18. Переливание донорской крови у собак.

У собак определено несколько групп крови. Номенклатура групп крови отражает расхождение мнений нескольких авторов, участвовавших в этих исследованиях, и в настоящее время равнозначно применяются две различные классификации:

• DEA = Эритроцитарный Антиген Собаки (напр. DEA 1).

• Заглавная буква для системы и строчная отдельная буква для фактора (например, Са). Иногда прибавляется номер для подтипа (напр., Аа1).

Антигены различных групп крови распознаются специфическими антителами в результате прямых или непрямых реакции (т. с. антиглобулинового теста) агглютинации и гемолиза. Некоторые из этих реакций могут проходить только при определенных температурах (напр., 4°С, 25°С или 37°С). Распределение различных групп крови по породам не изучено в деталях, хотя и сообщалось, что грейхаунды имели очень низкую частоту проявления антигенов DEA 1.1 и 1.2 .(Swisher, S. N., Young, L. E., 1991) (таблица).

Очень немногие группы крови определены как значимые для лечения трансфузией, хотя группы DEA 1.1, 1.2 и 7 являются наиболее распространенными антигенными факторами. У собак, как признано, естественно возникающие антитела являются очень редкими и, если они присутствуют в сыворотке, то в низких титрах или вступают в реакцию при температурах, отличных от температуры тела. На самом деле только около 15% собак демонстрируют естественно возникающие антитела к DEA 3, 4, 5 и 7. Появление таких естественно возникающих антител не следует путать с приобретенными антителами к группам крови. Первые не связаны с каким-либо проявлением иммуностимуляции, в то время как при последних имеется мощная иммунная реакция, вызванная, например, переливанием несовместимой крови. Именно вследствие этих иммуногематологических особенностей крайне редко встречается реакция на первую трансфузию при переливании собаке несовместимой крови (Hohenhaus, A. E., Swisher, S. N.,Young, L. E.)

Тем не менее, на практике, по мнению многих авторов (Hohenhaus, A. E., Swisher, S. N.,Young, L. E., Ogilvie, G.K., Moore, A.S.), более простым и удобным методом является проба на совместимость, нежели определение групп крови донора и реципиента.

Таблица. Характеристики групп крови у собак

Номенклатура			Тип реакции для определения антител
DEA	Система	Факторы	Агглютинация	Антиглобулин	Гемолиз
1.1 А 1.2		а1	+	+	+
		а2	+	+	-
		аЗ	+	+	-
3	B	а	+	-	-
4	C	а	+	-	-
5	D	а	+	(+)	-
6	F	а	+	-	-
7	Tr	tr	+	-	(+)
		о	+	-	(+)
	J	а	-	+	-
	K	А	-	+	-
	L	А	-	+	-
	M	А	-	+	-
	N	А	+	+	-

+ = выбранный метод; (+) = альтернативный метод; - = нет реакции.

Определение.

Донорская кровь собачья – это кровь, полученная от собаки-донора, консервированная официнальными растворами (цитратом фосфата декстрозы с аденином (CDPA-1), или натрием гидроцитратом двузамещенным с глюкозой в соотношении 2 к 3) и предназначенная для переливания в кровеносное русло собаки-реципиента.

Фармакологические свойства.

Лечебный эффект донорской крови собачьей обусловлен ее стимулирующим, замещающим, гемодинамическим и гемостатическим действием.

Перелитая кровь донорская увеличивает объем циркулирующей крови и поддерживает его на высоком уровне длительное время. Переливание донорской крови собакам с кровопотерей усиливает приток тканевой лимфы в кровеносное русло, что улучшает кровоток. На уровне микроциркуляции происходит расширение артериол и венул, ускоряется ток крови в циркулярной сети. Происходит снижение сброса артериальной системы в венозную. Улучшается кислотно-щелочное равновесие и усиливается потребление кислорода.

Гемостатическое действие крови донорской собачьей обуславливается тем, что перелитая донорская кровь вызывает умеренную гиперкоагуляцию, а также стимулирует систему гемостаза за счет содержащихся в крови биологически активных веществ.

Кровь донорская собачья выполняет в организме кислородно-транспортную функцию, что устраняет гипоксию на органном, тканевом и клеточном уровнях и восстанавливает пострадавшие вследствие анемии функции органов и систем. Введенные вместе с кровью белки циркулируют в организме до 36 суток и включаются в процессы обмена.

Кровь донорская собачья вызывает в организме после ее переливания дезинтоксикационный и трофический эффекты .В результате чего повышается основной обмен, увеличивается дыхательный коэффициент, повышается газообмен, стимулируются белковый и углеводный обмены, улучшается функция иммунной системы (Мокеев И.Н., 1999; Hohenhaus, A. E., 1992; Wingfield, W.E., 1997; Ogilvie, G.K., Moore, A.S., 1995; Stone, M.S., Cotter, S.M., 1992).

