2. Индикация вирусов в клетках культуры ткани:

• гемадсорбция - адсорбция на клетках эритроцитов, добавленных к культуре ткани, инфицированной вирусом парагриппа (демонстрация);

• подавление метаболизма клеток вирусом полиомиелита (цветная проба –демонстрация). Клетки культуры ткани в процессе их культивирования вырабатывают кислые продукты метаболизма, при этом цвет среды, в которую добавлен индикатор метиловый красный, изменя­ется с красного на желтый. Клетки, инфицированные вирусом, разрушаются и цвет среды не меняется, оставаясь красным;

• интерференция вирусов - отсутствие репродукции вируса в культуре ткани, инфицированной другим вирусом, не обладающим цитопатическим эффектом (демонстрация).

3. Выделение и индикация вирусов на ркэ.

• обнаружение вирусов на хорион-аллантоисной оболочке РКЭ, зараженного вирусом герпеса (микроскопия мазков-отпечатков, окрашенных по Романовскому-Гимза – демонстрация));

• выявление вируса гриппа в аллантоисной жидкости зараженного РКЭ с помощью реакции гемагглютинации (РГА) с эритроцитами кур. Куриные эмбрионы вскрывают, аллантоисную жидкость отсасывают пастеровской пипеткой, титруя ее в лунках пластикового планшета в разведениях от 1:10 до 1:512 в объеме 0,5 мл. В каждую лунку добавляют 0,5 мл 1% взвеси эритроцитов кур, выдерживают при комнатной температуре в течение 40 минут, после чего производят учет. Контролями служат незараженная аллантоисная жидкость и физиологический раствор. Наличие гемагглютинации в опыте при отсутствии ее в контролях указывает на наличие ви­руса в исследуемой жидкости.

4. Идентификация вирусов:

• выявление типа вируса гриппа в хорион-аллантоисной жидкости РКЭ с помощью РТГА. (нейтрализация гемагглютинирующей активности различных типов вируса гриппа А, В, С соответствующими противогриппозными диагностическими сыворотками). Отсутствие гемагглютинации с одной из противогриппозных сывороток указывает на тип вируса гриппа;

• выявление вирусов с помощью реакции преципитации в геле (демонстрация). В одну из лунок в агаровом геле вносят исследуемый материал от больного, а в другую – диагностическую сыворотку, содержащую соответствующие антитела. В месте встречи вируса и антитела формируется преципитат в виде белых линий;

• реакция нейтрализации (демонстрация). Производят заражение РКЭ, культур клеток или экспериментальных животных (в зависимости от свойств вируса) смесью вируссодержащего материала (материал от больного, хорион-аллантоисная жидкость РКЭ, надосадочная жидкость зараженной культуры ткани) и соответствующих диагностических противовирусных сывороток. В качестве контроля используется биологический объект (РКЭ, культура ткани, экспериментальное животное), зараженный только вируссодержащим материалом. Контрольное животное, в организме которого ви­рус не нейтрализуется антителами сыворотки, погибает. Опытное животное выживает, так как антитела сыворотки нейтрализуют вирус.

5. Серологический метод диагностики вирусных инфекций(выявление антител в сыворотке крови больных - ретроспективная диагностика)

• РСКпри аденовирусной инфекции. Ставится с целью опре­деления антител и их титра в сыворотке крови больных на 2 и 8 день болез­ни.

• Цветная пробапри полиомиелите (демонстрация). Сущность реакции состоит в изменении цвета среды, на которой культивируется культу­ра ткани, в результате выделения кислых продуктов метаболизма, что приводит к изменению исходного красного цвета индикатора среды (феноловый красный) на желтый. У зараженных вирусом клеток выделения метаболитов не происходит, поэтому изменения цвета среды не происходит. Схема опыта: к разным разведениям исследуемой сыворотки добавлено 0,1 мл вакцинного штамма вируса полиомиелита, смесь внесена в пробирки с культурой ткани. После 8-10-дневной инкубации в термостате проводят учет реакции по наибольшему разведению сыворотки, при котором наблюдается из­менение цвета среды с красного на желтый.

• РНГА (демонстрация) - определение антител к вирусу гепатита В.

• PТГA (демонстрация)- определение антител в сыворотке крови больного клеще­вым энцефалитом. Реакция основана на способности некоторых вирусов склеивать эритроциты птиц, морских свинок, I (0) группы крови человека. К известному гемагглютинирующему вирусу добавляют исследуемую сыворотку крови. Если в исследуемой крови содержатся антитела, они нейтрализуют гемагглютинирующую активность вируса и агглютинации вирусов не наступает. Схема опыта: к разным разведениям сыворотки крови больного добавляют антиген вируса клещевого энцефалита и взвесь эритроцитов. После экспозиции в течение 40 мин проводят учет реакции по наибольшему разведению сыворотки крови больного, вызвавшему торможение агглютинации эритроцитов.

• ИФА (демонстрация)– определение антител к ВИЧ.

После изучения темы студент должен знать: теоретические основы общей вирусологии (репродукция, генетика вирусов, особенности вирусных инфекций и противовирусного иммунитета), методы культивирования, индикации и идентификации вирусов, серологический метод диагностики вирусных инфекций.

Изучив тему, студент должен уметь: выполнять основные методы индикации и идентификации вирусов, трактовать результаты серологических исследований при вирусных инфекциях.

Тема 14. ВИРУСЫ - ВОЗБУДИТЕЛИ ГРИППА И ОРВИ. ПАРАМИКСОВИРУСЫ - ВОЗБУДИТЕЛИ КОРИ И ЭПИДЕМИЧЕСКОГО ПАРОТИТА. ВИРУСЫ, ПОРАЖАЮЩИЕ КОЖУ И СЛИЗИСТЫЕ ОБОЛОЧКИ (ПОКСВИРУСЫ, ГЕРПЕСВИРУСЫ). КОРОНАВИРУСЫ

Цель занятия:разбор биологических свойств возбудителей гриппа, ОРВИ, кори и эпидемического паротита, покс- и герпесвирусов, освоение методов лабораторной диагностики, профилактики и лечения указанных инфекций.