TOM-3

VI. ПРИМЕНЕНИЕ ТРАНСКРАНИАЛЬНОЙ ЭЛЕКТРОСТИМУЛЯЦИИ

ДЛЯ АКТИВАЦИИ РЕЗИСТЕНТНОСТИ

37. Изучение протективного влияния транскраниальной электростимуляции при летальной гриппозной инфекции у белых мышей

Зарубаев В. В., Анфимов П. М., Мелешкина И. А., Киселев О. И.1, Малыгин А. В., Лебедев В. П.

НИИ гр иппа РАМН, Центр ТЭС Института физиологии им. И. П. Павлова РАН, Санкт-Петер бур г

Резюме

Пр оведено исследование пр отективной активности тр анскр аниальной электр остимуляции (ТЭС) на модели экспер иментальной летальной гр иппозной инфекции у белых мышей. Показано, что обр аботка животных по лечебно-пр офилактической схеме пр иводит к снижению смер тности и повышению пр одолжительности жизни животных в опытной гр уппе по ср авнению с контр ольной. В то же вр емя титр ы вир уса гр иппа, выделенного из легких на 3-и сутки после инфицир о- вания, значительно не снижались после пр оведения животным ТЭС. Полученные р езультаты позволяют пр едполагать, что ТЭС не обладает не столько иммуностимулир ующим или пр ямым пр отивовир усным действием, а служит, скор ее, ср едством значительного повышения неспецифической р езистентности ор ганизма, в частности пр и летальных р еспир атор ных инфекциях.

Введение

В последнее вр емя в связи с существенным изменением спектр а вир усных патогенов человека особую актуальность пр иобр етает р аз- р аботка неспецифических ср едств пр офилактики и лечения вир усных инфекций. Одним из способов пр офилактической защиты ор ганизма может являться тр анскр аниальная электр остимуляция мозга (ТЭС). Показано, что пр именение ТЭС-тер апии оказывает отчетливое лечебное действие на р анних этапах р азвития ОРВИ [1, см. также статьи В.  П.  Вавиловой и др., Н. К. Пер евощиковой и др. – настоящий сбор -

282

ник]. В связи с этим в настоящей р аботе пр оведено изучение возможной пр отективной активности ТЭС пр и гр иппозной инфекции белых мышей.

Материалы и методы

Вир усы. Вир ус гр иппа птиц A/Aichi/2/68 (H3N2) был получен из коллекции вир усов НИИ гр иппа РАМН и пассир ован в аллантоисной полости 10–12-дневных кур иных эмбр ионов в течение 48 часов пр и 36  °С.

Пер ед экспер иментом 5 мышей были зар ажены интр аназально вир уссодер жащей аллантоисной жидкостью. На 3-и сутки после зар а- жения их легкие были изолир ованы, гомогенизир ованы в 10-кр атном объеме стер ильного физиологического р аствор а, после чего инфекционная активность вир уса в гомогенате была опр еделена пр и помощи титр ования по летальности на животных. Титр вир уса р ассчитывали по методу Рида и Менча (Am. J. Hyg., 1938, 27, p. 493-497).

Животные. Белых беспор одных мышей (самки) массой 14–16 г получали из питомника «Рапполово» (Ленингр адская обл.) и содер жали на стандар тном р ационе в р егламентир ованных условиях вивар ия НИИ гр иппа РАМН.

Схемы электр остимуляции. После легкого эфир ного нар коза животные были иммобилизованы в специальных установках. Электр оды, соединенные с пр ибор ом Тр ансаир -01, подсоединялись животным по пр едложенной схеме (два – за ушами, один – к носу). Сила тока, пр о- пускаемого чер ез цепь в течение 20 минут, составляла 0,2 mA. Обр а- ботка животных пр оводилась по следующим схемам:

•пр офилактическая схема: за 48 и за 24 часа до зар ажения;

•лечебно-пр офилактическая схема: за 24 часа до и чер ез 24 часа после зар ажения;

•лечебная схема: чер ез 24 и чер ез 48 часов после зар ажения.

