134. Реакции иммунитета при вирусных инфекциях: рн, ртга. Компоненты, механизм, способы постановки, учетные признаки. Практическое применение

Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) - метод идентификации вируса или выявления противовирусных антител в сыворотке крови больного, основанный на феномене отсутствия агглютинации эритроцитов препаратом, содержащим вирус, в присутствии иммунной к нему сыворотки крови.

Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) основана на блокаде, подавлении ан­тигенов вирусов антителами иммунной сы­воротки, в результате чего вирусы теряют свойство агглютинировать эритроциты.

РТГА применяют для диагностики мно­гих вирусных болезней, возбудители которых (вирусы гриппа, кори, краснухи, клещево­го энцефалита и др.) могут агглютинировать эритроциты различных животных.

Механизм. Типирование вируса проводят в реакции торможения гемаг-глютинации (РТГА) с набором типоспецифических сывороток. Результаты реакции учитывают по отсутствию гемагглютинации. Подтипы вируса А с антигенами H₀N₁, H₁N₁, Н₂N₂, H₃N₂ и др. могут быть дифференцированы в РТГА с набором гомологичных типоспецифических сывороток.

135. Ифа, иммуноблоттинг. Компоненты, механизм, способы постановки, учетные признаки. Практическое применение

Метод основан на использовании в качестве метки антител ферментов, способных разлагать субстрат и приводить к образованию окрашенного продукта (хромогена). Конъюгированные с ферментом Ат сохраняют способность соединяться с гомологичным АГ. Интенсивность окраски соответствует количеству комплексов АГ-АТ-фермент.

Определение неизвестных АТ:

1) фиксация известного АГ

2) внесение неизвестной сыворотки

3) внесение конъюгата (АТ + фермент)

4) инкубация с хромогенным субстратом

Определение неизвестных АГ:

1) фиксация известного АТ

2) внесение АГ-содержащего материала

3) внесение двух АТ той же специфичности (зачем — не знаю, в таблице этого не было)

4) внесение конъюгата (антиглобулин + фермент)

5) инкубация с хромогенным субстратом

Положительная реакция (связывание) — коричневый

Отрицательная — желтый

В основе метода — твердофазный вариант ИФА для обнаружения неизвестных АТ.

1. Препарат известного АГ разделяют на фракции при помощи электрофореза на агарном геле

2. Гельнакладывают на фильтр, плотно прижимают и создают электрическое поле, в результате чего происходит перенос фракций на бумагу (блоттинг)

3. Добавляют сыворотку крови больного

4. Добавляют меченную сыворотку против Yg человека. Она соединяется с образовавшимися комплексами АГ-АТ.

5. Добавляют субстрат (хромоген), который вызывает окрашивание комплексов АГ-АТ-меченная сыворотка.

136. Методы иммунофлюоресценции. Компоненты, механизм, способы постановки, учетные признаки. Практическое применение

Прямой метод: метод Кунса

Специфические флюоресцирующие АТ, связываясь с микробными АГ, образуют комплексы, которые светятся при люминесцентном микроскопировании.

Недостаток: необходимость приготовления широкого набора флюоресцирующих специфических сывороток против каждого изучаемого АГ

Непрямой метод:

Материал:

АГ

АТ (в диагностической сыворотке)

люминесцирующая сыворотка

Метод предусматривает использование одной универсальной флюоресцирующей сыворотки — антиглобулиновой (содержит АТ только против крольичьих глобулинов)

1) Диагностическая сыворотка (содержит крольичьи глобулины) реагирует с флюоресцирующей сывороткой, как антиген

2) Комплекс диагностическая-флюоресцирующая сыворотка реагирует с исследуемым антигеном, как антитело.

3) На образовавшемся комплексе формируются флюоресцирующие антиглобулиновые антитела.

Ход работы:

1) На предметном стекле готовят мазок из испражнений больного колиэнтеритом, фиксируют на пламени и обрабатывают иммунной сывороткой, содержащей АТ против возбудителей колиэнтерита.

2) Препарат помещают во влажную средуи инкубируют при 37гр 15мин, после чего промывают ИХН

3) На препарат наносят флюоресцирующую антиглобулиновую сыворотку, выдерживают при 37гр 15 мин и тщательно промывают ИХН.