- •Министерство здравоохранения рф
- •Оглавление
- •Тема 1. Морфология микроорганизмов. Микроскопический метод исследования микроорганизмов. Простые и сложные методы окраски бактерий Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Информация к занятию Этапы развития микробиологии
- •Предмет и задачи медицинской микробиологии.
- •Организация работы и оборудование микробиологической лаборатории, правила работы в ней.
- •Аппаратура, используемая в микробиологической лаборатории:
- •Устройство светового микроскопа. Сущность и техника иммерсионной микроскопии. Правила работы с микроскопом.
- •Морфология бактерий
- •Самостоятельная работа студентов
- •Правила работы в микробиологических лабораториях.
- •3. Освоение техники микроскопии с иммерсионным объективом:
- •Разрешающая способность иммерсионного микроскопа – 0,2-0,4 мкм.
- •5. Освоение техники приготовления мазка из агаровой культуры бактерий и окраски его простым способом.
- •Педиатрические аспекты
- •Тема 2. Морфология микроорганизмов. Структура бактериальной клетки Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Информация к занятию
- •Самостоятельная работа студентов
- •Тема 3. Морфология и классификация бактерий, спирохет, риккетсий, хламидий, микоплазм и актиномицетов.
- •Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Информация к занятию
- •Методы микроскопического исследования
- •Самостоятельная работа студентов
- •3. Выявление подвижности протея методом «раздавленной капли».
- •Информация к занятию
- •Самостоятельная работа студентов
- •2. Знакомство с методами асептики, антисептики, дезинфекции и стерилизации.
- •Тема 5. Физиология бактерий. Дыхание и размножение бактерий. Методы культивирования аэробов и анаэробов Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Рост и размножение микроорганизмов.
- •Дыхание бактерий
- •Самостоятельная работа студентов
- •2. Выделение чистой культуры анаэробных бактерий из почвы (демонстрация):
- •Тема 6.Физиология бактерий. Ферменты бактерий. Выделение чистых культур аэробных и анаэробных бактерий Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Информация к занятию Ферменты бактерий и методы их определения
- •Самостоятельная работа студентов
- •Тема 7. Ферменты бактерий. Бактериологический метод исследования. Итоговое занятие по теме "морфология и физиология микробов» Самостоятельная работа студентов.
- •Тема 8. Вирусы бактерий (бактериофаги) Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Информация к занятию
- •Самостоятельная работа студентов
- •Тема 9. Генетика микроооганизмов. Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Информация к занятию
- •Самостоятельная работа студентов
- •Тема 10. Экология микроорганизмов. Микр0флора организма человека. Микробиологические основы химиотерапии инфекционных болезней. Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Информация к занятию
- •Самостоятельная работа студентов
- •Педиатрические аспекты темы
- •Тема 11. Экология микроорганизмов. Микробиология воды, воздуха, почвы, пищевых продуктов Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Информация к занятию Распространение микробов в природе
- •Самостоятельная работа студентов
- •Самостоятельная работа студентов
- •Педиатрические аспекты темы
- •Тема 12. Учение об инфекции. Факторы патогенности бактерий. Роль макроорганизма, внешней среды и социальных условий в развитии инфекции. Формы инфекции Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Информация к занятию
- •Самостоятельная работа студентов
- •1. Освоение основных способов заражения лабораторных животных:
- •2. Изучение факторов патогенности микробов на примере St.Aureus.
- •Самостоятельная работа студентов.
- •Педиатрические аспекты темы
- •Тема 13. Учение об иммунитете. Виды иммунитета. Неспецифическая резистентность. Серологические реакции Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Информация к занятию
- •Самостоятельная работа студентов
- •Педиатрические аспекты темы
- •Тема 14. Учение об иммунитете. Серологические реакции. Антигены и их характеристика. Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Информация к занятию
- •Самостоятельная работа студентов
- •Педиатрические аспекты темы
- •Тема 15. Учение об иммунитете. Клетки иммунной системы. Иммунный статус организма человека и методы его оценки. Современные иммунологические методы Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Информация к занятию
- •Методы оценки иммунного статуса организма человека.