В качестве плацебо животных контр ольной гр уппы обр абатывали тем же способом, но без подключения тока. В качестве р ефер енс-пр е- пар ата использовали р емантадин (1-(1-адамантил)-аминоэтил гидр о-

хлор ид, Aldrich Chem. Co., Milw.,WI, cat. #39.059-3) в концентр ации

50  мг/кг веса. Ремантадин вводили животным внутр ибр юшинно в объеме 0,2 мл по лечебно-пр офилактической схеме, пр инятой для химиопр епар атов – за 24 и за 1 час до зар ажения и чер ез 24, 48 и 72 часа после зар ажения.

Экспер иментальная гр иппозная инфекция. Вир ус вводили животным интр аназально под легким эфир ным нар козом в дозе 3 и 30 LD50. В каждую гр уппу наблюдения бр али по 13 мышей. На 3-й день после за- р ажения 3 животных из каждой гр уппы умер щвляли, вскр ывали и изолир овали легкие для выделения вир уса. Наблюдение за оставшимися

283

животными осуществляли в течение 14 дней, т. е. ср ока, в течение котор ого пр и экспер иментальном гр иппе отмечается смер тность животных. Ежедневно фиксир овали смер тность животных в контр ольных и опытных гр уппах. На основании полученных показателей смер тности р ассчитывали пр оцент смер тности в каждой гр уппе (отношение числа павших за 14 дней животных к общему числу зар аженных животных в гр уппе), индекс защиты (отношение р азницы пр оцентов смер тности в контр ольной и опытной гр уппах к пр оценту смер тности в контр ольной гр уппе) и ср еднюю пр одолжительность жизни животных из р асчета 14  дней наблюдения в соответствии с фор мулами:

DL = (ΣN D)/Nt, где N – количество животных, пр оживших D дней, Nt – общее число животных в гр уппе;

M = M/Nt, где M – число животных в гр уппе, павших в течение

14  дней после зар ажения;

IP = ((Mc–Me)/Mc) ×100%, где Mc и Me – смер тность в пр оцентах в

контр ольной и опытной гр уппах соответственно.

Титр ование вир уса в легочной ткани. Для опр еделения инфек­ ционного титр а вир уса гр иппа в легочной ткани животных легкие мышей, извлеченные на 3-и сутки после инфицир ования гомогенизи- р овали в десятикр атном объеме ср еды для клеточных культур Игла МЕМ (БиолоТ, Санкт-Петер бур г, кат.# 1.3.3) и готовили из гомогенатов сер ию десятикр атных р азведений на той же ср еде. Для титр ования вир уса использовали клетки пер евиваемой линии MDCK (ATCC #CCL-34). Клетки были культивир ованы в 96-луночных планшетах для клеточных культур пр и 37 °С в атмосфер е 5% СО2 (в газопр оточном инкубатор е Sanyo-175) до состояния монослоя. Десятикр атные р азведения гомогенатов легочной ткани в объеме 0,2 мл были добавлены к клеткам и инкубир ованы в тех же условиях в течение 48 часов. По истечении этого ср ока 100 мкл ср еды пер еносили в соответствующие лунки панелей с кр углым дном (Медполимер , Санкт-Петер бур г) и добавляли р авный объем 1% взвеси кур иных эр итр оцитов в физиологическом р аствор е. Учет р езультатов пр оводили чер ез 1 час инкубации планшетов пр и комнатной темпер атур е.

Ур овень р епр одукции вир уса в лунках панели оценивали по р еакции гемагглютинации (РГА) эр итр оцитов. За титр вир уса пр инимали величину, пр отивоположную десятичному логар ифму наибольшего р азведения вир уса, способного вызвать положительную р еакцию гемагглютинации и выр ажали в логар ифмах 50% инфекционной дозы ви- р уса на аликвоту гомогената, содер жащую 0,02 мг ткани (lg ИД50/0,02 мг). Статистическую обр аботку р езультатов пр оводили пр и помощи пр огр аммы Microsoft Excel – вставка – функция – ср еднее/стандар тное отклонение. Рассчитывали ср едние значения титр а вир уса и стандар т- ное отклонение в каждой гр уппе опыта.

