- •Независимая ветеринарная лаборатория «Шанс Био» е.Н. Бурмистров
- •Москва, 2006.
- •1. Контороль качества лабораторных исследований.
- •1.1. Внутрилабораторный контроль качества
- •1.2. Врач-клиницист и анализы.
- •3. Клинический анализ крови (Код 201).
- •1. Хронических, острых лейкозах;
- •2. Гнойных заболеваниях внутренних органов (пиометра, абсцессы и пр.)
- •4. Биохимическое исследование крови (Код 101 - 199)
- •Гамма-глутамилтрансфераза (ггт) (Код 113).
- •Амилаза (диастаза) (Код 109).
- •4.2. Субстраты и жиры
- •Билирубин прямой (Код 102).
- •Мочевина (Код 105).
- •Креатинин (Код 106).
- •Общий белок (Код 107).
- •Альбумин (Код 112).
- •Глюкоза (Код 110).
- •Холестерин (Код 114).
- •Триглицериды (Код 115).
- •4.3. Электролиты Калий (к) (Код 117).
- •5. Определение фракций общего белка (Электрофорез)(Код 920).
- •6. Определение иммуноглобулинов (IgA, IgM, IgG) (Код 930). Иммунодефициты.
- •7. ИСследование коагуляционного гемостаза (Код 202).
- •Протромбиновый индекс
- •8. Клинический анализ мочи (Код 301).
- •Физико-химические свойства
- •Билирубин
- •Мочевой осадок Эритроциты
- •9. Клиническое Исследование кала (Код 401).
- •10. Содержание гормонов в крови (Код 601 - 649)
- •11. МикробиологическиЕ исследованИя ((Код 701 - 703. 403)
- •12. Диагностика инфекций (Код 001 - 099)
- •Области применения пцр
- •Преимущества метода пцр
- •13. Патоморфология.
- •13.1. Цитологическое исследование (Код 801, 802)
- •13.2. Гистологическое исследование (Код 803)
- •14. Лабораторная диагностика при инфаркте миокарда.
- •15. Избранные исследования при сахарном диабете.
- •1. Гипергликемия
- •2. Глюкозурия
- •3. Тест толерантности к глюкозе (ТестТг)
- •4. Определение инсулина и глюкагона в сыворотке крови.
- •16. Избранные Лабораторные исследования при патологии печени
- •17. Избранные лабораторные исследования при патологии почек.
- •18. Переливание донорской крови у собак.
- •20. Влияние лекарственных веществ на некоторые показатели
- •21. Основные исследования в «Шанс Био», коды исследований
- •22. Профили исследований в лаборатории «Шанс Био»
- •134 Независимая ветеринарная лаборатория «Шанс Био», 2006
Области применения пцр
Ведущие фирмы мира уделяют огромное внимание развитию методов ПЦР-диагностики. В настоящее время ПЦР широко используется в ветеринарии для диагностики инфекционных заболеваний бактериальной и вирусной природы, а также для получения рекомбинантных вакцин. Мы приводим неполный перечень тех областей, в которых используют ПЦР:
Молекулярная биология
Медицина
Ветеринария
Судебно-медицинская экспертиза
Палеонтология
Пищевая промышленность
Контроль состояния окружающей среды
Принцип лабораторной диагностики при помощи ПЦР
Необходимым этапом является взятие проб для анализа у различных животных, в зависимости от заболевания. Первым шагом является выделение нуклеиновых кислот (ДНК или РНК). ДНК и РНК можно выделять из различных биологических образцов (крови, мочи, мокроты, костной ткани, биопсийного материала и даже из одиночного волоса). С помощью двух специфических праймеров – зондов и фермента (фрагмента Кленова) количество фрагмента-мишени (выбранного участка ДНК) можно увеличить в миллионы раз. С помощью метода ПЦР можно определять как ДНК- , так и РНК- содержащие вирусы, в исследуемых образцах. При детекции РНК, перед проведением ПЦР, должна быть проведена реакция обратной транскрипции (синтез ДНК- копии на основе выделенной РНК). Последним шагом является учет продуктов амплификации методом электрофореза в агарозном геле.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это серия повторяющихся циклов полимеразной реакции in vitro (в пробирке), т.е. увеличение числа копий определенного участка ДНК, контролируемое человеком.
ПЦР состоит из следующих стадий:
Денатурации 94-95ºС (переход двухцепочечной формы ДНК в одноцепочечную форму, под действием высокой температуры)
Отжига (гибридизации) праймеров 50-60ºС (одноцепочечные участки ДНК и праймеров, комплиментарные друг другу, «отжигаются», т.е. образуют двухцепочечную форму ДНК.)
Полимеризации или элонгации (удлинение) цепи ДНК 72ºС (термостабильная ДНК-полимераза, или фрагмент Кленова, начинает синтезировать (достраивать) вторую цепочку по принципу комплементарности ДНК)
Для детекции продуктов ПЦР используется электрофорез, как самый простой. Дешевый и доступный метод на сегодняшний день. Электрофорез проводится в агарозном геле, содержащим бромистый этидий (агент связывающийся с нуклеиновыми кислотами и светящийся под действием ультрафиолетового света). Под действием электрического тока молекулы ДНК движутся от отрицательного полюса к положительному, при этом молекулы ДНК разной величины движутся с разной скоростью: короткие фрагменты за одно и тоже время походят большее расстояние от старта, чем длинные. После просматривания геля в ультрафиолетовом свете можно говорить о результатах ПЦР ( в случае успешного проведения ПЦР на геле видны светящиеся полоски).
Преимущества метода пцр
Чувствительность достигает 10-15 г, (что составляет несколько копий инфекционного агента на пробу объемом 0,2 мл)
Специфичность
Возможность диагностики латентных вирусных инфекций
Возможность обнаружения агрегированного возбудителя
Возможность дифференциации видов возбудителей
Возможность быстрого выявления возбудителя