

Рекомендации к оформлению результатов работы: Опишите наблю­даемые явления в протоколе работы.

Выводы и обсуждение результатов работы: Опишите механизм процес­са свертывания крови. Укажите факторы, влияющие на скорость свертывания крови.