бути не менше 350 – 380 кг. Вони повинні бути клінічно здоровими з добре вираженою статевою циклічністю. Звичайно на одного доно- ра відбирають 5 – 10 реципієнтів.

Утримують корів-донорів у світлих сухих приміщеннях в індиві- дуальних боксах (3,5 × 4 м), а реципієнтів — у просторих стійлах.

Годують донорів за індивідуальними раціонами, що включають доброякісне сіно, концентровані корми та мінімальні кількості соко- витих або зелених кормів.

3.2. Препарати, матеріали та інструменти для трансплантації ембріонів

Оснащення заняття: дво-, триканальні катетери для вимивання ембріонів, при- лад Касу з пайєтами, катетер фірми «Нейштадт», захисні чохли одноразового викори- стання, шприци до них (для введення розчину та для нагнітання повітря); поліети- ленові рукавиці, градуйовані скляні циліндри на 500 мл, ділильна лійка, малі і ве- ликі чашки Петрі, сифонні шланги, алюмінієва фольга, годинникові скельця, пасте- рівські піпетки для маніпулювання з ембріонами, пробірки, ампули, мензурки, тер- мостат; паперові фільтри, СЖК, ГСЖК, ФСГ з розчинником; пролонгон, фолігон, естрофан, ензапрост, естуфалан, ремофан; середовище Дюльбекко, фетальна сирова- тка; 2 %-ні розчини новокаїну, ксилокаїну, ледокаїну, прокаїну та діоциду; ромпун, комбелен, 96 %- та 70 %-й спирт, диметилсульфоксид, гліцерин, сахароза, селікон, септонекс, антибіотики; інвертований мікроскоп, бінокулярна лупа, холодильник, посудина Дьюара, стерилізатори, бактерицидні лампи, пересувний столик для ін- струментів, захисна поліетиленова плівка, халати, фартухи, чоботи.

Сироватка жеребних кобил (СЖК) — нормальна сироватка, отри-

мана з крові здорових кобил з 40-го по 100-й день вагітності з розра- хунку 10 мл на 1 кг маси тварини; 40 – 60 % від отриманої крові ста- новить сироватка, в 1 мл якої міститься від 60 до 300 ІО гонадотропі- нів, що стимулюють дозрівання фолікулів (ФСГ) та їх лютеїнізацію (ЛГ). Препарат має вигляд прозорої або трохи опалесціюючої рідини жовтого, іноді червонуватого кольору з білковим осадом на дні фла- кона, що при струшуванні розбивається до рівномірної суспензії. На кожному флаконі СЖК є етикетка із зазначенням назви препарату, установи-виробника, кількості (в мл), номера серії, активності в ми- шачих одиницях (МО), об’єму дози (в мл), дати виготовлення, дати і номера контролю, строку придатності та умов зберігання.

Активність препарату визначають в інтернаціональних (ІО) або мишачих (МО) одиницях дії (ОД). Одна ІО (що відповідає 2,5 МО) прирівнюється до 0,25 мг стандартного препарату. За одну ОД пре- парату приймають його мінімальну кількість, яка через 72 год після введення інфантильним мишам масою 6,5 – 8 г викликає у 50 % з них збільшення матки та відкриття статевої щілини.

Термін придатності препарату — півтора року за умови збері- гання в темному сухому приміщенні при температурі 5 – 15 ºС.

Препарат вводять одноразово. Оптимальною дозою препарату для стимулювання суперовуляції є 5000 – 6000 МО.

108

Головною перешкодою для широкого застосування СЖК є висо- кий відсоток анафілактичних явищ.

Для запобігання анафілаксії спочатку вводять тварині невелику дозу препарату (1 – 2 мл), а через 1 – 2 год — решту. У разі виник- нення анафілаксії підшкірно вводять адреналін, серцеві засоби, об- ливають тварину холодною водою тощо.

Особливістю СЖК є тривалий період напіврозкладу в крові тва- рини — від 45 до 125 год, що негативно позначається на складі сек- рету яйцепроводів і матки і, отже, на життєздатності ембріонів. За- лишкові кількості СЖК в крові можна нейтралізувати введенням відповідної антисироватки під час осіменіння донора.