Показания к применению.

Основными показаниями к применению крови донорской собачьей являются (Hohenhaus A. E, 1992; Kerl M.E., 1993; Wingfield, W.E., 1997; Stone, M.S., Cotter, S.M., 1992; Kirby R., 1995; Crystal M.A., Cotter S.M., 1992):

• Острая кровопотеря.

• Острая гемолитическая анемия.

• Невосстанавливающаяся анемия с гематокритом между 12 и 15%.

• Наследственная или приобретенная коагулопатия.

• Тромбоцитопения, тромбоцитопатия.

• Лейкопения.

• Гипопротеинемия.

Порядок применения.

Кровь донорская собачья применяется для переливания собаке-реципиенту путем внутривенного введения в любые доступные вены. Скорость внутривенной трансфузии цельной крови должна зависеть от клинического состояния реципиента.

В первые 30 минут скорость вливания должна быть около 0,25 мл/кг; нормоволемическим больным кровь следует вводить со скоростью, не превышающей 5 мл крови на кг веса тела каждый час. Этот объем можно осторожно повышать: у гиповолемических особей - до 20 мл/кг/час; в то время как у больных, страдающих сердечно - сосудистой недостаточностью, скорость введения следует снижать до 0,5-1,0 мл/кг /час.

Количество вводимой крови определяется из расчета, что введение 2 мл цельной крови на кг веса тела повышает гематокрит реципиента на 1%.

Внимание! Перед введением крови донорской собачьей реципиенту обязательно должны быть проведены пробы на совместимость (перекрёстная и биологическая пробы).

Проба на совместимость.

Перекрёстная проба (in vitro)

1 этап. Эритроциты донора, промытые 3 раза и взвешенные в физрастворе (1:1), приводятся в контакт с гепаринизированной плазмой или сывороткой крови реципиента (по 1 капле) на предметном стекле или в пробирке. Через 5 минут пробы проверяют на гемолиз и гемагглютинацию.

2 этап. Идентичен предыдущему этапу, но при проведении теста используются эритроциты от реципиента и сыворотка или гепаринизированная плазма от донора. Оценка пробы идентичная.

Перекрестная проба для собак, если позволяет время, должна быть выполнена при трех температурах 4^оС, 25^оС, 37^оС, или, по крайней мере, при 25^оС и при 37^оС.

При проведении пробы в лабораторных условиях мягкое центрифугирование – 1000 G в течение 2 мин после контакта промытых эритроцитов с сывороткой поможет демонстрации гемолиза.

Оценка реакции.

Отрицательная проба: отсутствие гемолиза и гемагглютинации свидетельствует о совместимости крови донора и реципиента. Переливание крови разрешается.

Положительная проба: наличие гемолиза и (или) гемагглютинации в проводимых реакциях свидетельствует о несовместимости крови; переливание в таком случае запрещено (Hohenhaus, A. E., 1992; Wingfield, W.E., 1997; Ogilvie, G.K., Moore, A.S., 1995; Stone, M.S., Cotter, S.M., 1992 Kerl M.E., 1993; Wingfield, W.E., 1997; Stone, M.S., Cotter, S.M., 1992; Kirby R., 1995; Crystal M.A., Cotter S.M., 1992).

Биологическая проба (in vivo).

Биологическую пробу проводят независимо от объема переливаемой крови и скорости ее введения. Проба проводится после отрицательной перекрестной пробы на совместимость

1. Контейнер с цельной кровью извлекают из холодильника и выдерживают при комнатной температуре в течение 30 мин.

2. Однократно переливается 10 мл донорской крови собачьей со скоростью 2-3 мл/мин, затем переливание прекращают и в течение 3 минут наблюдают за реципиентом, контролируя у него пульс, дыхание, общее состояние, цвет кожи, измеряют температуру тела.

Такую процедуру проделывают еще дважды. Появление в этот период даже одного из таких клинических симптомов, как озноб, тошнота или рвота, покраснение кожи, требует немедленного прекращения трансфузии и отказа от переливания.

Побочные действия.

Гемолиз. Проявляется редко. Характеризуется подъемом температуры тела, увеличением частоты сердечных сокращений и дыхания, тремором, рвотой, коллапсом. При возникновении гемолиза начинают введение кристаллоидных растворов и контролируют выход мочи.

Лихорадка. Может свидетельствовать о бактериальной контаминации крови или быть связана с антигенами лейкоцитов, ускоряющих высвобождение эндогенных пирогенов. У собак встречается редко.

