- •Министерство здравоохранения рф
- •Оглавление
- •Тема 1. Морфология микроорганизмов. Микроскопический метод исследования микроорганизмов. Простые и сложные методы окраски бактерий Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Информация к занятию Этапы развития микробиологии
- •Предмет и задачи медицинской микробиологии.
- •Организация работы и оборудование микробиологической лаборатории, правила работы в ней.
- •Аппаратура, используемая в микробиологической лаборатории:
- •Устройство светового микроскопа. Сущность и техника иммерсионной микроскопии. Правила работы с микроскопом.
- •Морфология бактерий
- •Самостоятельная работа студентов
- •Правила работы в микробиологических лабораториях.
- •3. Освоение техники микроскопии с иммерсионным объективом:
- •Разрешающая способность иммерсионного микроскопа – 0,2-0,4 мкм.
- •5. Освоение техники приготовления мазка из агаровой культуры бактерий и окраски его простым способом.
- •Педиатрические аспекты
- •Тема 2. Морфология микроорганизмов. Структура бактериальной клетки Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Информация к занятию
- •Самостоятельная работа студентов
- •Тема 3. Морфология и классификация бактерий, спирохет, риккетсий, хламидий, микоплазм и актиномицетов.
- •Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Информация к занятию
- •Методы микроскопического исследования
- •Самостоятельная работа студентов
- •3. Выявление подвижности протея методом «раздавленной капли».
- •Информация к занятию
- •Самостоятельная работа студентов
- •2. Знакомство с методами асептики, антисептики, дезинфекции и стерилизации.
- •Тема 5. Физиология бактерий. Дыхание и размножение бактерий. Методы культивирования аэробов и анаэробов Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Рост и размножение микроорганизмов.
- •Дыхание бактерий
- •Самостоятельная работа студентов
- •2. Выделение чистой культуры анаэробных бактерий из почвы (демонстрация):
- •Тема 6.Физиология бактерий. Ферменты бактерий. Выделение чистых культур аэробных и анаэробных бактерий Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Информация к занятию Ферменты бактерий и методы их определения
- •Самостоятельная работа студентов
- •Тема 7. Ферменты бактерий. Бактериологический метод исследования. Итоговое занятие по теме "морфология и физиология микробов» Самостоятельная работа студентов.
- •Тема 8. Вирусы бактерий (бактериофаги) Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Информация к занятию
- •Самостоятельная работа студентов
- •Тема 9. Генетика микроооганизмов. Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Информация к занятию
- •Самостоятельная работа студентов
- •Тема 10. Экология микроорганизмов. Микр0флора организма человека. Микробиологические основы химиотерапии инфекционных болезней. Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Информация к занятию
- •Самостоятельная работа студентов
- •Педиатрические аспекты темы
- •Тема 11. Экология микроорганизмов. Микробиология воды, воздуха, почвы, пищевых продуктов Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Информация к занятию Распространение микробов в природе
- •Самостоятельная работа студентов
- •Самостоятельная работа студентов
- •Педиатрические аспекты темы
- •Тема 12. Учение об инфекции. Факторы патогенности бактерий. Роль макроорганизма, внешней среды и социальных условий в развитии инфекции. Формы инфекции Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Информация к занятию
- •Самостоятельная работа студентов
- •1. Освоение основных способов заражения лабораторных животных:
- •2. Изучение факторов патогенности микробов на примере St.Aureus.
- •Самостоятельная работа студентов.
- •Педиатрические аспекты темы
- •Тема 13. Учение об иммунитете. Виды иммунитета. Неспецифическая резистентность. Серологические реакции Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Информация к занятию
- •Самостоятельная работа студентов
- •Педиатрические аспекты темы
- •Тема 14. Учение об иммунитете. Серологические реакции. Антигены и их характеристика. Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Информация к занятию
- •Самостоятельная работа студентов
- •Педиатрические аспекты темы
- •Тема 15. Учение об иммунитете. Клетки иммунной системы. Иммунный статус организма человека и методы его оценки. Современные иммунологические методы Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Информация к занятию
- •Методы оценки иммунного статуса организма человека.