У практиці трансплантації ембріонів частіше користуються не нативною сироваткою жеребних кобил, а очищеними від сторонніх білкових домішок і ліофілізованими препаратами гонадотропіну СЖК (ГСЖК) з фірмовими назвами гравогормон, серогонадотропін, гонадотропін СЖК (Чехія), фолігон (Голландія), маротропін (Німеч- чина), інтергонан та ін.

Вітчизняні препарати ГСЖК вводять у максимальних дозах (3000 – 3500 ІО), імпортні — у значно менших: 2500 ІО на корову, 2000 ІО на телицю, або 5 ІО на 1 кг живої маси тварини.

Гонадотропін сироватковий (ГСЖК) отримують з сироватки крові жеребних кобил. Це білий порошок, розчинний у воді. Випускають препарат в ампулах по 500 і 100 ОД з наповнювачем.

Хоріальний гонадотропін людини (ХГЛ) виробляється гіпофізом жінки в клімактеричний період. Препарат виготовляють із сечі та- ких жінок. Вітчизняний очищений препарат ХГЛ називається пер- гонал. Він має чітку ФСГ/ЛГ-подібну активність. Випускається в ампулах по 500, 1000 і 2000 ОД. Застосовують його для стимулю- вання овуляції, вводячи внутрішньом’язово за один раз 2000 ОД або внутрішньовенно.

Гіпофізарний фолікулостимулюючий гормон (ФСГ-П) — високо-

очищений препарат ФСГ, отриманий з гіпофізів (glandula pituitary) домашніх тварин і ліофілізований для кращого зберігання. Випус- кається в упаковках, що містять флакони із сухим препаратом (по 50 мг) і флакони з розчинником. Через короткий період його напів- розкладу в крові тварин необхідну для стимуляції суперовуляції дозу препарату (32 – 50 мг) вводять внутрішньом’язово дробно, про- тягом 4 – 5 днів, двічі на день — уранці та увечері з інтервалом 12 год.

Овоген — комплексний гормонально-вітамінний препарат, в од- ній дозі якого міститься 3 – 4 тис. МО сироваткового гонадотропіну

ється з ліофілізованого гонадотропіну — порошку сірувато-білого

109

кольору, без запаху, розфасованого у флакони з-під пеніциліну по 5 доз, та жовтуватої емульсії (приготовленої з решти компонентів на ультразвуковому диспергаторі за допомогою 20 %-го ефірного чи спиртового розчину лецитину і твіну), розфасованої у флакони по 50 мл (5 доз). Перед застосуванням гонадотропін розчиняють у 5 мл фізіологічного розчину, переносять шприцом у флакон з емульсією і старанно збовтують.

Овоген стимулює біосинтетичні обмінні процеси в клітинах яєч- ників та матки, прискорюючи розвиток фолікулів, через 24 – 48 год після його введення у тварини виникають статеве збудження, тічка і охота, відновлюється відтворна функція.

Перш ніж ввести овоген, проводять гінекологічне обстеження ко- рови, масаж матки та яєчників. Вводять овоген внутрішньом’язово коровам у дозі 10 мл, свиноматкам 2 – 3 мл.

Овогон-ТІО є ліофілізованою аморфною масою білого або сіро- жовтого кольору лютеїнізуючого гормону, виготовленого з передньої частки гіпофізів великої рогатої худоби. Препарат розчиняють у 2 мл фізіологічного розчину чи дистильованої води. Випускають в ампулах з активністю 750, 1000 та 1500 ІО. Застосовують для син- хронізації овуляції і виходу більшої кількості біологічно повноцін- них ембріонів, підвищення запліднюваності корів при багаторазо- вих перегулах, лікування розладів відтворної функції у сільськогос- подарських тварин.

Перед застосуванням препарат розчиняють у 2 мл фізіологічного розчину і вводять двічі по 1500 ІО на 52-й і 60-й годині після пер- шого введення простагландину F-2а.