Аллергические реакции. Проявляются сыпью и ангионевротическим отеком. При обнаружении данных признаков переливание прекращают и вводят глюкокортикоиды.

Токсические эффекты консерванта. Проявляются в виде быстрого снижения концентрации ионизированного кальция. Клинически это состояние характеризуется мышечным тремором, подергиванием лицевых мышц и судорогами. В этом случае трансфузию прекращают и внутривенно вводят глюконат кальция. (Hohenhaus, A. E., 1992; Wingfield, W.E., 1997; Ogilvie, G.K., Moore, A.S., 1995; Stone, M.S., Cotter, S.M., 1992; Kerl M.E., 1993; Wingfield, W.E., 1997; Stone, M.S., Cotter, S.M., 1992; Kirby R., 1995; Crystal M.A., Cotter S.M., 1992).

Нормативные документы на кровь донорскую собачью, включающие качество, требование к качеству, составу и свойствам.

Требования к донорам и качество донорской крови.

При заборе вся кровь, поступающая от донора, должна пройти тщательный анализ.

Прежде всего, оценивается клиническое состояние собаки-донора.

Собака-донор должна соответствовать следующим требованиям:

• Вес выше 25 кг

• Возраст от 2 до 8 лет

• Спокойный характер

• Гематокрит выше 45 %

• Регулярная вакцинация против основных инфекционных заболеваний

• Клинически здорова по результатам осмотра.

Затем, после забора, кровь проходит полное лабораторное исследование:

Гематологическое исследование. Определяется гематокрит, гемоглобин, количество эритроцитов, лейкоцитов, лейкограмма. Гематокрит должен составлять не менее 45 %, все остальные параметры также не должны иметь отклонений от нормы.

Биохимическое исследование. Измеряются основные биохимические показатели: билирубин общий, прямой, АСТ, АЛТ, мочевина, креатинин, общий белок, альбумин, щелочная фосфатаза, амилаза, глюкоза, ЛДГ, ТТГ, КФК, триглецириды, калий, натрий, кальций, магний, железо, хлор.

Исследование на инфекционные заболевания. Кровь донорская после получения обязательно обследуется на инфекционные заболевания – на вирус чумы плотоядных, вирусный гепатит и др. Кровь на должна давать положительные реакции на любые инфекционные заболевания.

Кроме того, по эпизоотологическим данным, кровь исследуется на кровопаразитарные заболевания, такие как бабезиоз, дирофиляриоз и др.

Затем, перед тем, как приступить к переливанию донорской крови, необходимо убедиться в ее пригодности к переливанию. Визуально проверяется герметичность упаковки, макроскопически оценивается качество донорской крови. Определять годность крови необходимо при достаточном освещении непосредственно на месте хранения, не допуская взбалтывания. Критериями годности для переливания являются: прозрачность плазмы, равномерность верхнего слоя эритроцитов, наличие четкой границы между эритроцитами и плазмой. При возможном бактериальном загрязнении цельной крови цвет плазмы будет тусклым, с серо-бурым оттенком, она теряет прозрачность, в ней появляются взвешенные частицы в виде хлопьев или пленок. Такая донорская кровь переливанию не подлежит.

Кроме того, показателем качества перелитой донорской крови является клиническое улучшение состояния реципиента, такие как увеличение объема циркулирующей крови, увеличение гематокрита реципиента, при коагулопатиях – уменьшение или исчезновение кровотечений, изменение цвета слизистых с бледных до розовых и слабо розовых, улучшение или появление аппетита и др.

Требования к качеству:

1. Клинически здоровые доноры

2. Соответствующие нормам показатели биохимического, гематологического, инфекционного и паразитарного исследований донорской крови.

3. Макроскопическая оценка хранящейся крови, соответствующая норме.

4. Отсутствие бактериального заражения хранимой крови.

5. Соблюдение температурного режима хранения крови (+2 +4 С).

6. Не использования крови по истечению срока хранения (21 сутки).

7. Клиническое улучшение состояния реципиента в течение 1-2 суток после переливания донорской крови.

19. гормональная и Цитологическая оценка полового цикла.

Таблица. Половой цикл у сук

Под половым циклом понимают обычно весь комплекс процессов, протекающих в репродуктивной системе самки млекопитающих. После наступления половой зрелости в яичниках происходит интенсивное развитие фолликулов, причем рост и созревание идет волнообразно, что соответствует ритмике половых циклов данного животного.

Половой цикл можно условно разделить на два периода - покоя и половой активности, иногда именуемый в собаководстве «пустовка». Период половой активности продолжается у сук 25 - 27 дней и подразделяется на три фазы: проэструс (предтечка), эструс (течка) и метэструс (диэструс, послетечка). Все они характеризуются определенными морфофизиологическими изменениями в репродуктивной системе и в поведении.

