131. Реакция преципитации. Компоненты, механизм, способы постановки, учетные признаки. Практическое применение

Преципитация — осаждение АГ из раствора под влиянием специфических АТ.

Материалы:

АГ: раствор белков, комплекса полисахаридов, липидов

АТ: иммунная преципитарная сыворотка

Электролит

Реакция кольципреципитации:

1) Ставится в узких пробирках (до 0.5см), в которые вносят по 0.2-0.3мл преципитирующей сыворотки.

2) Пастеровской пипеткой медленно, по стенке, держа пробирку в наклонном положении, наслаивают 0.1-0.2мл раствора АГ

3) Пробирки осторожно переводят в вертивальное положение.

Учет реакции: через 1-2мин.

Положительная реакция: появляется преципитат в виде белого кольца

Реакция преципитации в геле:

1) Чашки заливают агаром, в котором вырезают несколько лунок на равном расстоянии друг от друга

2) В центральную лунку вносят сыворотку, содержащую АТ, в остальные — различные испытуемые АГ или один и тот же АГ в разных разведениях.

При диффузии реагентов в агаре в зонах оптимальных соотношений на месте встречи АГ и АТ образуются дуги преципитации (мутные полосы)

132. Реакции лизиса. Рск. Компоненты, механизм, способы постановки, учетные признаки. Практическое применение

Механизм. РСК проводят в две фазы: 1-я фаза — инкубация смеси, содержащей три компонента антиген + антитело + комплемент; 2-я фаза (инди­каторная) — выявление в смеси свободного комплемента путем добавления к ней гемоли­тической системы, состоящей из эритроцитов барана, и гемолитической сыворотки, содер­жащей антитела к ним. В 1-й фазе реакции при образовании комплекса антиген—антите­ло происходит связывание им комплемента, и тогда во 2-й фазе гемолиз сенсибилизирован­ных антителами эритроцитов не произойдет; реакция положительная. Если антиген и ан­титело не соответствуют друг другу (в иссле­дуемом образце нет антигена или антитела), комплемент остается свободным и во 2-й фазе присоединится к комплексу эритроцит — ан-тиэритроцитарное антитело, вызывая гемо­лиз; реакция отрицательная.

Применение. РСК применяют для диагностики многих инфекционных болезней, в частности сифи­лиса (реакция Вассермана).

1) испытуемую и контрольную сыворотки предварительно инактивируют нагреванием при 56гр 30 мин

2) АГ соединяется с сывороткой и комплементом при 37 гр 30 мин. При постановке РСК на холоде эту фазу проводят при 0-4гр 18-20 часов

3) После добавления в каждую пробирку по 0.4мл гемолитической системы пробирки встряхивают и выдерживают 20-30мин при 37гр

4) Результаты опыта оценивают, отмечая наличие или отсутствие гемолиза в пробирках.

Степень задержки гемолиза оценивают в зависимости от интенсивности окраски жидкости и величины осадка эритроцитов на дне.

В качестве контроля (2 и 3 пробирки) учитывают реакции с заведомо положительной и отрицательной сывороткой

4 и 5 пробирки служат для проверки антикомплементарных свойств сыворотки и АГ

в 6 и 7 пробирках контролируется качество комплемента и гемолитической системы

133. Реакция нейтрализации. Компоненты, механизм, способы постановки, учетные признаки. Практическое применение. Реакция флокуляции

1) готовят последовательное двукратное разведение сыворотки крови больного в ИХН от 1\4 до 1\64, оставляют на 1ч при комнатной температуре.

2) Добавляют в пробирки взвесь клеток в питательной среде 199, вазелиновое масло (для создания анаэробных условий)

3) Инкубируют в термостате при 37гр 7-9 дней

Учет:

Среда 199 имеет красный цвет. Если вирус присутствует в организме, он убивает взвесь клеток и среда свой цвет не меняет

Если вируса нет, клетки размножаются и среда меняет свой цвет на желтый

Учитываются только красный и желтый цвета!

Р. флокуляции:

В основе этой реакции лежит способность специфической ан­титоксической сыворотки нейтрализовать экзотоксин.

Антитела иммунной сыворотки способны нейтрализовать повреждающее действие микробов или их токсинов на чувст­вительные клетки и ткани, что связано с блокадой микробных антигенов антителами, т. е. их нейтрализацией.

Реакцию нейтрализации (РН) проводят путем введения смеси антиген—антитело животным или в чувствительные тест-объекты (культуру клеток, эмбрионы). При отсутствии у животных и тест-объектов повреждающего действия микро­организмов или их антигенов, токсинов говорят о нейтрализу­ющем действии иммунной сыворотки и, следовательно, о спе­цифичности взаимодействия комплекса антиген—антитело.

Для прове­дения реакции исследуемый материал, в котором предполагается наличие экзотоксина, смешивают с антитоксической сывороткой, выдерживают в термостате и вводят животным (морским свин­кам, мышам). Контрольным животным вводят фильтрат исследу­емого материала, не обработанный сывороткой. В том случае, если произойдет нейтрализация экзотоксина антитоксической сыво­роткой, животные опытной группы останутся живыми. Конт­рольные животные погибнут в результате действия экзотоксина.