Работа № 3. Воспроизведение гемолиза вне организма

Гэмолизом называется выход гемоглобина в раствор, обусловленный повреж­дением оболочек эритроцитов. При этом кровь становится прозрачной, «лаковой». Различают несколько видов гемолиза: осмотический, механический, термический, химический и биологический.

Осмотический гемолиз, происходящий в гипотоническом растворе, объяс­няется тем, что вода, проникая в эритроциты, в конечном итоге приводит к разрыву их оболочек. Термический гемолиз, наступающий при промораживании крови, в сущ­ности сводится к механическому повреждению эритроцитов образующимися в них кристалликами льда. Химический гемолиз наступает в результате растворения бел­ковой или липидной части плазмалеммы эритроцитов щелочами, бензином, эфиром, хлороформом и т.д. Механический гемолиз наблюдается при длительных механи­ческих воздействиях на кровь (встряхивание, сдавливание). Биологический гемолиз наступает под влиянием специфических гемолизинов растительного (сапонин) или животного происхождения (яды пчелы, глистов, змей, бактериальные токсины).

Объект исследования: донорская кровь.

Оборудование: пробирки в штативе, 0,1н раствор НС1, 0,1н раствор МаОН, спирт, дистиллированная вода, 0,9% раствор №С1, пипетки.

Ход работы: 1. Поставьте 5 пробирок в штатив и пронумеруйте каждую из них восковым мелком. Налейте в каждую из них по 3 мл соответственно 0,1н раство­ра НС1, 0,1н раствора ЫаОН, спирта, дистиллированной аоды, 0,9% раствора 1МаС1.

2. Во все пять пробирок добавьте по 3 капли крови и встряхните пробирки, перемешивая содержимое.

3. Через 40-60 мин. наблюдайте за изменением цвета и прозрачности жидкости в пробирках.

Рекомендации к оформлению результатов работы: Определите нали­чие или отсутствие гемолиза в ка>едом случае:

1. Частичный гемолиз характеризуется окрашиванием раствора и появлением осадка неразрушенных эритроцитов.

2. Полный гемолиз определяется по интенсивности алой окраски и отсутствию осадка.

3. Об отсутствии гемолиза свидетельствует светлый прозрачный раствор и большое количество осадка.

Полученные результаты занесите в таблицу 12.

Таблица 12

Гемолиз вне организма

Варианты опыта	Окраска полученного раствора	Наличие осадка эритроцитов	Заключение о степени гемолиза
0,1 н раствор НС1 + кровь
0,1н раствор ЫаОН+кровь
Спирт + кровь
Диет, вода + кровь
0,9% раствор ЫаС! + кровь

Выводы и обсуждение результатов: опишите механизмы гемолиза для каедого случая.

Работа № 4. Определение осмотической устойчивости эритроцитов

Концентрация электролитов в плазме человека составляет около 0,9%. Эритроциты обладают избирательно проницаемой мембраной, которая пропускает воду, сахар, анионы и малопроницаема для катионов. Давление (Р - осмотическое давление, онкотическим давлением можно пренебречь) внутри эритроцитов обу­словлено электролитами, главным образом КС1. Р плазмы и Р эритроцитов взаимно уравновешены, их величина поддерживается постоянной и равняется 7,8 атм.

Растворы солей, Р которых равно Р внутри эритроцитов, называются изото-шшнескими. В них эритроциты сохраняют свою форму и величину. Таков, например, физиологический раствор. Растворы, Р которых больше Р внутри клетки, называ­ется гипертоническими. В них часть воды из эритроцитов выходит наружу и последние сжимаются. Растворы с Р меньшим, чем в эритроцитах, называются тектоническими. Эритроциты, помещенные в них, разрушаются (лопаются), и их пгцгришппг - гемоглобин - вытекает в раствор, т.е. происходит осмотический тшюлиз. В слабо гипотонических растворах эритроциты набухают, но не лопаются. В растворах с большей степенью гипотонии разрушению подвергаются не все Чршфоциты - частичный гемолиз. В сильно гипотонических растворах эритроциты ■юностью разрушаются - наступает полный гемолиз (лаковая кровь). Устойчивость здпроцитов к гипотонии носит название осмотической резистентности.

Объект исследования: донорская кровь.

Оборудование: штатив для пробирок, 8 пробирок, восковой карандаш, малы воронки, мерные пипетки, неградуированная пипетка, стеклянная палочка, 1%-ны раствор ЫаС1, дистиллированная вода.

Ход работы: 1. Приготовьте растворы №С1 различной концентрации, возь мите восемь пробирок и пронумеруйте их восковым карандашом. В каждую пробирк налейте дистиллированную воду и 1%-ный раствор №С1 (см. табл. 13). Для пр* готовления растворов используйте мерные пипетки. Причем сначала следует во вс пробирки налить воду, а затем раствор соли. Пробирки с раствором ЫаС! разместит в штативе по убывающей концентрации.

2. В каждую пробирку с помощью пипетки прибавьте по 3-5 капель (во вс пробирки одинаковое количество) приготовленной заранее крови (лишенной белк фибрина). Полученный раствор взболтайте, пробирки по номерам расставьте штативе на 1ч (при наличии центрифуги отцентрифугируйте в течение 5 мин).

Рекомендации к оформлению результатов работы: 1. Определите нал* чие или отсутствие гемолиза в каждом случае и полученные результаты занесите таблицу 13.

Таблица 1