9. Световой микроскоп. Микроскопия с иммерсией. Ультрамикроскоп (темнопольный). Их применение

Сухие объективы предназначены для исследования крупных клеточных форм диаметром более 10-20 мкм.

В МБ используют световой микроскоп с иммерсионной системой.

Иммерсионная система включает:

- иммерсионный объектив

- иммерсионное масло

Масло заполняет прорыв между изучаемым предметом и передней линзой (защита от преломления лучей)

Правила работы с иммерсионным объективом.

1) поднять конденсор до уровня предметного столика. Открыть ирис-диафрагму

2) Глядя сбоку в верхнюю линзу конденсора и вращая зеркало, найти изображения источника света.

3) Установить иммерсионный объектив

4) На предметный столик поместить препарат с каплей масла и закрепить его клеммами

5) Под контролем глаза макровинтом опустить тубус до соприкосновения линзы объектива с маслом. Осторожно погрузить линзу в масло, не доводя о соприкосновения со стеклом.

6) Глядя в окуляр, макровинтом поднимать тубус до появления изображения в поле зрения.

7) Вращая микровинт не более, чем на половину оборота, добиться четкого изображения.

8) После просмотра препарата макровинтом поднять тубус, снять препарат, опустить конденсор, установить малое увеличение, снять масло с объектива.

Темнопольная микроскопия. Микроскопия в темном поле зре­ния основана на явлении дифракции света при сильном боковом освещении взвешенных в жидкости мельчайших частиц (эффект Тиндаля). Эффект достигается с помощью параболоид- или кардиоидконденсора, которые заменяют обычный конденсор в био­логическом микроскопе .

10. Фазовоконтрастный и электронный микроскоп. Их применение

Фазово-контрастная микроскопия. Фазово-контрастное приспособление дает возможность увидеть в микроскоп прозрачные объекты. Они приобретают высокую контрастность изображения, которая может быть позитивной или негативной. Позитивным фазовым контрастом называют темное изображение объекта в светлом поле зрения, негативным — светлое изображение объек­та на темном фоне.

Для фазово-контрастной микроскопии используют обычный микроскоп и дополнительное фазово-контрастное устройство, а также специальные осветители.т.

Электронная микроскопия Позволяет наблюдать объекты, размеры которых лежат за пределами разрешающей способно­сти светового микроскопа (0,2 мкм). Электронный микроскоп применяется для изучения вирусов, тонкого строения различных микроорганизмов, макромолекулярных структур и других субмик­роскопических объектов.

11. Люминисцентный микроскоп. Приготовление микропрепаратов. Применение

Люминесцентная (или флюоресцентная) микроскопия. Осно­вана на явлении фотолюминесценции.

Люминесценция — свечение веществ, возникающее после воз­действия на них каких-либо источников энергии: световых, элек­тронных лучей, ионизирующего излучения. Фотолюминесцен­ция — люминесценция объекта под влиянием света. Если осве­щать люминесцирующий объект синим светом, то он испускает лучи красного, оранжевого, желтого или зеленого цвета. В ре­зультате возникает цветное изображение объекта.

Принцип работы этого микроскопа основан на явлении люминесценции. Для получения изображения объектов их обрабатывают флюорохромами, которые при возбуждающем облучении коротковолновой частью спектра светятся цветами с большей длиной волны (зеленым, оранжевым и др.). В люминесцентном микроскопе изучают как живые, так и убитые микробы (с "сухой" или иммерсионной системами). Люминесцентная микроскопия позволяет получить контрастное цветное изображение, обнаружить малое количество микробов, изучить их структуру и химический состав, использовать метод иммунофлюоресценции.