Самостоятельная работа студентов

1. Микроскопический метод.Промикроскопировать и зарисовать демонстрационный микропрепарат холерного вибрионаV.cholerae, окрашенный по Граму. Холерный вибрион - грамотрицательная изогнутая палочка.

2. Бактериологический метод.Ознакомиться с ос­новными биологическими свойствами классического биовара холерного вибриона и биовара Эль-Тор:

• фаголизабельность.Классический холерный вибрион лизируется фагом С и нечувствителен к действию фага Эль-Тор II. Вибрион Эль-Тор лизируется фагом Эль-Тop и нечувствителен к фагу С (демонстрация);

• чувствительность к полимиксину.Учесть рост классического холерного вибриона и вибриона Зль-Тор на среде с добавле­нием полимиксина. Вибрион Эль-Тор к полимиксину не чувствителен, классический холерный вибрион – чувствителен;

• гемолитические свойства.Вибрион Эль-Тор лизирует эритроциты; классический холерный вибрион, как правило, нет (демонстрация);

• определение серовара холерного вибриона. Учесть разверну­тую реакцию агглютинацииcсыворотками Инаба и Огава (демонстрация).

3. Изучить биопрепараты,используемые для диагностики, лечения и профилактики бактериальной дизентерии и холеры:

• люминесцирующая хо­лерная сывороткадля постановки реакции иммунофлюоресценции с целью выявления вибрионов;

• агглютинирующие холерные сывороткиИнаба и Огава (для постановки реакции агглютинации при идентифика­ции холерного вибриона);

• холерные фаги: классический (фаг С) и Эль-Тор. Использу­ются для фагодиагностики;

• поливалентный холерный бактериофаг для лечения и профилактики;

• холерная вакцина. Создано 3 вакцины против холеры (убитая Эль-Тор; холероген- анатоксин, обогащенный О-антигеном холерного вибриона для подкожных инъекций; холероген-анатоксин, обогащенный О-антигеном холерного вибриона таблетированный). Используются для специфи­ческой профилактики холеры.

Пищевые интоксикации бактериальной природы Лабораторная диагностика ботулизма

Ботулизм - острая пищевая интоксикация, протекающая с преимущественным поражением центральной и вегетативной нерв­ной системы ботулиническим токсином - силь­нейшим биологическим ядом, вырабатываемым палочкой ботулизма (Clostridium botulinum) и относящемся к особо опасным патогенным биологи­ческим агентам. Ботулизм может быть связан также с вегетацией возбудителя в ране или кишечнике.

Материалом для исследования являются кровь, моча, испражнения, промывные воды желудка, остатки пищи (мясные, рыбные, фруктовые, овощные, грибные консервы, колбасы и др.). Обычно у больного с подозрением на ботулизм исследуют на наличие токсина кровь, а на наличие возбудителя - испражнения.

Биопроба. Проводится реакция нейтрализации на белых мышах с целью обнаружения ботулотоксина в исследуемом материале. Обнаружение токсина палочки ботулизма и его типа имеет важное значение для назначения пациенту антитоксической противоботулинистической сыворотки - един­ственного эффективного средства специфической терапии и экстренной профи­лактики ботулизма. Реакцию ставят со смесью антитоксических противоботулинистических сывороток, а также с моновалентными сыворотками типов А, В, Е. При наличии в исследуемом материале ботулотоксина мыши контрольной группы погибают с явлениями параличей (парез конечностей, осиная талия и т.д.). При нейтрализации токсина антитоксической сывороткой мыши остаются живыми.

Экспресс-диагностика ботулизма проводится с помощью РНГАс антительными эритроцитарными диагностикумами для обнаружения ботулотоксина в исследуемом материале.

Бактериологический метод. Исследуемый материал засе­вают в 4 флакона со средой Китта –Тароцци; один флакон прогре­вают при температуре 60⁰ С в течение 15 мин (для селекции С. botulinum типа Е), другой - при 80⁰ С в течение 20 мин. Накопление куль­тур клостридий ботулизма типов Е и F происходит при 28 °С, а клостридий типа А и В - при 35 °С в течение 48 ч. Для активации токсина Е к питательной среде добавляют трипсин.

Через 24 — 48 ч инкубирования учитывают характер роста посевов (помутнение и газообразование), готовят мазки в окраске по Граму. При наличии типичных бактерий в виде «теннисных ракеток» со спорами (рис.15) делают пересев на кровяной сахарный МПА, на котором С. botulinum образует колонии неправильной формы с гладкой или шероховатой поверхностью и зоной гемолиза. В глубине столбика сахарного МПА колонии палочки ботулизма имеют вид пушинок или чечевичек.

Рис. 15. Палочка ботулизма - Clostridium botulinum. Окраска по Граму. Грамположительные спорообразующие палочки в виде «теннисной» ракетки. х900

Идентификация чистой культуры проводится на основании изучения биохимических свойств (посев в сре­ды «пестрого» ряда), изучают другие дифференциальные призна­ки (см. табл.). Антигенные свойства культуры изучают с помощью РА с типовыми сыворотками. Выявля­ют также ботулинический токсин в фильтрате бульонной культуры и его тип с помощью реакции нейтрализации на белых мышах.