Цитологическое исследование влагалищных мазков

(Предполагаемый день овуляции, Код 303).

Исследование в Лаборатории «Шанс Био» - 30 мин.

Исследуемый материал: влагалищный мазок.

Взятие, хранение, доставка материала: мазок делается с помощью цервикального зонда (цитощетки), обязательно используя влагалищное зеркало. Зондом (цитощеткой) делается тонкий, монослойный мазок на стекло. Стекла сушаться на воздухе.

Обязательно приложить направление с указанием дня течки, последней вязки.

Важно при взятии мазка из влагалища использовать влагалищное зеркало для предотвращения попадания в материал эпителиальных клеток из преддверия и с кожи. Мазок делается цитощеткой для цервикальных мазков, затем равномерно распределяется по предметному стеклу.

Циклические изменения, происходящие во влагалище, дают возможность цитологической оценки сроков овуляции. Период половой активности отличается усиленным размножением клеток влагалищного эпителия, ороговением и отторжением его поверхностных слоев. Клеточные элементы, их количество и соотношение позволяют точно установить фазу полового цикла.

На момент овуляции отмечается ороговевание подавляющего числа клеток эпителия (более 80%) во влагалищном мазке.

Существует одно НО: это наблюдается только у 75% сук. Те есть, точность метода составляет 75%, что довольно много.

Гормональное исследование полового цикла.

Исследование в Лаборатории «Шанс Био» - до 10 дней.

Исследуемый материал: сыворотка крови.

Взятие: Натощак, обязательно перед проведением диагностических или лечебных процедур. Кровь берется в сухую, чистую пробирку (одноразовую) (пробирка с белой или красной крышкой). Используют иглу с большим просветом (без шприца, исключения только при трудных венах). Кровь должна стекать по стенке пробирки. Плавно перемешать, плотно закрыть.

Хранение: Сыворотка или плазма должны быть отделены как можно быстрее (идеально отделять сразу после взятия, сыворотка замораживается)..

Хранится материал от 30 минут (при комн. температуре) до нескольких недель в замороженном виде (размораживать пробу можно только один раз).

Доставка: Доставить кровь следует в кротчайшие сроки в сумке-холодильнике. Замороженную сыворотку доставлять только на льду!!!

Прогестерон (Код 610)

Референтные интервалы Лаборатории «Шанс Био»:

• Собаки, суки, фолликулиновая фаза - 1,0 – 10,0 нг/мл

• Собаки, суки, лютеиновая фаза, метэструс 10,0 – 80,0 нг/мл

• Собаки, суки, анэструс - менее 1,0 нг/мл

Уровень прогестерона начинает повышаться с фоновых значений за 2-4 дня до наступления эструса, и достигает пика к окончанию течки, после чего отмечается длительный постепенный спад в течение двух месяцев.

Уровень прогестерона не используется для диагностики беременности!

Эстрадиол (Код 602)

Референтные интервалы Лаборатории «Шанс Био»:

• Собаки, суки, фолликулиновая фаза - 5,0 – 40,0 пг/мл

• Собаки, суки, лютеиновая фаза 10,0 – 30,0 пг/мл

• Собаки, суки, анэструс, метэструс - менее 8,0 пг/мл

• Собаки, кобели - менее 25,0 пг/мл

Подъём уровня эстрадиола начинается за 4 недели до начала проэструса, что может дать команду владельцу животного к подготовке вязки. Пик эстрадиола приходится на начало эструса, после чего, следует длительный спад.

Лютеинизирующий гормон (ЛГ) (Код 607)

Референтные интервалы Лаборатории «Шанс Био»:

• Собаки, суки, фолликулиновая фаза - 1,8 – 15,0 МЕ/л

• Собаки, суки, лютеиновая фаза 0,6 – 15,0 МЕ/л

Фаза лютеинизации у собак начинается, в отличие от людей, до овуляции. Пик активности ЛГ приходится на начало эструса, а собственно, активность, продолжается два - четыре дня, после чего, уровень ЛГ опять опускается до фоновых значений.

фолликулостимулирующий гормон (ФСГ) (Код 608)

Референтные интервалы Лаборатории «Шанс Био»:

• Собаки, суки, фолликулиновая фаза - 2,4 – 10,0 МЕ/л

• Собаки, суки, лютеиновая фаза 0,01 – 6,4 МЕ/л

ФСГ стимулирует секрецию эстрогенов, рости и созревание фолликулов.

Повышение ФСГ может свидетельствовать о функциональной недостаточности яичников, первичном гипогонадизме.

Понижение – гиперэстрогенемия, вторичный гипогонадизм, нарушение полового цикла и бесплодие.