- •Самостоятельная работа студентов
- •Педиатрические аспекты темы
- •Тема 16. Учение об иммунитете. Специфическая профилактика и лечение инфекционных заболеваний. Диагностические биопрепараты. Аллергены Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Информация к занятию Медицинские иммунобиологические препараты для профилактики и лечения инфекционных болезней
- •Иммунные сыворотки и иммуноглобулины
- •Самостоятельная работа студентов
- •Педиатрические аспекты темы
- •Тема 17. Учение об инфекции и иммунитете. Практические аспекты иммунологии. Контрольное занятие (тестовый контроль и устное собеседование) Рекомендуемая литература
Самостоятельная работа студентов
1. Постановка и учет реакции связывания комплемента (РСК). Реакцию ставят в соответствии с таблицей 11. РСК протекает в две фазы. В первой фазе реакции участвуют антиген, антитело, комплемент. При соответствии антигена антителу образуется комплекс, связывающий комплемент. При отсутствии соответствия антигена и антитела комплемент остается свободным. Вторая фаза реакции (индикаторная) выявляет связывание комплемента и происходит между комплементом и реагентами гемолитической системы (смесь взвеси эритроцитов барана и гемолитической сыворотки). Если комплемент связан в первой фазе реакции, гемолиза эритроцитов под действием гемолизинов не происходит ( задержка гемолиза - реакция положительна); если комплемент свободен, наблюдается гемолиз (реакция отрицательна).
2.Постановка и учет реакции кольцепреципитации по Асколи. Реакция Асколи используется для выявления термостабильного антигена возбудителя сибирской язвы в материале (кожа, шерсть), подозрительном на загрязнение данными микробами.Техника постановки реакции: в преципитационную пробирку наливают цельную преципитирующую сибиреязвенную сыворотку в количестве 0,5 мл. Пастеровской пипеткой наслаивают по стенке пробирки 0,5 мл исследуемого антигена. Антиген готовят путем кипячения материала в растворе кислоты. В контрольную пробирку добавляют вместо антигена физиологический раствор. В случае положительного результата на границе антигена и сыворотки образуется преципитат в виде кольца.
3. Учет реакции преципитации в геле для определения токсигенности дифтерийных бактерий(демонстрация). Чашку Петри заливают питательным агаром, на дно чашки накладывают полоску фильтровальной бумаги, пропитанной противодифтерийной антитоксической сывороткой. Перпендикулярно полоске бумаги засевают исследуемую Таблица 11
Схема постановки реакции связывания комплемента
Компоненты реакции |
Опыт |
КПС |
КОС |
КС |
КА |
КК |
КГС |
Сыворотка больного 1:5, мл |
0,5 |
- |
- |
0,5 |
- |
- |
- |
Антиген в рабочем титре, мл |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
- |
0,5 |
0,5 |
- |
Комплемент в рабочей дозе, мл |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
Положительная сыворотка, мл |
- |
0,5 |
- |
- |
- |
- |
- |
Отрицательная сыворотка, мл |
- |
- |
0,5 |
- |
- |
- |
- |
Физиологический раствор |
- |
- |
- |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
1,0 |
Инкубация при 370 С в течение 30 минут | |||||||
Гемолитическая система |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
Инкубация при при 370 С в течение 30 минут, учет результатов |
Обозначения: КПС – контроль положительной сыворотки, КОС – контроль отрицательной сыворотки, КА- контроль антигена, КК – контроль комплемента, КГС – контроль гемолитической системы
Рис. 15. Реакция преципитации в геле для определения токсигенности дифтерийных бактерий |
4. Иммуноэлектрофорез (демонстрация).С помощью иммуноэлектрофореза анализируют различные антигены микробов и вирусов, антитела, сыворотку крови человека, ликвор и т.д. Исследуемый материал вносят в лунку, расположенную в геле на стеклянной пластине и разделяют его фракции электрофорезом. Затем в лунку, вырезанную в геле параллельно линии электрофоретической миграции белков, вносят сыворотки против антигенов, которые хотят обнаружить (например, против антигенов менингококка). Антитела сыворотки диффундируют в агар и в местах встречи с соответствующими антигенами образуют зоны преципитации в виде дуги.
5. Реакция нейтрализации токсина антитоксином при ботулизме (демонстрация).Реакцию ставят с фильтратом, полученным из консервов домашнего приготовления (например, из грибов), послуживших причиной отравления больного. К фильтрату добавляют поливалентную противоботулиническую сыворотку в разведении 1:40. Смесь выдерживают 2 часа при температуре 370С, вводят мыши внутрибрюшинно в объеме 0, 5 мл. Контрольной мыши вводят 0,5 мл фильтрата. Если токсин, содержащийся в фильтрате, соответствует сыворотке, то произойдет нейтрализация токсина и мышь не погибнет. Контрольная мышь погибает с явлениями параличей.
