3. Идентификация выделенной культуры шигелл:

• по антигенным свойствам– постановка и учет РА на стекле со смесью видовых агглютинирующих сыворотокSh.dysenteriae,Sh.flexneri,Sh.boydii,Sh.sonneiи культу­рой, выделенной на среде Олькенипкого. Учет РА на стекле с видовыми дизентерийными сыворотками;

• по ферментативным свойствам- учет биохимической активности и фаголизабельности выделенной культуры шигелл, (демонстрация).

4. Колициногенотипирование.Учесть пробу по определению колициногенотипа выделенной культуры (демонстрация). Техника постановки описана в разделе «Генетика микроорганизмов».

5. Определение чувствительности выделенной культуры к анти­биотикамметодом бумажных дисков (демонстрация).

6. Изучить биопрепараты,используемые для диагностики, лечения и профилактики бактериальной дизентерии и холеры:

• агглютинирующие адсорбированные сывороткик шигеллам Sh.dysenteriae, Sh.flexneri, Sh.boydii, Sh.sonnei. Используются для постановки реакции агглютинации при идентификации шигелл.

• дизентерийный бактериофаг таблетированный.Используется для профилактики и лечения дизентерии.

• диагностикумы эритроцитарныеиз шигелл Флекснера и Зонне. Используются для постановки РНГА при серодиагностике ди­зентерии.

• вакцина дизентерийная ШИГЕЛЛВАК, из липополисахарида шигелл Зонне.

Микробиологическая диагностика холеры

Холера — особо опасное, карантинное инфекционное заболевание, вызываемое Vibrio cholerae биоваров cholerae и eltor, проявляющееся в виде острого гастроэнтерита с выраженной интоксикацией и обезвоживанием (эксикозом) в результате нарушения водно-электро­литного обмена, cвязанного с выработкой вибрионами холерного энтеротоксина (холерогена).

Основной метод лабораторной диагностики холеры – бактериологический.

При выполнении исследований на холеру необходимо строго соблюдать требования противоэпидемического режима. Материал для исследования на холеру собирают в стерильную посуду, не содержащую следов дезинфицирующих растворов, упаковывают и достав­ляют в лабораторию. Банки, пробирки должны быть герметично закрыты водонепроницаемыми пробками, которые заливают парафином, посуду обвязывают двойным слоем вощеной бумаги и обрабатывают дезинфицирующим раствором. В направ­лении указывают фамилию, инициалы, возраст больного, его домашний и служебный адрес, диагноз, даты начала болезни и госпитализации, дату и час взятия материала, а также фамилию и инициалы лица, направившего анализ. Банки и пробирки с материалом для исследования перекладывают ватой, помещают, в металлическую коробку, а затем в деревянный ящик, который пломбируют, надписывают «Верх, осторожно» и на служебном транспорте с сопровождающим лицом пересы­лают в лабораторию в течение 2 часов после взятия проб.

Исследования на холеру проводятся круглосуточно в специальной лаборатории медицинскими работниками, прошедшими подготовку по особо-опасным инфекциям. Методы, применяемые для микробиологической диагностики холеры, представлены в схеме 13.

Микроскопический метод (микроскопия окра­шенных мазков и препаратов «висячей капли» из мате­риала от больного) при холере в настоящее время не применяется в связи с низкой его информативностью. Разработаны методы экспресс-диагностики холеры (РИФ).

Бактериологический метод состоит из нескольких этапов.

Первый этап. Исследуемый материал засевают на щелочные (элективные) плотные питательные среды (щелочной агар Монсура – МПА с триптиказой, хлоридом на­трия, таурохолатом натрия, карбонатом натрия; TCBS - тиосульфат-цитрат-бромтимол-сахарозный агар; ще­лочной МПА) и жидкие среды обогащения (1% щелочная пептонная вода).

Второй этап проводится через 6 —8 ч от начала анализа. Выполняют пересев из верхней части 1-й среды накопления на плотные элективные питательные среды и на 2-ю среду накопления. При наличии на 1-й пептонной воде нежной голубоватой пленки из нее готовят мазок в окраске по Граму, в котором обнаруживают грамотрицательные изогнутые в виде «запятой» вибрионы, проверяют подвижность, ставят ОРА с холерны­ми сыворотками О-1, О-139 и RO, а также специфическую иммунофлюоресценцию.

Третий этап выполняется через 12— 14 ч от начала анализа. Производится пересев из верхней части 2-й среды накопления на плотные элективные питательные среды. Изучают и отбирают для исследования типичные для холерного вибриона колонии на плотных средах, засеянных нативным материалом.

С

Материал для исследования:испражнения, рвотные массы, желчь, труп­ный материал (отрезки кишечника, желчного пузыря), пищевые продукты, вода

хема 13. Микробиологическая диагностика холеры

Бактериологический метод

1 этап.Посев материалана щелочные среды (Монсура, TCBS, ще­лочной МПА, 1% щелочная пептонная вода -ПВ). Культивирование при 37⁰ С.

2 этап (через 6 —8 ч от начала анализа). Учет характера роста на ПВ (нежная голубоватая пленка), микроскопия мазков в окраске по Граму, проверка подвижности, РИФ. Пересев на плотные элективные питательные среды и на 2-ю среду накопления.

3 этап (через 12— 14 ч от начала анализа). Пересев из 2-й среды накопления на плотные элективные питательные среды. Изучение, отбор и пересев на селективные среды типичных для холерного вибриона колоний (прозрачные, круглые, диаметром 1—2 мм, гладкие, пло­ские, го­могенные, с ровными краями колонии, голубоватого цвета; на агаре TCBS ярко-желтые колонии на зеленом фоне среды; на сре­де Монсура — полупрозрачные бесцветные с темным центром) с плотных сред, засеянных нативным материалом.

4 этап. (через 18 —24 ч от начала анализа). Изучение и отбор типичных колоний на всех плотных средах, тест на оксидазу, ОРА с холерны­ми сыворотками О-1, О-139 и RO,РИФ; пересев на ще­лочной МПА, среду Ресселя (или Олькеницкого) для выделения чистой культуры. Предварительный положительный ответ при наличии положительной РА или РИФ в сочета­нии с типичными морфологическими, тинкториальными и культуральными свойствами выделенной культуры.

5 этап (через 24 —36 ч от начала анализа). Изучение характера роста на щелочном МПА, среде Ресселя (Олькеницкого) - расщепление сахарозы (покраснением среды в столбике без образования газа),отсутствие ферментации лактозы. Микроскопия мазков в окраске по Граму, тест на оксидазу, ОРА с холерными сыворотками (О-1, RO, Огава, Инаба, при отрицательном результате - с сывороткой О-139). При положительном результате ОРА с одной из сывороток - ответ о выделении холерного вибриона. Пересев с целью окончательной идентификации оксидазопопожительных культур по сокращенной или полной схемам.

6 этап(через 36-48 ч от начала анализа) - окончательная идентификация выделенных куль­тур, определение их чувствительности к антибиотикам, формулировка окончательного ответа