Самостійна аудиторна робота

І. Дайте характеристику біохімічних компонентів плазми крові за схемою:

Компоненти	Біохімічний ефект	Норма	Діагностичне значення

ІІ. Виконати лабораторну роботи „Визначення вмісту білка біуретовим методом” і захистити протокол.

Визначення вмісту білка біуретовим методом.

Принцип методу. Вимірювання інтенсивності забарвлення, яке утворюється при взаємодії пептидних зв’язків білка з сульфатом міді в лужному середовищі. Інтенсивність забарвлення прямо пропорційна концентрації білка і визначається за допомогою фотоелектроколориметра.

Хід роботи. В першу пробірку наливають 0,1 мл сироватки крові, в другу - 0,1 мл стандартного розчину білка; в третю - 0,1 м 0,9% розчину хлориду натрію (контроль). У всі пробірки наливають по 5 мл біуретового реактиву, перемішують і через 30 хвилин визначають екстинкцію за допомогою ФЕКа в кюветах 10 мм при червоному світлофільтрі (750 нм) контрольного розчину.

Розрахунок проводять за формулою:

А х В

Х = --------- , де

С

Х – вміст білка в досліджуваній пробі, г/л;

А - екстинкція сироватки крові;

В - концентрація білка в стандартному розчині, г/л;

С - екстинкція стандартного розчину білка.

Література

1. Гонський Я.І., Максимчук Т.П. Біохімія людини. Тернопіль: Укрмедкнига, 2001. – 736с.

2. Губський Ю.І. Біологічна хімія. – Київ-Тернопіль: Укрмедкнига, 2000. – 508с.

3. Гонський Я.І., Максимчук Т.П., Калинський М.І. Біохімія людини. Підручник. – Тернопіль: Укрмедкнига, 2002. – 744с.

4.Скляров О.Я. Клінічна біохімія. – Київ: Здоров`я, 453с.

Обговорено і затверджено на засіданні кафедри, протокол №1 від 28.08.2008р.

Зав. кафедрою проф. Ерстенюк А.М.

Заняття № 18

Тема: Біохімія еритроцитів і лейкоцитів. Структура і функції гемоглобіну.

Актуальність: Особливості структури й метаболізму еритроцитів і лейкоцитів забезпечують процеси газообміну, знешкодження токсичних речовин, які відіграють першочергову роль у підтриманні гомеостазу організму.

Навчальні цілі

Знати: закономірності обміну речовин у форменних елементах крові і їх біологічну роль.

Вміти: визначати вміст гемоглобіну в крові і трактувати одержані дані.

Самостійна позааудиторна робота

У зошитах для протоколів:

1. Намалювати графік насичення гемоглобіну киснем. Про що свідчить форма кривої?

2. Написати рівняння реакцій, які пояснюють буферну функцію Нb.

3. Написати рівняння реакцій, які лежать в основі бактерицидної дії лейкоцитів.

4. Підготувати вихідні дані для виконання лабораторної роботи „Визначення гемоглобіну крові гемоглобінціанідним методом”.

Контрольні питання

1. Особливості будови й метаболізму еритроцитів.

2. Транспорт кисню і вуглекислого газу кров'ю.

3. Причини різних форм гіпоксій.

4. Буферна функція гемоглобіну.

5. Особливості будови й метаболізму лейкоцитів. Молекулярні основи бактеріцидної дії фагоцитів.

6. Будова гемоглобіну. Нb A_1, Нb A₂, Нb F.

Самостійна аудиторна робота

І. Дати характеристику еритроцитів і лейкоцитів за схемою:

Клітини крові	Особливості будови	Метаболічні шляхи	Функції

ІІ. Виконати лабораторну роботи „Визначення гемоглобіну крові гемоглобінціанідним методом”.

Принцип методу. Гемоглобін при взаємодії з залізосинеродистим калієм (червона кров'яна сіль) окислюється в метгемглобін (геміглобін), який з ацетонціангідрином утворює забарвлену сполуку геміглобінціанід, інтенсивність забарвлення якого пропорційна кількості гемоглобіну.

Хід роботи. 0,02 мл крові виливають до 5,0 мл трансформуючого розчину (готують з набору перед застосуванням і зберігають в посудині з темного скла) в пробірку і добре перемішують. Через 10 хвилин вимірюють на ФЕКу при 500-600 нм (зелений світофільтр) в кюветі з товщиною шару 10 мм проти сліпого досліду (трансформуючого розчину), на спектрофотометрі при довжині хвилі 540нм або на гемоглобінометрі. Стандартний розчин вимірюють при тих же умовах, що і дослідну пробу. Розрахунок проводять за допомогою калібрувальної кривої або за формулою:

Нв (г %) = Е_досл. Х С х К х 0,001, де

Е_ст.

Е_досл – екстинція дослідної проби;

Е_ст – екстинція стандартного розчину;

С – концентрація гемоглобінціаніду в стандартному розчині (мг%);

К – коефіцієнт розведення крові;

0,001 – коефіцієнт для перерахунку гемоглобіну з мг% в г%.