- •ОГЛАВЛЕНИЕ
- •ПРЕДИСЛОВИЕ
- •МОДУЛЬ 1. ВВЕДЕНИЕ В ПРЕДМЕТ «БИОТЕХНОЛОГИЯ»
- •Работа 1.1. Планирование эксперимента и построение модели на примере выращивания микроорганизмов
- •Работа 1.2. Модели роста микроорганизмов
- •Вопросы:
- •Работа 1.3. Фазы роста микробиологических культур и расчет кинетических параметров
- •Вопросы:
- •МОДУЛЬ 2. ПРОМЫШЛЕННАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ
- •Задачи:
- •Работа 2.1. Типы ферментационных процессов
- •Работа 2.2. Периодическое культивирование микроорганизмов и культивирование с подпиткой субстратом
- •Вопросы:
- •Вопросы:
- •Вопросы:
- •Вопросы:
- •Работа 2.6. Методы выделения и очистки целевого биотехнологического продукта
- •Работа 2.7. Методы анализа содержания основных (общий азот, белок)
- •Вопросы:
- •Работа 2.8. Методы анализа запасных (полисахара, биополимеры) клеточных макромолекул
- •Вопросы:
- •МОДУЛЬ 3. ИНЖЕНЕРНАЯ ЭНЗИМОЛОГИЯ
- •Работа 3.1. Выделение ферментов (на примере светящихся белков)
- •Вопросы:
- •Работа 3.2. Методы детекции ферментативной активности
- •Вопросы:
- •Задачи:
- •Работа 5.1. Иммобилизация микробных клеток
- •Вопросы:
- •Вопросы:
- •МОДУЛЬ 6. КЛЕТОЧНАЯ И ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ИНЖЕНЕРИЯ
- •Вопросы:
- •Вопросы:
- •МОДУЛЬ 7. СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ БИОТЕХНОЛОГИЯ
- •Вопросы:
- •МОДУЛЬ 8. ПЕРСПЕКТИВЫ РАЗВИТИЯ БИОТЕХНОЛОГИИ
- •СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
МОДУЛЬ 2. ПРОМЫШЛЕННАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ
Цель – продемонстрировать методы и возможности промышленной микробиологии; ознакомить с типами управляемого культивирования микроорганизмов для получения кинетических констант, расчета параметров био-
технологических процессов и получения целевых продуктов.
Задачи:
–обучениетехникекультивированиямикроорганизмоввпроточныхрежимах;
–продемонстрировать возможности методологии теоретикоэкспериментального подхода для нахождения продукционных характеристик
икинетических констант продуцирующей микробной культуры в условиях оптимального и лимитированного по субстрату роста;
–обучение методам влияния параметров ферментации и состава питательных сред на биохимическую программу синтеза клеточных основных и запасных макромолекул;
–ознакомление с современными методами выделения и очистки целевых продуктов из микробной биомассы;
–освоение методов количественного анализа внутриклеточного пула макромолекул (белков, полисахаров, биополимеров).
Работа 2.1. Типы ферментационных процессов
Цель работы: дать представление о технике и методах культивирования микроорганизмов.
Стадия ферментации является основной стадией в биотехнологическом процессе. На этой стадии происходит взаимодействие продуцента с субстратом и образование целевых продуктов (биомасс, эндо- и экзопродуктов). Эта стадия осуществляется в биохимическом реакторе (ферментере) и может быть организована в зависимости от особенностей используемого продуцента и требований к типу и качеству конечного продукта различными способами.
Ферментация может проходить в строго асептических условиях или без соблюдения правил стерильности (так называемая «незащищенная» ферментация). Ферментация может осуществляться на жидких (жидкофазная) и на твердых (твердофазная) средах; анаэробно и аэробно. Аэробная ферментация может протекать поверхностно или глубинно (во всей толще питательной среды).
Обеспечение процесса ферментации сводится к дозированному поступлению в ферментер потоков (инокулята, воздуха (или газовых смесей), питательных биогенов, пеногасителей) и отвода из него тепла, отработанного воздуха, культуральной жидкости, а также измерению и стабилизации основных параметров процесса на уровне, требуемом для оптимального развития продуцента и образования целевого продукта.
Принципиальная технологическая схема ферментационного процесса представлена на рис. 2.1.