- •Самостоятельная работа студентов
- •Педиатрические аспекты темы
- •Тема 16. Учение об иммунитете. Специфическая профилактика и лечение инфекционных заболеваний. Диагностические биопрепараты. Аллергены Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Информация к занятию Медицинские иммунобиологические препараты для профилактики и лечения инфекционных болезней
- •Иммунные сыворотки и иммуноглобулины
- •Самостоятельная работа студентов
- •Педиатрические аспекты темы
- •Тема 17. Учение об инфекции и иммунитете. Практические аспекты иммунологии. Контрольное занятие (тестовый контроль и устное собеседование) Рекомендуемая литература
Педиатрические аспекты темы
Внутриутробная инфекция, пути заражения плода.
Особенности инфекционного процесса в организме плода, у новорожденных и детей раннего возраста.
Тема 13. Учение об иммунитете. Виды иммунитета. Неспецифическая резистентность. Серологические реакции Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
Иммунология, ее предмет и задачи. Основные этапы развития учения об иммунитете. Иммунитет, его виды и формы.
Неспецифическая резистентность и ее механизмы. Факторы неспецифической резистентности.
Гуморальные факторы неспецифической резистентности. Система комплемента, пути его активации.
Фагоцитоз. Фагоцитирующие клетки. Основные стадии фагоцитоза и их характеристики. Завершенный и незавершенный фагоцитоз. Опсонины.
Антигены и их свойства. Полноценные и неполноценные антигены. Химическая природа антигенов, их структура и свойства.
Антигены млекопитающих (антигены групп крови, аутоантигены, эмбриоспецифические, опухолевые, трансплантационные антигены человека. Главный комплекс гистосовместимости, антигены гистосовместимости I и II классов).
Антигенная структура грамположительных и грамотрицательных бактерий, их локализация, химический состав.
Общая характеристика реакций антиген-антитело, стадии, механизмы. Серологический метод диагностики.
Реакция агглютинации (РА). Механизмы, диагностическое значение. Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) и коагглютинации. Агглютинирующие сыворотки и диагностикумы.
Информация к занятию
Понятие об иммунитете. Антигены и антитела Серологический метод исследования в микробиологии
Иммунитет (immunitas – освобождение от чего-либо) – совокупность реакций организма, направленных на сохранение его целостности при воздействии на него генетически чужеродных структур, в том числе микроорганизмов. Функции иммунитета выполняет иммунная система, состоящая из лимфоидной ткани.
Сопротивляемость организма к инфекции зависит не только от специфического ответа на определенный генетически чужеродный агент, но и от ряда неспецифических факторов - непроницаемости кожных и слизистых покровов для микроорганизмов, кислотности желудочного сока, присутствия в крови и других жидкостях организма (слюна, слезы и др.) бактерицидных систем (комплемент, пропердин, лизоцим). Важным фактором неспецифической защиты организма является фагоцитоз – процесс поглощения и переваривания генетически чужеродных веществ клетками- фагоцитами из системы макрофагов.
Специфический иммунный ответ в виде образования антител или специфических иммунных клеток развивается при действии антигенов.
Антигены — генетически чужеродные вещества, которые при введении в организм вызывают развитие специфических иммунологических реакций. Антигенами могут быть микробные токсины, другие яды, ферменты, полисахариды и комплексные вещества (липополисахариды, липопротеины, гликолипиды) и т. д. Антиген должен быть чужеродным для данного организма. Существуют неполноценные антигены (гаптены), которые не вызывают образование антител, но реагируют с ними. Основными свойствами антигена, помимо чужеродности, является достаточно большой размер молекулы и сложная структура.
Антигенная структура микробной клетки. У подвижных бактерий обнаружен жгутиковый термолабильный белковый Н-антиген (флагеллин). О-антиген является липопротеидным термостабильным антигеном клеточной оболочки, К-антиген (в том числе Vi- антиген вирулентных видов энтеробактерий) - капсульным полисахаридом. Токсины и ферменты бактерий, как и другие белки, являются полноценными антигенами. Антигены бактерий используют для создания вакцинных препаратов и серологической диагностики инфекционных болезней. На основании различий в химической структуре антигенов ряд микробных видов подразделяется на серовары.
Антитела — специфические белки крови, образующиеся в клетках лимфоидной ткани организма при введении антигенов и обладающие способностью вступать с ними в специфические реакции. Антигены, связанные с антителами (иммунные комплексы), обезвреживаются иммунными системами макроорганизма и удаляются из него.
