- •Міністерство освіти і науки україни національний університет харчових технологій
- •Методи контролю біотехнологічних, фармацевтичних і харчових виробництв лабораторний практикум
- •Київ нухт 2014
- •Інструкція з охорони праці при проведенні робіт у навчальних лабораторіях кафедри
- •1. Загальні вимоги до техніки безпеки
- •2. Правила техніки безпеки
- •3. Вимоги безпеки у аварійних ситуаціях
- •4. Надання першої допомоги
- •5. Вимоги до оформлення лабораторних робіт
- •Лабораторна робота 1 розділення амінокислот методом тшх на силуфолових пластинках
- •Реактиви
- •Матеріали та обладнання
- •Загальні відомості
- •Хід роботи
- •Завдання для виконання
- •Контрольні запитання
- •Матеріали та обладнання
- •Загальні відомості
- •Хід роботи
- •Завдання для виконання
- •Контрольні запитання
- •Хід роботи
- •Завдання для виконання
- •Контрольні запитання
- •Розчинність речовин у воді при різних температурах (г/100 г h2o)
- •Залежність густини і концентрації розчинів NaCl від температури
- •Густина речовин
- •Залежність густини розчинів h2so4 від її масової долі у водному розчині при 25 °c
- •Хід роботи
- •Густина розчинів NaCl та kCl в г/см3, що відповідає різним концентраціям у %
- •Завдання на виконання
- •Контрольні запитання
- •Рекомендована література
- •Хід роботи
- •Завдання на виконання:
- •Контрольні запитання
- •Матеріали та обладнання
- •Загальні відомості
- •Закон Бугера – Ламберта – Бера. При прохожденні випромінення через розчин світлопоглинаючої речовини світловий потік слабшає.
- •Фотометричні методи аналізу
- •Залежність кольору речовини від довжини хвилі поглинутого світла
- •Приготування робочих розчинів для побудови калібрувальної кривої
- •Хід роботи
- •Завдання для виконання
- •Контрольні запитання
- •Рекомендована література
- •Матеріали та обладнання
- •Загальні відомості
- •Методом Лоурі
- •Хід роботи
- •Завдання для виконання
- •Контрольні запитання
- •Рекомендована література
- •Лабораторна робота 8
- •Коефіцієнт молярної екстинкції деяких цитохромів
- •Хід роботи
- •Завдання для виконання
- •Контрольні запитання
- •3. Методи генної інженерії.
- •Рекомендована література
Хід роботи
Білок 2 свіжих курячих яєць відділяємо від жовтків і вміщуємо в мірний стакан на 100 мл. Зважуємо одержаний білок в г та вимірюємо його обєм в мл.
Вага білку (г) : 2 = Вага білку (г) 1 яйця.
Одержання осаду глобуліну. При постійному перемішуванні яєчний білок змішуємо з рівним об'ємом насиченого розчину сульфату амонію і добре перемішуємо розчин скляною паличкою. При утворенні 50%-ного білкового розчину сульфату амонію випадають в осад глобуліни.
Осад відфільтровують через складчатий бумажний фільтр або центрифугуванням.
До осаду додають такий же обєм дистильованої води, вимірють загальний обєм одержаного розчину і визначають в ньому концентрацію білку (Кглобуліну) біуретовим методом, в мг/мл. Знаючи загальний обєм розчину глобуліну Vглобуліну (мл) та концентрацію білку можна визначини кількість глобуліну в яєчному білку, одержаному з 2 яєць.
Кглоб х Vглоб = кількість глобуліну (г) в білку 2 яєць
Далі визначаємо кількість глобуліну (г) в білку 1 курячого яйця.
Одержання осаду альбуміну. Після осадження глобуліну отримуємо прозорий фільтрат. Вимірюємо обєм фільтрату в мл та визначаємо концентрацію білку біуретовим методом.
Викладач розливає фільтрат в скляні стаканчики по кількості бригад в групі. Кожна бригада вимірює одержаний нею обєм в мл.
Для висолювання альбуміну до фільтрату додають тонко подрібнений порошок (NН4)2S04 до повного насичення, тобто до тих пір, поки нова порція порошку залишиться нерозчиненою (з розрахунку 13,5 г на 100 мл розчину білку). Випадає осад альбуміну.
Одержаний осад відфільтровують на воронці Бюхнера під вакуумом. Обережно знімають осад з фільтрувального паперу, змивають залишки осаду 3-4 мл дистильованої води і вимірюють одержаний обєм розчину альбуміну Vальбуміну (мл). Визначають концентрацію білку Кальбуміну біуретовим методом та розраховують кількість білку альбуміну в грамах.
Кількість білку в грамах кожна бригада визначає як добуток його концентрації в розчині (мг/мл) на обєм розчину (мл), після розчинення осаду альбуміну.
Кальб х Vальб = кількість альбуміну (г) одержана в бригаді
Знаходять сумарну кількість альбуміну в г одержану всіма бригадами та визначають кількість альбуміну, що міститься в 1 яєчному білку.
ΣА1+ А2 + Аn = кількість альбуміну в г одержана всіма бригадами, яка дорівнює кількості альбуміну в білку 2 яєць.
Далі визначаємо кількість альбуміну (г) в білку 1 курячого яйця.
Знаючи вагу білку 1 курячого яйця, кількість альбуміну та глобуліну, одержаного з 1 яйця, визначаємо % глобуліну та альбуміну в білку 1 яйця.
Завдання для виконання
1. Відділити білки 2 курячих яєць від жовтків.
2. Виміряти одеражий об'єм і вагу білку.
3. Додати насичений розчин сульфату амонію.
4. Відфільтрувати утворений осад глобуліну.
5. Розчинити осад глобуліну та визначити концентрацію білку (мг/мл).
6. Визначити об'єм та концентрацію білку у фільтраті з альбуміном.
7. Отримати на бригаду частину фільтрату.
8. Виміряти одеражий об'єм фільтрату і його вагу.
9. До фільтрату додати порошок сульфату амонію.
10. Відфільтрувати утворений осад альбуміну.
11. Розчинити осад в 1-3 мл води.
12. Визначити об'єм розчиненого осаду (мл) та концентрацію білку (мг/мл).
13. Визначити відсоток альбуміну та глобуліну від загального білку 1 яйця.
14. Написати висновок.