При відсутності овуляції чи багаторазових неплодотворних осі- меніннях препарат вводять в дозі 1 – 1,5 тис. ІО за 1 год до першого штучного осіменіння; при фолікулярних кістах яєчників — у дозі 3 тис. ІО.

Овогон не можна застосовувати при лютеїнових кістах яєчників та персистентних жовтих тілах.

Простагландини типу F-2а використовують для синхронізації охоти і як лютеолітичні препарати. Найчастіше з цією метою засто- совують синтетичні аналоги простагландину F-2a — клопростеноли. До них належать естрофан (Чехія), ензапрост (Угорщина), динап- рост, еструмат (Велика Британія), люталіз (США), естуфалан (Баш- кортостан – Естонія), клопростенол (Естонія). Через 12 год після введення тварині 5 мг ПГФ-2a знижується концентрація в її крові прогестерону, через 72 год настає тічка, а через 95 год — овуляція. Проте біологічна дія препарату виявляється лише у фазу активного жовтого тіла (8 – 13-й день статевого циклу). Тому для синхронізації охоти ПГФ-2а вводять двічі з інтервалом 11 днів.

Естрофан — синтетичний функціональний аналог простаглан- дину F-2a, що виявляє специфічну лютеолітичну дію. Застосування

110

препарату в фазу активного жовтого тіла викликає його розсмокту- вання і створює передумови для настання тічки й охоти. Тічка на- стає через 46 – 70 год після введення препарату. Для синхронізаії охоти естрофан вводять внутрішньом’язово, корові і телиці — двора- зово, з інтервалом 11 днів у дозі 2 мл (500 мкг активної речовини). Першу дозу можна вводити на будь-якій стадії статевого циклу, а на 11-й день (у фазу активного жовтого тіла) — другу. Осіменіння тва- рин проводять через 72 – 76 год і наступного дня повторюють. Перед кожним введенням препарату проводять старанне ректо-вагінальне обстеження тварин. Для обробки використовують лише здорових, нормально розвинених корів.

Ензапрост (динопрост) — синтетичний аналог простагландину F- 2а. Випускається у вигляді водного розчину з додаванням натрію ацетату та фенолу у двох розфасовках — по 20 і 5 мг активно діючої речовини. Ензапрост виявляє лютеолітичноу дію і знижує рівень прогестерону в крові, що сприяє збільшенню виділення з гіпофізу гонадотропних гормонів та дозріванню в яєчниках фолікулів, ви- никненню тічки, охоти та овуляції. Препарат також викликає ско- рочення матки. Біологічну дію препарат виявляє тільки при наяв- ності в яєчниках активно функціонуючих жовтих тіл.

Застосовують ензапрост для синхронізації охоти у корів і телиць, в комплексі з СЖК — для активування у них статевої функції, ра- зом з лікувальними засобами — у терапії ендометритів. Перед його застосуванням слід провести ректо-вагінальне обстеження тварини. Вводять препарат внутрішньом’язово в дозі коровам 25 мг (6 мл), телицям 20 мг (5 мл). Через 11 днів вводять повторно у тих самих дозах.

Мегестролацетат — гестагенний препарат, який має вигляд дрі- бнокристалічного порошку біло-жовтого кольору, без запаху і смаку, практично нерозчинний у воді та олії, важкорозчинний у спирті й хлороформі. Використовують для синхронізації охоти у овець. Вво- дять перорально з кормом в дозі 5 мг на одну вівцю за добу або ін- травагінально (з використанням песаріїв) у дозі 30 мг на вівцю. Для просочування спеціальних поліуретанових чи поролонових губок — песаріїв використовують 1 %-й спиртовий розчин мегестрол ацетату з розрахунку 3 мл розчину на один песарій. Песарії вводять пінце- том чи корнцангом у піхву вівці до шийки матки за допомогою піх- вового дзеркала на 10 днів. Ацетат мегестролу викликає тимчасову зворотну блокаду гіпофізарної секреції лютеїнізуючого гормону. Піс- ля закінчення дії препарату у тварини настають тічка і овуляція. Для стимуляції овуляції у овець в анестральний період через 16 днів після видалення песаріїв вівцям вводять 1000 МО СЖК.