Реакции иммунитета (серологические реакции). В связи с высокой специфичностью и чувствительностью реакции взаимодействия антигена и соответствующего ему антитела эти реакции широко применяются для лабораторной диагностики инфекционных болезней.
Серологические реакции применяют в двух направлениях: 1) для выявления антител в сыворотке больного с помощью известного антигена (серологический метод диагностики инфекционного заболевания; 2) для определения вида или серовара микроорганизма при его идентификации с помощью известного антитела.
В зависимости от состояния антигена и особенностей среды, в которой взаимодействуют антигены и антитела, различают реакцию агглютинации, преципитации, лизиса, связывания комплемента, нейтрализации и др.
Реакции агглютинации (РА) - склеивание и выпадение в осадок микроорганизмов или других клеток под действием антител в присутствии солей (обычно используется изотонический раствор хлорида натрия). Определяемые антитела (агглютинины) находятся либо в сыворотке крови больного человека либо иммунного животного; антигеном является взвесь убитых или живых микроорганизмов.
Для получения сыворотки кровь у человека берут обычно из вены, собирают в стерильную пробирку, оставляют на час при комнатной температуре или при 370 С на 30 мин. Образовавшийся сгусток отделяют от стенок пробирки стеклянной палочкой, пробирку оставляют в холодильнике на ночь для лучшего отделения сыворотки. На следующий день сыворотку отсасывают, при необходимости освобождают от форменных элементов крови центрифугированием.
Иммунные диагностические сыворотки, содержащие антитела к определенному антигену, получают чаще из крови кроликов или лошадей, многократно иммунизированных соответствующим антигеном (взвесь живых или убитых микроорганизмов, анатоксины, экстракты клеток и тканей, эритроциты и т. п.).
Для определения антител в крови больного человека можно использовать живые культуры микроорганизмов, однако чаще используются взвеси убитых микроорганизмов (диагностикумы). Реакция агглютинации ставится в 2 вариантах: ориентировочная реакции на стекле и развернутая реакция в пробирках.
Для постановки ориентировочной реакции агглютинации на предметное стекло наносят по 2 капли известной сыворотки и каплю изотонического раствора хлорида натрия. В одну из капель сыворотки и в каплю изотонического раствора вносят петлей культуру исследуемого микроорганизма, тщательно перемешивают и через 1-3 минуты учитывают реакцию. Капля сыворотки, в которую не внесена культура, является контрольной. Реакция считается положительной в том случае, когда в капле, где культура смешана с сывороткой, выпадают хлопья агглютината, контроль сыворотки остается прозрачным, а в контроле антигена отмечается равномерное помутнение (рис.35, см. приложение).
Постановка развернутой реакции агглютинации предполагает приготовление разведений (обычно двукратных в объеме 1,0 мл) известной диагностической или исследуемой от больного человека сыворотки, в которые добавляют 0,1 мл (2 капли) живых или убитых микроорганизмов. В качестве двух контролей используют сыворотку в максимальной концентрации (антиген в нее не вносят), а также изотонический раствор хлорида натрия, в который вносят антиген. Положительная реакция характеризуется выпадением на дно пробирок хлопьевидного или зернистого осадка в виде зонтика, жидкость над осадком при этом просветляется. При встряхивании осадка (агглютината) видны хлопья, плавающие в прозрачной жидкости. В контроле антигена наблюдается осадок в виде пуговки (при встряхивании - равномерное помутнение), в контроле сыворотки – полная прозрачность.
Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) - агглютинация эритроцитов, нагруженных антигеном или антителом, под влиянием специфических антител или антигенов с целью определения неизвестных антител или антигенов (рис. 36, см. приложение). Реакцию ставят в специальных полистироловых планшетах (обычно в двукратных разведениях сыворотки или материала, содержащего антиген, объемом 0,2 мл), добавляют соответствующий антигенный или антительный эритроцитарный диагностикум, выдерживают в термостате при 370 С или при комнатной температуре 2 часа, учет производят сразу после этого или на следующий день.
Контролем служит взвесь эритроцитов с заведомо иммунной и нормальной сыворотками. В первом случае должна произойти агглютинация, во втором ее не должно быть. Контролем антигена служит взвесь нормальных эритроцитов, к которым добавлена испытуемая сыворотка, а также раствор хлорида натрия, к которому добавляют эритроцитарный диагностикум (в обоих контролях не должно быть агглютинации).