11. Определение альфа - токоферола ацетата (витамина е)

Точную навеску порошка растертых драже (не более 1 г) или 2 таблетки, растертые в порошок, количественно переносят 10 миллилитрами воды в коническую колбу вместимостью 100 мл и нагревают на водяной бане при температуре от 60 до 70 град. С при перемешивании в течение 5 мин. Затем прибавляют 30 мл 95% спирта, 3 мл 50% раствора едкого кали и нагревают в течение 30 мин на водяной бане с обратным холодильником при температуре кипения смеси. Содержимое колбы охлаждают до комнатной температуры, количественно переносят 50 мл воды в делительную воронку и извлекают 150 мл эфира для наркоза в течение 2 мин. В случае образования эмульсии проводят дополнительное извлечение эфиром 3 раза по 25 мл. Объединенные эфирные извлечения промывают порциями по 50 мл до исчезновения щелочной реакции промывных вод (проба с фенолфталеином). Промытые эфирные извлечения медленно фильтруют в колбу для отгона через бумажный фильтр, на который помещено около 8 г безводного натрия сульфата, фильтр с натрия сульфатом промывают 3 раза эфиром порциями по 10 мл, который фильтруют в ту же колбу. Эфир отгоняют в токе азота или под вакуумом на водяной бане, нагретой не выше 40 град. С.

Остаток тотчас же растворяют в абсолютном спирте до получения концентрации около 60 мкг в 1 мл (раствор А).

15 мл раствора А переносят в колбу для гидрирования вместимостью 50 мл, прибавляют около 0,2 г палладиевого катализатора, перемешивают и гидрируют в течение 15 мин в приборе, изображенном на рис. 5 (см. определение ретинола ацетата и ретинола пальмитата). По окончании гидрирования в колбу прибавляют около 0,3 г силикагеля марки КСМ или ШСМ, перемешивают и фильтруют; 2 мл полученного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 15 мл абсолютного спирта, 1 мл 0,5% спиртового раствора о - фенантролина, 1 мл 0,2% спиртового раствора железа окисного хлорида, доводят объем раствора тем же спиртом до метки, перемешивают и оставляют в защищенном от света месте.

Точно через 10 мин после прибавления раствора железа окисного хлорида измеряют оптическую плотность раствора красновато - оранжевого цвета на спектрофотометре при длине волны 520 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.

В качестве раствора сравнения используют абсолютный спирт. Параллельно проводят контрольный опыт на реактивы. Из величины оптической плотности испытуемого раствора вычитают величину оптической плотности контрольного опыта.

Содержание альфа - токоферола ацетата в микрограммах в 1 мл находят по калибровочному графику.

Содержание C31H52O3 (альфа - токоферола ацетата) в одной таблетке или драже в граммах (X) вычисляют по формуле:

С х V х б С х V х б

Х = --------------------- = ---------------,

а х 2 х 1000 х 1000 а х 2000000

где С - содержание альфа - токоферола в 25 мл, найденное по калибровочному графику, в микрограммах; V и 2 - разведения в миллилитрах; а - навеска препарата в граммах или количество таблеток, покрытых оболочкой; б - средняя масса одного драже в граммах; 1000, 1000 - пересчет в граммы.

Примечания. 1. Построение калибровочного графика: 0,1000 г Государственного стандартного образца альфа - токоферола ацетата растворяют в 30 мл абсолютного спирта, прибавляют 3 мл 50% раствора едкого кали и нагревают в течение 30 мин на водяной бане с обратным холодильником при температуре кипения смеси. Извлекают неомыляемый остаток эфиров для наркоза, как указано выше, эфир отгоняют на водяной бане в токе азота.

Остаток растворяют в абсолютном спирте, переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора тем же спиртом до метки и перемешивают.

1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора тем же спиртом до метки и перемешивают.

Из полученного раствора отбирают 1, 2, 3, 4, 5 мл раствора в мерные колбы вместимостью 25 мл и проводят реакцию с растворами о-фенантролина и железа окисного хлорида, как указано выше.

Точно через 10 мин после прибавления раствора железа окисного хлорида измеряют оптическую плотность растворов от оранжевого до красновато - оранжевого цвета на спектрофотометре при длине волны 520 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм, как указано выше.

Из величин оптической плотности растворов Государственного стандартного образца вычитают величину оптической плотности контрольного опыта на реактивы. Строят калибровочный график, откладывая по оси абсцисс количества альфа - токоферола ацетата в микрограммах в 25 мл раствора, а по оси ординат - соответствующие им оптические плотности.

2. Приготовление реактивов: 0,5% раствор о-фенантролина и 0,2% раствор железа окисного хлорида готовят на абсолютном спирте. Растворы годны в течение 1 мес при хранении в банках оранжевого стекла с притертыми пробками при комнатной температуре.