2. Определение наличия спор мезофильных клостридий

Метод определения спор мезофильных клостридий заключается в посеве определенного количества исследуемого материала в регенерированную среду Китт-Тароцци, прогревании его при температуре 80⁰С в течение 20 мин, культивировании посевов при температуре 30⁰С в течение 5 суток и регистрации видимых признаков роста мезофильных анаэробных микроорганизмов.

Ход определения

1. Среду Китт-Тароцци прогреть в кипящей водяной бане в течение 20 мин, а затем охлаждают в струе холодной воды до температуры 40⁰С (среду, приготовленную накануне исследования, можно не регенерировать).

2. Приготовить три десятикратных разведения исследуемого материала.

3. В предварительно промаркированные пробирки с регенерированной средой Китт-Тароцци внести по 1 см³ 1-го,2-го и 3-го приготовленных разведений. Засеянные пробирки прогреть на водяной бане при 80⁰С в течение 20 мин, а затем охладить под струей холодной воды до 35-40⁰С. После охлаждения в пробирки внести стерильное вазелиновое масло слоем около 2 см..

4. Посевы инкубировать при температуре 30⁰С в течение 5 суток, ежедневно наблюдая за появлением признаков роста микроорганизмов (помутнение среды, образование газа).

5. В пробирках с наличием роста определить каталазу. Для этого из посева отобрать 2-3 см³ культуральной жидкости, перенести ее в стерильную пробирку и нейтрализовать 10%-ным раствором NaOH или 10%-ным раствором НCl (проверить индикаторной бумажкой). Затем на предметное стекло нанести 1-2 капли нейтрализованной культуральной жидкости, выдержать на воздухе 30 мин и добавить каплю 3%-ного раствора Н₂О₂. Если в течение 30-60 с пузырьки газа не появляются, то исследуемые микроорганизмы каталазу не продуцируют.

6. Из пробирок с наличием роста и негативной пробой на каталазу внести по 0,1 см³ культуральной жидкости в стерильные пробирки. Посевы залить расплавленным и охлажденным до 40⁰С питательным агаром с 1% глюкозы столбиком высотой 10-11 см.

7. После термостатирования пробирок при температуре 30⁰С в течение 24-48 отметить наличие характерного роста (в глубине столбика с образованием газа или разрыва среды)

8. Полученные результаты оформить в таблицу:

Таблица. 2. Наличие спор мезофильных клостридий во вспомогательных материалах

Наименование материала	Исследуемое количество. г	Рост в среде Китт-Тароцци	Каталаза	Рост в высоком столбике	Полученное значение	Нормативное значение	Заключение

3. Определение наличия стафилококков в растительном масле.

Ход определения

1. Использовать 5 стерильных пробирок с ватными тампонами. В каждую пробирку внести по 1 см³ исследуемой пробы растительного масла (масло нанести на поверхность ватного тампона так, чтобы оно полностью впиталось ватой).

2. Затем в засеянные пробирки внести солевой бульон в количестве 6-7 см³.

3. Посевы инкубировать при температуре 37⁰С в течение 48 ч.

4. Порядок дальнейших действий и оформление результата см. лаб. раб. № 4 (п.3).

Вывод. Сделать общий вывод о качестве вспомогательных материалов продукции по исследованным микробиологическим показателям.

Контрольные вопросы. 1. Какие санитарные требования предъявляются к вспомогательным материалам, поступающим на рыбопромышленные предприятия? 2. Как должны храниться вспомогательные материалы на предприятии? 3. С какой периодично осуществляют микробиологический контроль вспомогательных материалов? 4. По каким микробиологическим показателям контролируют различные виды вспомогательных материалов? 5. Как производится отбор проб различных видов вспомогательных материалов. 6. Как производится подготовка к микробиологическим анализам проб вспомогательных материалов? 7. По каким микробиологическим показателям контролируют пряности, поступающие на рыбообрабатывающие предприятия? 8. Как производят определение спор мезофильных клостридий во вспомогательных материалах? 9. Как производят определение Staphylococcus aureus в растительном масле? 10. Какие меры предпринимают на предприятии, если вспомогательные материалы по микробиологическим показателям не удовлетворяют нормативным требованиям?

Лабораторная работа № 7