Мегестролацетат застосовують для стимулювання охоти у вибра- куваних каракульських овець у весняно-літній період, для отри-

111

мання каракульчі та для синхронізації охоти у каракульських овець в сезон їх розмноження.

При пероральному введенні мегестролацетату його дають з кор- мом протягом 10 – 14 днів з розрахунку 5 мг на вівцю. Через 18 днів після останньої дачі препарату їм підшкірно вводять СЖК в дозі 1000 МО на вівцематку.

Сурфагон (синтетичний аналог гонадотропін-рилізінг-гормону), введений внутрішньом’язово в дозі 2,0 мл за кілька годин до осіме- ніння, викликає додатковий викид гіпофізом лютропіну з відповід- ною корекцією часу овуляції та підвищенням на 10 – 20 % рівня за- пліднення.

Ремофан Спофа (клопростенол,флупростенол) — аналог простагландину F-2а.

Фосфатно – буферне середовище (ФБС) Дюльбекко для вими-

вання та культивування ембріонів готують за такою рецептурою:

Розчини А, Б і В автоклавують окремо і обережно змішують. Отримане середовище фільтрують крізь стерилізаційні пластинки, розливають у місткості на 0,5 – 1,0 л і зберігають при 4 ºС.

Безпосередньо перед використанням на 1 л ФБС додають 4,0 г бичачого альбуміну, 1,0 г глюкози, 0,036 г натрію пірувату та 100 тис. ОД пеніциліну (калієва сіль); рН розчину має становити 7,2 – 7,3, ос- мотичний тиск — 290 міліосмолей. Альбумін можна замінити інакти- вованою протягом 20 хв при 56 ºС фетальною сироваткою теляти чи вівці, яку додають з розрахунку 20 % об’єму середовища.

Фетальну сироватку крові теляти для культивування ембріонів готують з плодової крові великої рогатої худоби на 7 – 9-му місяцях фетального розвитку. Її додають (2 – 4 %) до розчину ФБС для кра- щого зберігання ембріонів.

Інструменти для вимивання ембріонів бувають тверді, гнуч- кі, пластмасові, гумові. Для хірургічного видалення ембріонів кори- стуються двоканальним з надувною кулькою катетером Фолея № 14, виготовленим з латексної гуми, та спеціальною тупою голкою в пластмасовому чохлі, яка застосовується у медицині для перели-

112

введення в матку та ви- ведення промивної рідини, яка вводиться і виводиться через один

і той самий канал. В цей же канал вставляють сталевий стилет 5 для надання гумовому катетеру пружності при введенні його у ріг матки.

Робочий кінець катетера 4 залитий гумою або на ньому є тверда вставка з наскрізним отвором для фіксації кінчика стилета 5. Надув- на кулька 2 з’єднана з

(для надання катете- ру пружності) і напівобертом фіксують його в перехіднику.

У триканальних катетерах один канал слугує для введення про- мивної рідини, другий — для її виведення, третій — для нагнітання повітря в кульку.

Триканальний катетер французької фірми ІМВ (рис. 56) складає-

ться з телескопічного гнучкого зонда 4 малого діаметра з канюлею, що з’єднаний через 3 відводи з шприцом 3 для нагнітання повітря

113

(ГСЖК). На 2 – 3-й день після його введення спостерігається інтен- сивний ріст фолікулів, які овулюють на 3 – 5-й день.

Реакція тварин на СЖК виявляється у дозріванні від 0 до 100 фолікулів. Інтервал між першою та останньою овуляціями стано- вить близько 56 год, тому в яйцепроводах донора виявляються різ- новікові й дегенеровані яйцеклітини.

Для ущільнення овуляції можна поєднувати СЖК з внутріш- ньовенним введенням хоріального гонадотропіну (ХГЛ).

