Принципиальная схема бактериологического выделения возбудителя дифтерии

Возбудитель туберкулеза Культуральные свойства

Возбудители туберкулеза культивируются только на сложных питательных средах. Наиболее распространенными являются среды Левенштейна-Йенсена (яичная среда с добавлением картофельной муки, глицерина и солей).

Для подавления посторонней микрофлоры в яичные среды добавляют малахитовую зелень.

M. tuberculosis образует морщинистые, суховатые, с неровным краем колонии.

М. bovis для роста не нуждается в глицерине. Культуры растут медленно, образуя небольшие, слегка выпуклые, с изрезанными, но более гладкими, чем у М. tuberculosis, краями колонии. Иногда образуют колонии S-типа.

На жидких питательных средах возбудители туберкулеза растут, образуя пленку.

Микобактерий туберкулеза характеризуются длительным периодом гене­рации клеток. Этим объясняется медленный рост возбудителей туберкулеза на питательных средах (12-25 дней).

Серодиагностика

Для выявления специфических антител к антигенам микобактерий предложено большое количество серологических реакций: РПГА, РА, РСК.

В последние годы интенсивно разрабатываются тесты на выявление антител к МБТ в крови больного в конкурентной иммуноферментной реакции с применением стандартных концентраций антигена микобактерий и моноклональных антител, конъюгированных с ферментом - пероксидазой. Разработаны диагностические тест-системы "ИФА - туберкулез", предназначенные для выявления с помощью иммуноферментного анализа антител к МБТ и позволяющие распознавать как легочные, так и внелегочные формы туберкулеза. Тест-система "ИФА-туберкулез" может быть использована как для диагностики у отдельных больных, так и при массовых обследованиях населения. Чувствительность тест-системы при различных локализациях туберкулезного процесса составляет от 68% до 100%, специфичность - 94%.

Принципиальная схема бактериологического выделения возбудителя туберкулеза

Занятие № 31

СПИРОХЕТОЗЫ. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА СИФИЛИСА, ЛЕПТОСПИРОЗА, БОРРЕЛИОЗОВ

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:

1. Выработать четкое представление о биологических свойствах спирохет.

2. Изучить принципы лабораторной диагностики спирохетозов.

3. Научиться подбирать препараты для диагностики, лечения и профилактики спирохетозов.

4. Ознакомить студентов с методами профилактики сифилиса, подчеркнув необходимость укрепления семейно-брачных отношений.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

1. Возбудитель сифилиса. Таксономия, биологические свойства. Лабораторная диагностика.

2. Возбудитель лептоспироза. Таксономия, биологические свойства. Лабораторная диагностика.

3. Возбудители боррелиозов. Таксономия, биологические свойства. Лабораторная диагностика.

4. Патогенез, иммунитет, методы специфической профилактики и терапии сифилиса, лептоспироза, боррелиозов.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

• дифференцировать возбудителей спирохетозов по морфологическим признакам

• интерпретировать результаты серологических реакций по определению антител в

сыворотке больных спирохетозом,

• классифицировать препараты в соответствии с их назначением.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ИМЕТЬ ПРЕДСТАВЛЕНИЕ:

• о возбудителях тропических или эндемических трепонематозов (фрамбезия, пирта, беджель),

• о возбудителях эндемических возвратных тифов.

Дата____________

Работа № 1. Принципиальные схемы лабораторной диагно­стики спирохетозов

Исследуемый материал:

____________________

____________________

Работа № 2. Морфологические и тинкториальные свойства возбудителей сифилиса, боррелиоза, лептоспироза

Цель: микроскопировать готовые препараты - мазки. Зарисовать. Сделать вывод.

Treponema pallidum

___________________________________________________________

__________________________________________________________

__________________________________________________________

___________________________________________________________

Borrelia reccurentis

_____________________________________________________________

_____________________________________________________________

_____________________________________________________________

_____________________________________________________________

Leptospira grippotyphosa

_____________________________________________________________

_____________________________________________________________

_____________________________________________________________

____________________________________________________________

Вывод:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Работа № 3. Клинические проявления сифилиса

Ознакомиться с клиническими проявлениями первичного и вторичного сифилиса. Просмотреть муляжи, слайды, таблицы. Установить связь между клиникой заболевания, патогенезом, материалом для исследования и целена­правленностью микробиологических исследований. Сделать вывод.

