Методична розробка по підготовці та роботі на лабораторному занятті №26 для студентів медичного факультету

Тема: Серологічні реакції в діагностиці вірусних інфекцій.

13. Актуальність теми. Взаємодія антигену з антитілом проявляється у формі різноманітних імунних, або серологічних реакцій. У зв’язку з їх високою чутливістю і специфічністю вони знайшли широке діагностичне застосування.

14. Цілі вивчення теми.

    0. Мета загальна. Ознайомитись із серологічними реакціями в діагностиці вірусних інфекцій.

    1. Мета конкретна. Знати диференційні ознаки серологічних реакцій які використовують для типування вірусів у досліджуваному матеріалі.

15. Забезпечення вихідного рівня знань-умінь.

Лекції „Віруси. Загальна характеристика. Біологічні властивості”, „Сучасні методи діагностики інфекційних хвороб”, „Імунітет. Особливості противірусного імунітету”.

3.2. Тести на вихідний рівень знань-умінь.

Приклад тесту.

Тест Компонентами реакції гем адсорбції є:

A. сироватка хворого, еритроцити барана

B. вірусний матеріал, тканинна культура, еритроцити курки

C. специфічні антитіла, вірусний матеріал, культура клітин

D. невідомий вірус, курячі еритроцити

E . культура клітин, еритроцити барана

Відповідь: B. Вірусний матеріал, тканинна культура, еритроцити курки

16. Зміст навчання.

    0. Граф логічної структури змісту.

    1. Серологічні реакції

Виявлення антитіл за допомогою ІФА ,РІА,РНГА.

Виявлення антигенів ІФА, РІА.

Молекулярно-генетичний метод.

Виявлення провірусу в лімфоцитах, вірусних нуклеїнових кислот в патологічному матеріалі за допомогою ЛПР.

0. Перелік теоретичних питань.

9. Основні принципи використання серологічних реакцій для діагностики вірусних інфекцій

10. РГГА.

11. Реакція нейтралізації.

12. ІФА.

13. Реакції імунодифузії.

14. Генетичні методи ідентифікації вірусів

0. Джерела навчальної інформації.

Література основна.

К.Д.Пяткін, Ю.С.Кривошеїн. Мікробіологія, К., 1982. – С. 385-391.

А.И.Коротяев, С.А.Бабичев. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. С.-Петербург, 2002. – С. 319-327.

І.С. Гайдаш, В.В. Флегонтова. Медична вірологія. Луганськ, 2002. – С. 195-213.

И.Л.Дикий и соавт. Микробиология, Харьков, 1999. – С. 375-387.

С.І.Климнюк та співавт. Практична мікробіологія. Тернопіль, 2004. – С. 375-379.

Література додаткова.

Мікробіологія, вірусологія, імунологія, інфекційні хвороби. Словник/ За ред Г.К.Палія, В.І.Палія. – Київ: Здоров'я, 2004. – С. 58, 122, 110-111.

Збірник завдань для підготовки до тестового екзамену з природничо-наукових дисциплін «Крок-1. Загальна лікарська підготовка» /Кол.авторів; За ред. В.Ф.Москаленка та співавт. – К.:Медицина, 2004. - С.328-331.

17. Орієнтовна основа дії.

Граф логічної структури дослідження

Серологічна діагностика.

РГГА, реакція нейтралізації, ІФА, реакції імунодифузії.

виявлення антитіл до певних вірусних білків за допомогою імуноблотінгу.

Молекулярно-генетичний метод.

Виявлення вірусних нуклеїнових кислот в патологічному матеріалі за допомогою ЛПР.

18. Система навчаючих завдань.

Приклади тестів.

Тест Для встановлення виду вірусу, який зумовив хворобу використовують

A. реакцію аглютинації

B. Реакцію непрямої гемаглютинації

C. Реакцію гальмування гемаглютинації

D. реакцію гемаглютинації

E. реакцію гемадсорбції

Відповідь: C. Реакцію гальмування гемаглютинації

19. Короткі методичні вказівки для роботи студентів на лабораторному занятті.

    0. Методика проведення заняття.

1. Ознайомитись з принципом постановки імуноферментного методу з метою виявлення специфічних -антитіл в сироватці крові хворого.

Для відтворення принципу ІФА на занятті в якості твердофазного носія використовуються планшетки з адсорбованими на дні луночок антигенами. Студенти в луночки вносять по одній краплі досліджуваних сироваток і вміщують планшетки в термостат на 30 хвилин (37С). Потім промивають буферним розчином і вносять мічені ферментом (пероксидазою хрону) антивидові (антиімуноглобулінові) сироватки. Планшети приміщують в термостат на 30-40 хвилин при температурі 37С. Промивають луночки буферним розчином, вносять по краплі перекису водню та ортофенілдіаміну (ОФД). Вміщують в термостат до появи жовтого забарвлення в луночці з контрольною позитивною сироваткою. Інтенсивність забарвлення корегує з кількістю приєднаного до твердої фази ензиму і відповідає кількості вірусспецифічних антитіл в досліджуваній сироватці. Схему реакції замалювати.

0. Організаційна структура проведення лабораторного заняття.

№ етапу	Етап роботи	Час (хв)	Засоби навчання	Обладнання	Місце прове-дення
1.	Організаційна частина	2			Учбова лабораторія
2.	Перевірка первинного рівня знань	15	Тестові завдання
3.	Інструктаж викладача. Викладач підкреслює актуальність теми. Пояснює етапи постановки ІФА для виявлення антитіл в сироватці пацієнта.	10	Таблиці: Схема постановки ІФА.
4.	Самостійна робота студентів.	40		Планшети (1:2). Досліджувана сироватка (1:2). АнтиIg сироватки з ферментом (1:2). ОФД, Н2О2 (1:2). Буферний розчин (1:2). Піпетки (5:2).
5.	Написання контролюючих тестів.	10	Тестові завдання
6.	Підведення підсумків, оцінка діяльності кожного студента	5-10
7.	Завдання для самостійної роботи при вивченні наступної теми	3

Автор: асистент, к.м.н. Бойко В.М.