284

Результаты исследования

Данные по инфекционным титр ам вир уса в легких животных в контр ольных и опытных гр уппах пр едставлены в таблице 1. Как следует из пр едставленных р езультатов, ур овень р епликации вир уса гр иппа в легочной ткани зависел от инфицир ующей дозы вир уса, использованной в экспер именте. Вир ус гр иппа р еплицир овался в ткани животных до титр ов 6,2 – 6,5 lg ИД50/0,02 мг в зависимости от инфицир ующей дозы. Пр именение р емантадина пр иводило к существенному снижению инфекционной активности вир уса до титр ов 3,8 – 4,3 lg ИД50/0,02 мг, т. е. в 250 – 630 р аз по ср авнению с контр ольными значениями. Полученные данные подтвер ждают р анее полученные р езультаты о воспр иимчивости использованного штамма вир уса гр иппа к р емантадину и свидетельствует об адекватности использованной модели.

Та б л иц а 1

Влияние транскраниальной электростимуляции на репликацию вируса гриппа в легочной ткани мышей

Тр анскр аниальная электр остимуляция зар аженных животных, будучи использована по пр офилактической схеме (за 48 и за 24 часа до инфицир ования животных), пр иводила к снижению вир усной пр одукции в легочной ткани мышей, уменьшая инфекционную активность вир уса в 16–20 р аз по ср авнению с контр олем в зависимости от использованной инфекционной дозы. Пр и использовании пр оцедур ы по лечебно-пр офилактической или по лечебной схеме достовер ного влияния на инфекционные титр ы вир уса гр иппа в легких белых мышей отмечено не было.

Данные по выживаемости животных, инфицир ованных патогенным вир усом гр иппа, в опытных и контр ольных гр уппах пр иведены в таблице 2. В гр уппах животных, получавших ТЭС по лечебной схеме, отмечалась гибель чер ез 1 сутки после инфицир ования, что р ассматр и- валось как неспецифическая смер тность, и пр и анализе р езультатов не учитывалось.

285

* – общая смер тность (пало/зар ажено).

Как следует из пр едставленных данных, вир ус гр иппа вызывал летальную инфекцию у белых мышей, сопр овождающуюся гибелью животных начиная с 5–6 суток после инфицир ования в зависимости от дозы вир уса. Такой показатель, как пр одолжительность жизни животных, был связан с использованной дозой вир уса обр атной зависимостью. Ремантадин, использованный в опыте как р ефер енс-пр епар ат, оказывалпр и этойинфекциисущественноепр отективноедействие, что пр оявлялось снижением смер тности в опытных гр уппах по ср авнению с контр олем (индекс защиты 70–78 %) и увеличением пр одолжительности жизни (на 5,7–7,1 суток в зависимости от дозы вир уса). Полученные данные, таким обр азом, согласуются с р анее полученными р езультатами экспер иментов in vitro, свидетельствующих о чувствительности использованного штамма вир уса к р емантадину.

Пр и анализе динамики показателей патологического пр оцесса в условиях пр именения ТЭС было показано, что пр офилактическая об- р аботка животных пр иводила к существенной нор мализации показателей выживаемости. Это пр оявлялось как снижением смер тности в опытных гр уппах животных по ср авнению с контр олем (на 40–56 %), так и пр одлением ср ока жизни мышей (на 5,2–6,5 суток в зависимости от дозы вир уса). Использование ТЭС по лечебной и лечебнопр о- филактической схемам существенно не влияло на показатели общей выживаемости животных (индексы защиты составили 10–16%). Однако у животных, подвер гнутых обр аботке по этим схемам, смер тность начиналась значительно позже, чем в контр ольных гр уппах, что вы- р ажалось в существенном увеличении р асчетных показателей ср едней пр одолжительности жизни мышей (на 1,9–4,1 суток по ср авнению с контр олем).