6. Учет реакции Кумбса (демонстрация).Реакция Кумбса позволяет выявить неполные (одновалентные) антитела, которые при соединении с эритроцитами, бактериями и риккетсиями не дают видимых эффектов реакции антиген-антитело. Прибавление кроличьей сыворотки против глобулинов человека приводит к агглютинации, т.к. антитела этой сыворотки бивалентны и взаимодействуют с неполными антителами, связанными с бактериями или эритроцитами, с образованием осадка.
Реакция Кумбса при бруцеллезе ставится в тех случаях, когда титр классического варианта реакции агглютинации меньше диагностического ( 1:100). Добавление в пробирки с отрицательными результатами антиглобулиновой сыворотки приводит к увеличению титра антител. Это связано с тем, что неполные антитела появляются в крови больных в более ранние сроки и в более высоких титрах, чем полные.
7. Реакция флоккуляции (демонстрация).В результате взаимодействия токсина или анатоксина с антитоксической сывороткой выпадают хлопья флоккулята. Наиболее интенсивная и ранняя (инициальная) флоккуляция происходит в пробирке, где антиген и антитело содержатся в эквивалентных соотношениях.
Реакцию ставят в два этапа. Сначала по стандартной сыворотке устанавливают пороговую величину флоккуляции Lf (Limesflocculationis) в 1 мл токсина.Lfтоксина определяется его минимальным количеством, которое дает инициальную флоккуляцию с 1 международной единицей (ME) сыворотки. Затем известной силы токсин и испытуемую антитоксическую сыворотку разливают в пробирки в определенном объеме, выдерживают в водяной бане при температуре 45 °С в течение 30 мин до выпадения хлопьев в одной из них.
Инициальная флоккуляция проявляется в той пробирке, где количество токсина соответствует количеству международных единиц сыворотки. Если флоккуляция произошла в 3-й пробирке, в 0,4 мл сыворотки находится 40 ME. Следовательно, 1 мл сыворотки содержит 40:0,4=100ME.
8. Антистрептолизиновая реакция (демонстрация).Реакция основана на феномене нейтрализации гемолитического действия микробного токсина (0-стрептолизина) антитоксическими антителами иммунной сыворотки.
Для постановки реакции предварительно определяют минимальную гемолитическую дозу токсина (0-стрептолизина), т.е. наименьшее его количество, которое вызывает гемолиз 0,2 мл 5% взвеси эритроцитов кролика. Затем определяют рабочую дозу 0-стрептолизина, т.е. наибольшее количество токсина, которое в смеси с 1 АЕ (антитоксической единицы) стандартной антитоксической сыворотки полностью нейтрализуется и не вызывает гемолиза эритроцитов. Для постановки основного опыта готовят разведения исследуемой сыворотки, к каждому из которых добавляют рабочую дозу токсина, инкубируют 45 мин при 370С, затем вносят равный объем взвеси эритроцитов и инкубируют 1 час при 370С и 18 часов при комнатной температуре. Обязательным является контроль на возможность спонтанного гемолиза эритроцитов. Положительная реакция характеризуется отсутствием гемолиза в результате нейтрализации стрептолизина (гемолизина) соответствующими антителами. Студенты производят учет демонстрационной реакции.
9.Реакция торможения гемагглютинации (РТГА - демонстрация)основана на взаимодействии вирусных антигенов (гемагглютининов) со специфическими антителами, в результате чего происходит блокада (торможение) гемагглютинирующей активности вируса.
Развернутую РТГА ставят в лунках полистироловых пластин. Предварительно определяют титр вирусного антигена в реакции гемагглютинации для подбора рабочей дозы. В лунках готовят 2-кратные разведения исследуемой сыворотки, добавляют равный объем взвеси вируса в рабочем разведении и инкубируют 2 ч при температуре 370С. Затем добавляют 1 % взвеси куриных эритроцитов, инкубируют 2 ч и оценивают результат по феномену торможения гемагглютинации. Положительная РТГА характеризуется образованием плотного осадка эритроцитов на дне лунки в виде диска или кольца с ровными краями. Титр антител определяют по последней лунке с положительной РТГА. Произвести учет демонстрационной РТГА.