Введение в биотехнологию. Метод. указания по лабораторным работам |
-18- |
МОДУЛЬ 2. ПРОМЫШЛЕННАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ
Работа 2.1. Типы ферментационных процессов
, |
м |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
- |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||
в |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
ыой |
и |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||
о |
я |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
и и |
и |
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||
р |
л |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
т |
н |
н |
р |
я |
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||
т |
е |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
к |
т |
и |
к |
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||
е |
) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
у |
ч |
е |
н |
т |
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||
м д |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
д |
и |
п |
е |
н |
с |
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||
|
о |
М |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
о |
л |
е |
|
а |
и |
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||
а |
м |
|
П |
|
|
|
|
|
|
|
|
ц в |
ч |
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||||||
р |
В |
|
|
|
|
|
|
|
|
р |
аз |
ст |
н |
о о |
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||
а |
. |
|
|
|
|
|
Э |
Т |
|
|
|
|
|
|
|
|
П р |
|
|
о |
р |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
п |
ат |
|
|
( |
У |
|
|
|
|
|
|
2 |
|
|
|
|
|
к |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||||
а |
м |
Р |
С |
|
|
|
|
|
|
2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||
к |
о |
А |
А |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||
ов |
п |
С |
|
|
|
6 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||
н . |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||
а |
.ч |
|
|
|
|
1 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||
т |
т |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||
с |
в |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||
У |
|
|
|
|
3 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
н- |
|
|
|
|
|
2ы |
е |
, |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
к |
о-и |
|
я |
|
|
|||||
|
|
|
|
|
|
ы |
|
|
|
с |
ые) ы |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
б |
ю |
е |
|||||||||||
|
|
|
|
|
е |
|
|
|
|
с |
в ын |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
и |
а |
и |
|||||||||||
|
|
|
|
|
ц ат |
2 |
|
|
а |
о |
в и |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
ч |
и |
ц |
и |
||||||||||
|
|
|
|
|
н |
|
р |
|
|
м |
м и ц |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
т |
н |
ц |
а |
н |
|||||||||
|
|
|
|
|
о |
|
2 |
|
|
о |
р |
ж к |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
а |
ы |
а |
м е |
|||||||||
|
|
|
|
|
К |
|
т |
|
|
|
и |
о |
|
а |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
д |
д |
д |
р |
л |
||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Б |
к |
и в |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
о |
а |
о |
в |
||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
( |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
з |
о |
р |
ф |
а |
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
1 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
н |
х |
г |
н |
р |
|||
ы |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
е |
т |
е |
п |
|||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Т |
О |
д |
И |
У |
||||
т |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||
ку |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
д |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
о |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
р |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
п |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
еы |
|
|
9 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||
н |
|
|
1 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
аз |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
рб |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
о |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
0 |
|
|
4 |
|
|
|
|
|
|
о |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
аз |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
2 |
|
|
1 |
|
|
|
|
|
|
Г |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
7 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
1 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
8 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
1 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
5 |
|
6 |
|
|
|
|
|
1 |
|
|
|
|
|
1 |
|
к |
|
6 |
Н |
|
6 |
6 |
|
|
1 |
р |
|
1 |
|
|
с |
к |
П |
|
1 |
к |
|
|
к |
|
||||
оП |
|
ос |
|
|
|
|
Н |
|
П |
|
|
|
с |
р |
|
В |
|
|
|
о |
|
|
В |
р |
0 |
|
П |
|
|
р |
В |
|||
|
9 |
А |
С |
1 |
||
|
П |
|
|
С |
|
|
|
|
|
|
|
|
1 |
2 |
|
|
|
|
||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||
|
еи |
1 |
1 р |
3 |
|
|
|
|||||||||||||||
8 |
н |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
С |
|
|
|
||||
|
ав |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
8 |
|
|
1 |
|
|
|
|||||
|
и |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
|
лв |
|
|
7 |
|
|
|
|
|
|
||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||||||||
|
а |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
|
д |
6 |
|
|
|
|
|
|
||||||||||||||
|
е |
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||||
|
р |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
еП |
|
|
|
|
|
|
|
5 |
|
|
3 |
|
|
|
|||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||
|
|
|
|
|
4 |
|
|
|
|
|
||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||||
ум |
|
|
|
|
|
|
2 |
|
|
|
|
|
||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
ку |
1 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
а |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
В |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Рис. 2.1. Принципиальная схема реализации биотехнологических процессов:
1 – реактор для приготовления сред, 2 – вихревой насос, 3 – аппарат для приготовления твердых сред, 4 – паровая колонка для подогрева сред до температуры стерилизации, 5 – выдерживатель сред при температуре стерилизации, 6 – теплообменник для охлаждения сред, 7 – мерник – сборник питательной среды, 8 – дозатор, 9 – анаэробный ферментер, 10 – глубинный аэробный ферментер, 11 – биокаталитический реактор, 12 – ферментер для поверхностной твердофазной ферментации, 13 – то же для поверхностной жидкостной ферментации, 14 – экстрактор, 15 – сепаратор для отделения биомассы, 16 – система локальной автоматики, 17 – плазмолизатор биомассы, 18 – дезинтегратор биомассы, 19 – выпарная установка, 20 – фракционирование дезинтегратов, 21 – сушилка и другие аппараты для обезвоживания, 22 – аппаратура для расфасовки продукта, 23 – ионообменные
колонны, аппараты для химических и мембранных методов выделения, центрифуги, фильтры, кристаллизаторы и др. устройства.
Условные обозначения: рН – раствор для коррекции рН, П – компоненты и среды для подпитки, Пос – посевной материал, В – сжатый воздух, ПАВ – пеногаситель,
Ср – стерильная питательная среда, БА – биологический агент
Введение в биотехнологию. Метод. указания по лабораторным работам |
-19- |