2. Знакомство с методами асептики, антисептики, дезинфекции и стерилизации.

В протоколах в соответствии с таблицей 2 отразить способы и режимы стерилизации лабора­торной посуды, простых питательных сред, а также сред, содержащих углеводы и нативный белок.

3. Знакомство с бактериологическим методом диагностики инфекционных болезней.Этот метод заключается в выделении чистой культуры болезнетворного микроорганизма, являясь «золотым стандартом» в лабораторных микробиологических исследованиях и позволяя подтвердить диагноз многих инфекционных болезней. Установление причины инфекции позволяет обоснованно назначить лечение больному и провести адекватные противоэпидемические мероприятия.

4.Характер роста лактозоположительных и лактозоотрицательных бактерий кишечной группына средах Плоскирева, Левина, Эндо, МПА (демонстрация, рис. 25, см. приложение). Обратить внимание на цвет колоний. Резуль­таты занести в рабочую тетрадь.

5. Выделение чистой культуры аэробов из материала от возможного носителя стафилококка(самостоятельная работа).

Самостоятельная работа студентов заключается в обследовании друг друга на носительство золотистого стафилококка. С целью механического разобщения смеси микробных клеток произвести посев слизи из носа, взятой стерильным ватным тампоном, на поверхность пластинчатого МПА. При посеве максимально использовать площадь сектора питательной среды. Дно чашки Петри подписать карандашом по стеклу и сдать дежурному. Работа по выделению чистой культуры будет продолжена на следующем занятии. Выделение чистой культуры аэробов документируется по следующей форме:

Протокол № I Выделение чистой культуры аэробов со слизистой оболочки носа от потенциального носителя золотистого стафилококка

День исследования

Ход исследования

Результат исследования

Тема 5. Физиология бактерий. Дыхание и размножение бактерий. Методы культивирования аэробов и анаэробов Перечень конкретных учебно-целевых вопросов

1. Рост и размножение бактерий.

2. Дыхание микроорганизмов, классификация бактерий по способу дыхания.

3. Механизмы аэробного и анаэробного способов дыхания.

4. Характеристика роста бактерий на плотных и жидких питательных средах.

5. Методы выделения чистых культур аэробных и анаэробных бактерий.

Рост и размножение микроорганизмов.

Величину биомассы определяют по ее сухой массе, а также содержанию бактериального азота, белка, ДНК, фосфора.

Общее количество бактериальных клеток исследуют в счетных камерах, окрашенных мазках или по измерению светорассеяния.

В счетных камерах (например, Горяева) подсчитывают не менее 600 клеток в 10 большых квадратах, затем вычисляют среднее количество клеток в одном большом квадрате и рассчитывают концентрацию клеток в суспензии по формуле:

где X – число клеток в 1 мл суспензии, α – число клеток в одном большом квадрате, b – разведение.

При подсчете бактерий в окрашенных мазках микропипеткой наносят 0,01 мл бактериальной взвеси, площадью около 1 см² , мазок фиксируют, окрашивают, микроскопируют. Общее количество бактерий в 0,01 мл равняется числу клеток в поле зрения микроскопа, деленному на площадь зрения в квадратных см, вычисленную методом микрометрии.

Измерение светорассеяния основано на принципе пропорциональности количества света, рассеиваемого бактериальными клетками, к их концентрацией. На практике используют простой метод сравнения помутнения исследуемой бактериальной взвеси с известными по концентрации стандартами мутности, а также объективные нефелометрические методы с использованием фотоэлектроколориметров.

Подсчет живых бактерий осуществляется путем посева бактерий на питательные среды с последующим подсчетом количества колоний. Для этого посевной материал равномерно распределяют по поверхности хорошо высушенного питательного агара или посевной материал сначала смешивают с расплавленным агаром и разливают в пустые чашки, или на поверхность застывшего питательного агара в чашке Петри.