Стадии	Клиника	Исследуемый материал
Первичный
Вторичный
Третичный

Вывод:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Работа № 4. Серологическая диагностика сифилиса

Методические указания Серологические методы

а) Реакция Вассермана. Реакцию ставят по принципу реакции связывания комплемента. Отличием является то, что при постановке реакции Вассермана может быть использован неспецифический антиген - липидная вытяжка бычье­го сердца. Возможность использования такого антигена объясняется тем, что в сыворотке крови больного повышается содержание глобулинов и изменяется степень их дисперсности. Глобулины, вступая в соединение с липидньми экс­трактами, образуют комплекс, который разрушает комплемент, и поэтому гемо­лиз не происходит (в гемолитической системе). Отсутствие гемолиза - положи­тельная реакция - серологически подтверждает диагноз "сифилис". При поста­новке серологических реакций можно использовать специфические антигены из тканевых трепонем и культуральные.

Самостоятельная работа

Цель: Учесть результат готовой реакции Вассермана, поставленной с целью выявления антител в сыворотке крови больного с подозрением на сифилис. Сделать вывод.

Направление:____________________________________________________________________

Ингредиенты:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Механизм:

Постановка:

Аг Аг Аг «К»

Результат:_______________________________________________________________________

Вывод:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

в) Реакция иммобилизации спирохет. К исследуемому материалу прибавляют специфическую сыворотку (кровь больного сифилисом). Через несколько минут трепонемы теряют способность двигаться.

Цель: Записать необходимые компоненты и принцип постановки реакции иммо­билизации трепонем (РИТ) с целью выявления специфических антител в сыво­ротке больного сифилисом.

Ингредиенты	Пробирки
	"К"	"К"	"О"
Сыворотка здоро­вого	+	-	-
Сыворотка больно­го	-	+	+
Физ. р-р	+	-	-
Комплемент инактивированный	-	+	-
Комплемент	-	-	+
Живые тканевые трепонемы	+	+	+

Все пробирки выдерживают в анаэростате при 35⁰С 20 часов, готовят пре­парат "раздавленная капля" и микроскопируют в темном поле зрения. Процент иммобилизованных трепонем определяют по формуле:

х=Тк - То х 100, где Тк

Тк - число подвижных трепонем в контроле (с инактивированным комплементом)

То - число подвижных трепонем в опыте

Учесть результат опыта при: Тк=30, То=12

Результат: положительный, если процент иммобилизации выше 50, отри­цательный - ниже 20, слабо положительный, сомнительный - 30-50, 20-30.

______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________Работа № 5. Экспресс-диагностика сифилиса

Методические указания

При массовом обследовании населения используют экспресс-метод обсле­дования на сифилис. Этот метод дает значимый процент ошибки, поэтому все положительные результаты подтверждаются другими серологическими реак­циями (р. Вассермана, осадочные реакции).

Цель: Поставить и учесть результат экспресс-метода серологического обследования на сифилис.

Сыворотки обследуемых	1	2	3	4	5
Ингредиенты
1 . Инактивирован-ная сыворот­ка	Зк	Зк	Зк	Зк	Зк
2. Эмульсия кардиолипинового антигена	1к	1к	1к	1к	1к
Ингредиенты перемешать (или встряхнуть, если реакция в планшете)
3. Физиологиче­ский раствор	1к	1к	1к	1к	1к
После выпадения хлопьев, учесть результат

Примечание: для демонстрации дается эталон учета результатов.

Положительная реакция (крупные хлопья)	Слабоположительная (хлопья средней величи­ны и мелкие)	Отрицательная (нет хлопьев)
++++ +++	++ +	-

Вывод:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Описать препараты:

Цель: Классифицировать предложенные антимикробные препараты в соответствии с их назначением (профилактические, диагностические, лечебные).