Найкращі результати дає застосування СЖК у фазу активного жовтого тіла, тобто на 10 – 11-й день статевого циклу. Тому застосу- вання СЖК поєднують з введенням простагландинів — на 8 – 12-й день циклу, ін’єкцію яких повторюють через 40 – 48 год після вве- дення СЖК.

Доза ПГ-Ф2a еструмату або естрофану становить 500 мкг за клоп- ростенолом, а люталізу та ензапросту — 30 мг.

Узв’язку з високою стабільністю СЖК і тривалою естрогеніза- цією тканин неовульованих фолікулів в оброблених препаратом тварин порушується гормональний баланс і синхронність периста- льтики яйцепроводів і матки. Надлишок СЖК можна нейтралізува- ти ін’єкцією анти-СЖК-сироватки, яку вводять перед другим штуч- ним осіменінням донора.

Угіпофізарних гонадотропінів (ФСГ) вкорочений період напів- розпаду (близько 5 год), тому їх вводять багаторазово, 4 – 5 днів під- ряд двічі на день. Сумарна доза ФСГ — від 30 до 50 мг.

Препарат ФСГ-П (гіпофізарний) надходить на міжнародний ри- нок розфасованим у флакони по 50 мг, до яких додається розчин- ник. Зберігати розчинений препарат можна лише в холодильнику не довше 12 год.

Для біотехнологічної обробки донорів запропоновано кілька ме- тодів. У всіх випадках враховується «нульовоий день» статевого ци- клу, тобто його початок. Подаємо кілька з методів.

Ірландський метод ґрунтується на застосуванні 1500 – 3000 ІО СЖК перед початком регресії жовтого тіла (на 16 – 17-й день стате- вого циклу). Вже на другий день після введення препарату у тва- рин виникає охота. Для кращого її виявлення на 19 – 20-й день ко- рові вводять по 10 мг естрадіол-бензоату, а для ущільнення овуля- ції — на 21-й день 1500 – 3000 ІО хоріального гонадотропіну.

115

Данський метод відрізняється від попереднього тим, що обробку донорів гонадотропінами (після попередньої підготовки) проводять у лютеїнову фазу статевого циклу. Провівши клінічне дослідження донорів, вводять їм двічі з інтервалом 11 днів дозу простагландину Ф2а і, спостерігаючи за поведінкою тварин і станом у них геніталій, встановлюють час появи у них охоти («нульовий день») та її харак- тер. На 8 – 13-й день статевого циклу коровам вводять, залежно від їх маси, 1500 – 3000 ІО ГСЖК. При настанні охоти тварин осіме- няють.

Схема Всеросійського інституту тваринництва. У зв’язку з части-

ми розладами обміну речовин у тварин (при недостатньо збалансо- ваних раціонах) їх гормональну обробку поєднують із застосуванням вітамінних та мікромінеральних препаратів. Встановивши «нульо- вий день» циклу у донорів, їм вводять на перший і другий день по 150 тис. МО вітаміну А, 100 мг вітаміну Е та 100 –200 мг калію йо- диду.

На 10 – 12-й день циклу вводять донорам 300 – 3600 ІО ГСЖК, 75000 МО вітаміну А, 50 мг вітаміну Е.

На 12 – 14-й день циклу — 500 мкг естрофану.

В наступні дні стежать за поведінкою тварин, станом їх геніталій і, при наявності охоти, їх осіменяють.

Методи викликання суперовуляції з використанням ФСГ (рис. 58) Після старанного клінічного дослідження тварин, відібраних як донори, вводять їм двічі з 11-денним інтервалом ПГ-Ф2a, спостеріга- ють за терміном виникнення статевого збудження (нульового дня) та його характером і на 8, 9, 10, 11 і 12-й день чергового статевого

циклу вводять тварині двічі з інтервалом 12 годин, по 5 мг ФСГ (сумарна доза — 50 мг). Сумарну дозу препарату мож- на зменшити до 32 мг, змінив- ши при цьому і щоденні дози

(5 і 6 мг, 5 і 6 мг, 3 і 3 мг, 2 і 2 мг). Завершивши обробку, стежать за поведін- кою і станом геніталій у тва- рин і при настанні охоти осі-

116