12. Диагностика инфекций (Код 001 - 099)

Исследование в Лаборатории «Шанс Био»:

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – 1 – 3 дня.

Иммунохроматография (ИХ) – 30 мин

Исследуемый материал и методы исследования: см. таблицу ниже.

код	инфекции	Метод	материал
001	Аденовироз респираторный	ПЦР	Выделения из носа, глаз
002	Бореллиоз (болезнь Лайма)	ПЦР	Кровь, суставная жидкость
003	Бруцеллез	ПЦР	Кровь, синовиальная жидкость, околоплодная жидкость, абортированный плод
004	Вирусная лейкемия кошек	ПЦР	Кровь
005	Вирусный гепатит собак	ПЦР	сыворотка крови, кал
006	Вирусный иммунодефицит кошек	ПЦР	Кровь
007	Вирусный перитонит кошек	ПЦР	Асцитная жидкость, торакальный выпот, кровь
008	Вирусный ринотрахеит кошек	ПЦР	Смывы со слизистых носа, глаз, мокрота
009	Герпесвирус (тип 1,2)	ПЦР	Смывы со слизистых
010	Грипп лошадей	ПЦР	Кровь, смывы со слизистых, мокрота
011	Грипп птиц	ПЦР	Кровь, выделения из респираторных органов, части органов и тканей
012	Дирофилляриоз	ИХ	Кровь
013	Калицивироз кошек	ПЦР	Смывы с язв ротовой полости, выделения из носа и рта
014	Криптоспоридиоз	ИХ	Фекалии
015	Короновирусная инфекция	ПЦР	Фекалии
016	Лейкоз КРС	ПЦР	Кровь
017	Лептоспироз	ПЦР	До 5-7 дня болезни - кровь, позже - моча
018	Лямблиоз	ИХ	Фекалии
019	Микоплазмоз	ПЦР	Смывы со слизистых, синовиальная жидкость, мокрота, выделения из носа и глаз
020	Панлейкопения кошек	ИХ, ПЦР	Кровь, фекалии
021	Парвовирусная инфекция собак	ИХ, ПЦР	Кровь, фекалии
022	Сальмонеллез	ПЦР	Фекалии
023	Токсоплазмоз	ПЦР	Кошки - мазки из прямой кишки, фекалии; Собаки – кровь (сыворотка)
024	Туберкулез	ПЦР	Мокрота, выделения из носоглотки, участки пораженных органов
025	Хламидиоз	ПЦР	Смывы со слизистых, сперма, околоплодные воды
026	Хеликобактериоз	ПЦР	Рвотные массы (свежие), биоптаты слизистой желудка
027	Цитомегаловирус	ПЦР	Кровь, мазки и смывы со слизистых
028	Чума плотоядных	ИХ, ПЦР	До 5 дней болезни - кровь, позже - смывы, гнойные выделения

Хранение, транспортировка:

Смывы со слизистых и выделения берут с помощью ватных палочек, помещают в пробирки Эппендорфа, с 0,5 мл физраствора (обрезая пластиковую палочку). Кровь – аналогично биохимии (пробирка с красной или белой крышкой).

Материал для анализов доставляется в лабораторию в день взятия или на следующий день. Допускается хранение в холодильнике (4^оС) в течение 4-5 дней.

В условиях заморозки до -20^оС образцы могут храниться до 30 дней (при этом, из крови необходимо отделить сыворотку).

Повторное замораживание образцов не допускается!

Пробы мочи замораживанию не подлежат!

полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Полимеразная цепная реакция была открыта в 1984 году, американским ученым Кэрри Мюллисом, который впервые показал возможность амплификации (многократного увеличения числа копий) участков ДНК в пробирке, в процессе реакции, главной особенностью которой являются повторяющиеся температурные циклы.

В 1985 году были показаны практические возможности применения ПЦР. Начиная с 1988 году, ПЦР с использованием термостабильной ДНК-полимеразы, получила широкое распространение. Уже в 1989 г. журнал «Science» назвал ДНК-полимеразу молекулой года. Однако мало кто знает, что в 1980 г. термостабильная ДНК-полимераза была выделена в России Городецким.

Метод ПЦР позволяет определять малые и сверхмалые количества нуклеиновых кислот, следовательно, ПЦР поднимает лабораторную диагностику на принципиально новый уровень – уровень прямого обнаружения инфекционного агента как вирусной, так и бактериальной природы. Методом ПЦР можно определить любое изменение в генетическом материале, в том числе и единичную мутацию.

1980 – В России выделена термостабильная ДНК-полимераза (Городецкий)

1984 – Mullis (США) предложил принцип амплификации ДНК

1985 – Saiki Saiki с соавторами (США) впервые амплифицировали фрагмент ДНК (β-глобиновый ген) с использованием термочувствительной ДНК-полимеразы (фрагмент Кленова)

1987 – Mullis и Falloona амплифицировали ДНК человека

1988 – ПЦР стали проводить с использованием термостабильной ДНК-полимеразы

Внедрение метода ПЦР в лабораторную практику стало одним из наиболее важных событий в медицине и молекулярной биологии в последнее десятилетие.