56. Искусственное осеменение кобыл

Подготовка к осеменению кобылы всегда сопровождается дополнительными мероприятиями по предупреждению травматизма. Поэтому для начала кобылу заводят в станок или удерживают за повод, кроме того, во время введения спермы кобыле поднимают переднюю конечность, чтобы она не могла ударить задней. Предварительно корень хвоста забинтовывают. Конюх отводит хвост кобылы в сторону и обмывает наружные половые органы из кружки Эсмарха раствором фурациллина 1:5000. осеменяют кобыл двумя способами: визоцервикальным и маноцервикальным. Сперму вводят непосредственно в матку (на глубину 10-20 см) применяется резиновый, эбонитовый или полистероловый катетер.

Искусственное осеменение кобыл может быть проведено двумя способами.

Для маноцервикального способа используют резиновый и полистероловый катетеры. Подготовленную руку ветспециалист вводит во влагалище кобылы, конец катетера, продвигает через шейку в тело матки; помощник поднимает шприц или ампулу и вводит сперму.

Для визоцервикального способа осеменения используют как эбонитовый, так и полистероловый катетер конструкции ВНИИ коневодства. Катетер представляет собой трубку длиной50 сми толщиной0,6 см, один конец которой расширен в виде головки. Катетер соединяют со шприцем или ампулой резиновой муфтой с хомутиком. Катетер используют одновременно с влагалищным зеркалом, которое стерилизуют и увлажняют 0,9% раствором NaСl.

Осеменяют кобыл свежеполученной или сохраненной при t 2-4ºС в течение 3 суток или размороженной. При оттаивании спермы, замороженной в алюминиевых пакетах, их быстро переносят пинцетом из жидкого азота на 1 минуту в водяную баню t 40ºС. Доза свежеполученной спермы -25-30 мл. В дозе должно быть не менее 150-300 млн спермиев с ППД. Активность свежеполученной спермы не ниже 6 баллов, оттаянной – 2 балла.

Сперму вводят только подогретой до t 30-35ºС. Осемененных кобыл через 8-9 дней проверяют жеребцом-пробником на наличие половой охоты. Через 35-40 дней после осеменения кобыл проверяют на жеребость ректальным методом.

 

57. Оценка концентрации и активности (подвижности) сперматозоидов

Подсчет количества сперматозоидов в семенной жидкости — важнейший компонент базового анализа спермы. Концентрация сперматозоидов — количество сперматозоидов на единицу объема семенной жидкости. Обычно этот показатель выражают в миллионах сперматозоидов на миллилитр (млн/мл). Концентрация сперматозоидов сама по себе не отражает общего количества сперматозоидов в эякуляте. Число сперматозоидов подсчитывают с учетом концентрации и объема эякулята. Разработано два метода определения концентрации спермы. Оба включают подсчет определенного количества разжиженной спермы в специальном резервуаре. Независимо от выбранного метода, необходимо удостовериться, что образец спермы хорошо перемешан. Для этого контейнер осторожно взбалтывают, однако не следует энергично встряхивать сосуд. Концентрацию сперматозоидов в образце можно определить методом Нейбауэра с использованием гемоцитометра. Гемоцитометр Нейбауэра — один из специально разработанных резервуаров для подсчета, применяемых на данный момент. С помощью нагнетательной пипетки оба резервуара наполняют хорошо перемешанной разбавленной спермой. Резервуар оставляют на 5 мин для оседания клеток. Подсчитывают только отдельные сперматозоиды на сетке. Изолированные головки, хвосты и другие клетки зародышевой линии должны быть отмечены, но их не подсчитывают. После подсчета сперматозоидов с одной стороны резервуара производят подсчет на второй решетке. Затем находят среднее значение. Если отдельные значения отличаются от среднего более чем на 5%, следует провести тест повторно. Если оба полученных при подсчете значения засчитываются, среднее значение делят на вычисленную площадь поверхности и умножают на коэффициент разбавления, таким образом находят концентрацию сперматозоидов в первоначальном образце спермы (млн/мл). Затем можно подсчитать количество сперматозоидов, умножив значение концентрации сперматозоидов на объем эякулята. Счетная камера Маклера (Sefi Medical Instruments, Haifa, Israel) — специальный прибор, разработанный для быстрого анализа спермы. С момента изобретения в 1980 г. счетная камера Маклера получила широкое распространение и используется теперь во многих лабораториях. Главное преимущество камеры Маклера перед гемоцитометром Нейбауэра — отсутствие необходимости разбавлять образец спермы (за исключением случаев крайне высокой концентрации). Кроме того, подвижность и прогрессивно-поступательное движение можно оценивать во время вычисления концентрации сперматозоидов. Хотя камера Маклера упрощает определение концентрации при анализе спермы, данный метод уступает традиционной гемоцитометрии в точности и имеет тенденцию к получению ошибочных результатов.

Понятие «-зооспермия» относится к наличию сперматозоидов в эякуляте. Пациентов с концентрацией сперматозоидов менее 20х106/мл классифицируют как страдающих олигозооспермией. Азооспермия — полное отсутствие сперматозоидов в эякуляте. Диагноз азооспермии ставят лишь после микроскопического подтверждения отсутствия сперматозоидов в осадке после центрифугирования неразбавленного образца спермы

Система классификации ВОЗ за 1999 г. выделяет четыре категории сперматозоидов: • категория А включает сперматозоиды с быстрым прогрессирующим движением; • к категории В относят медленные или инертные сперматозоиды; • категория С — сперматозоиды с непрогрессирующим движением; • категория D — неподвижные сперматозоиды. Процентное соотношение категорий сперматозоидов регистрируют. В нормальном образце спермы содержится, по меньшей мере, 50% подвижных сперматозоидов, у большинства из них наблюдают хорошее прогрессирующее движение (модальный класс >2, классы А и В ВОЗ). Астенозооспермию диагностируют при количестве сперматозоидов с хорошей подвижностью менее 50%.