Коефіцієнт молярної екстинкції деяких цитохромів

Назва речовини	Довжина хвилі, нм	Молярний коефіцієнт поглинання, М-1  см-1
Цитохром Р450	450	91  103
Цитохром b5	408	164  103
Цитохром с	550	29,5  103
Цитохром Р420	420	110  103

Хід роботи

Розрахунок вмісту цитохромів b₅ та Р₄₅₀ проводяться за формулою (1) та спектрами поглинання (рис. 8.4).

Рис. 8.4. Спектр поглинання цитохромів b₅ та Р-450:

- цитохром Р₄₅₀ має характерний max при довжині хвилі 450 нм;

- цитохрому b₅ має mіn при довжині хвилі 410 нм і max при довжині хвилі 425 нм.

Визначення вмісту цитохрому b₅ основано на величині поглинання (ΔD) відновленої форми (min при 410 нм та max при 425 нм ):

ΔD для цит b₅ = поглинання при 425 нм – поглинання при 410нм

Вміст цитохрому Р₄₅₀ вимірюється величиною поглинання (ΔD) комплекса відновленого цитохрому з оксидом ( СО ) при 450 нм.

ΔD для цит Р₄₅₀ = поглинання при 450 нм – поглинання при 490 нм

Завдання для виконання

1. Вирахувати за індивідуальним завданням поглинання ( D) для цит. Р₄₅₀;

2. Вирахувати за індивідуальним завданням поглинання ( D) для цит. b₅;

3. Вирахувати концентрацію білку в кюветі (поглинаючий розчин), якщо відомий обєм реакційної суміші та концентрація білку мікросомальної фракції;

4. Розрахувати вміст цитохромів Р₄₅₀ та b₅ за спектрами поглинання, якщо відомо:

• концентрацію білку у поглинаючому розчині;

• коефіцієнт молярної екстинкції цитохрому Р₄₅₀ (табличні дані);

• коефіцієнт молярної екстинкції цитохрому b₅ (табличні дані).

5. Написати висновок.

Контрольні запитання

1. Як одержують клітинний екстракт.

2. Біохімічні методи дослідження білків.

3. Методи генної інженерії.

4. Ферменти. Їх роль в організмі.

5. Що таке металоферменти.

6. Які метали входять до складу металоферменті.

7. Що таке залізовміщуючі білки.

8. Які ви знаєте залізовміщуючі білки.

9. Функція залізовміщуючих білків в організмі.

10. Що таке гем.

11. Будова гема.

12. Характеристика цитохромів Р₄₅₀ та b₅.

13. Питома і молекулярна активність білків.

14. Що таке М і г-моль.

15. Закон Бугера-Ламберта-Бера.

16. Що таке коефіцієнт молярної екстинкції.

Рекомендована література

1. Пентин, Ю.А. Основы молекулярной спектроскопии/ Ю.А.Пентин. - М.: Мир, 2008.- 398 с.

2. Шмидт, В. Оптическая спектроскопия для химиков и биологов / В. Шмидт.- М.: Техносфера, 2007. - 368 с.

3. Нельсон, Д. Основы биохимии Ленинджера. В 3 т. / Д. Нельсон, М. Кокс. - М.: Бином. Лаборатория знаний, 2012. - 694 с.

90