Иммунохимические методы диагностики возбудителя или его антигенов в материале от больного

Метод иммунофлюоресценции (ИФ) позволяет обнаружить в материале от больного или в зараженных вирусом клетках антигены бактерий и вирусов с по­мощью специфических антител, меченных флюорохромами.

Иммуноэлектронная микроскопия (ИЭМ). Сущность метода заключается в том, что исследуемый материал, содержащий вирусы, обрабатывают специфическими антителами, образовавшиеся иммунные комплексы осаждают высокоскоростным центрифугированием, а затем вирусы в составе иммунных комплексов выявляют с помощью электронной микроскопии. ИЭМ позволяет зна­чительно повысить чувствительность и специфичность вирусоскопического метода. Разработаны твердофазные методы ИЭМ, сущность которых состоит в предварительной фиксации специфических антител (немеченных или меченных частицами золота) на сетках для электронной микроскопии с последующей обработкой сеток исследуемым вируссодержащим материалом и выявлением связанных антителами вирионов с помощью электронной микроскопии.

Другие серологические реакции (РИФ, ИФА, РИА, РНГА, РП) также могут применяться для обнаружения антигенов бактерий и вирусов в материалах от больного.

Биохимические и молекулярно-биологические методы диа­гностики

Метод газожидкостной хроматографии (ГЖХ)используют для обнаружения продуктов метаболизма микроорганизмов (летучих жирных кислот, спиртов, нелетучих органических кислот и т.д.) в исследуемом материале.

Методы генодиагностики.Специфические фрагменты ну­клеиновых кислот (НК) различных возбудителей можно обнаружить в исследуемом материале от больного с помощью методов гиб­ридизации нуклеиновых кислот (ДНК-зондов) или чаще - ПЦР, которая широко используется как высокочувствительный экспресс-метод для постановки предварительного диагноза при различных инфекциях. Ограничения ПЦР могут быть обусловлены высокой изменчивостью НК некоторых микроорганизмов, а также неадекватным подбором праймеров для реакции, что обеспечивает ложноотрицательные результаты, или же загрязнением реакционной смеси микроорганизмами или фрагментами их НК, приводя к возникновению ложноположительных реакций.

Серодиагностика и аллергодиагностика

Серодиагностика (serum – сыворотка).Метод основан на обнаружении антител в сыворотке крови больного и определении динамики на­растания их титра в ходе заболевания. Для серодиагностики инфекционных болезней применяют различные иммунологические реакции (РА, РСК, РНГА, ИФА, ИФМ и т.д.), используя в качестве антигенов живые культуры микроорганизмов илидиагностикумы(инактивированные взвеси микроорганизмов или антигены из них, полученные химическим путем).

Серологические исследования проводят также для эпидемиологического анализа инфекционной заболеваемости (определение специфических антител у здоровых лиц, свидетельствующее о перенесении ими инфек­ции или о контакте с соответствующим возбудителем), а также для определения уровня специфических антител с целью оценки эффективности вакцинопрофилактики.

При серологических исследованиях учи­тывается диагностический титр выявленных антител (максимальное разведение исследуемой сыворотки, дающее положительный результат). Наиболее информативными являются серологические исследования парных сывороток крови больного, взятых в начале болезни и через разные промежутки времени в процессе ее развития. Диагнос­тическое значение имеет нарастание титра в 4 раза и более.

Методы серодиагностики отличаются высокой специфичностью и чувствительностью. В последние годы широкое распространение получил метод ИФА.

Серологические реакции, несмотря на ряд достоинств, имеют некоторые ограничения, связанные с возможностью возникновения ложноотрицательных и ложноположительных реакций. Ложноотрицательные реакции могут появляться в результате нейтрализации антител избытком микроба или его антигенов в организме больного, а также в результате неоптимальных соотношений антигенов и антител при постановке реакции. Ложноположительные (псевдоиммунологические) реакции могут возникать при использовании гемолизированной или загрязненной микроорганизмами сыворотки крови, при нарушениях соотношения альбуминов и глобулинов, являться результатом перекрестных иммунологических реакций. Ложноположительные реакции могут появляться у беременных женщин, наркоманов, больных тяжелыми хроническими болезнями (красная волчанка, ревматоидный артрит, хронические гепатиты и т.д.) и инфекциями (бруцеллез и др.)

Аллергодиагностика.Наиболее часто при диагностике ряда инфекционных заболеваний (туберкулез, бруцеллез, туляремия и др.) ставят внутрикожные аллергические пробы для выявления гиперчувствительности замедленного типа к аллергенам микробов. Могут использоваться также методы аллергодиагностикиin vitro, позволяющие оценить состояние специфической сенсибилиза­ции лейкоцитов крови в отношении определенного антигена, например, реакция торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ), реакция лейкоцитолиза (повреждения нейтрофилов) в присутствии специфического микробного антигена.