Таким обр азом, эффективность защиты мышей от летальной гр иппозной пневмонии коррр елир овала со вр еменем, пр ошедшим с начала ТЭС до зар ажения животных вир усом. Показатели пр отективной активности ТЭС пр и р аннем начале пр оцедур ы (48 часов до инфицир о- вания) оказались сопоставимы с соответствующими показателями для пр епар ата ср авнения – р емантадина. Учитывая, что р емантадин был пр именен по стандар тной для химиопр епар атов схеме, т.е. пятикр атно в течение опыта, можно пр едполагать, что его двукр атное использование по схемам, пр имененным в экспер именте для ТЭС, пр ивело бы к снижению его активности, что, в свою очер едь, сделало бы эффективность ТЭС р авной или даже пр евышающей активность р емантадина.

Полученные данные позволяют пр едполагать, что механизм пр о- тективной активности ТЭС пр и гр иппозной инфекции заключается в активации неспецифической р езистентности ор ганизма по отношению к зар ажению вир усом и его р епликации в ор ганах-мишенях. С учетом этого факта пр оцедур у тр анскр аниальной электр остимуляции следует р ассматр ивать в пер вую очер едь как мощное ср едство пр офилактики

287

38. Транскраниальная электростимуляция как метод реабилитации часто болеющих детей

Вавилова В. П., Басманова Е. Д., Айнетдинова А. Л., Перевощикова Н. К., Нечаева И. А., Кочемасова О. И., Ушакова Т. Г., Милькова Т. Ю., Лебедев В. П., Трусов С. В.

1Государ ственная медицинская академия, 2Детская клиническая больница № 7, Кемер ово;

3Центр ТЭС Института физиологии им. И. П. Павлова РАН, Санкт-Петер бур г

Резюме

В р аботе впер вые исследована эффективность пр именения тр анскр аниальной электр остимуляции (ТЭС) в пр огр амме р еабилитации детей дошкольного возр аста (6–7 лет), часто болеющих остр ыми р еспир атор ными вир усными инфекциями. Доказано иммуномодулир ующее действие ТЭС на показатели местного иммунитета: достовер ное увеличение SIgA, повышение количества IgA до возр астной нор мы. Активация неспецифических фактор ов защиты слизистой вер хних дыхательных путей пр оявилась увеличением концентр ации лизоцима, восстановлением мукоцилиар ного тр анспор та. За счет оптимизации гомеостаза достигается положительная динамика метаболических пр о- цессов в миокар де, достовер но подтвер жденная электр окар диогр афией, отмечается нор мализация биоэлектр ической активности кор ы головного мозга. Доказано уменьшение числа высоко тр евожных детей, положительная динамика концентр ационных способностей их, улучшение пр оцесса запоминания.

Введение

Общепр изнанным фактом стало стр емительное ухудшение состояния здор овья детей в России за последнее десятилетие, что объясняет необходимость поиска совр еменной высокоэффективной и доступной тер апии, р еабилитации, пр офилактики [1, 2].

К 3–7 годам уменьшается число детей с I гр уппой здор овья и воз- р астает количество детей III гр уппы здор овья. Основную массу составляют дети с функциональными отклонениями ор ганов и систем (II гр уппа здор овья). Большое число патологических пр оцессов обусловлено многофактор ным, дезадаптивным нар ушением гомеостаза, вегетативной дисфункцией. Пр и отсутствии своевр еменной коррр екции данных нар ушений возр астает р иск фор мир ования хр онической патологии [3, 4].

289

19. Заказ № 282

В стр уктур е заболеваемости детей дошкольных обр азовательных учр еждений тр еть патологии занимают часто болеющие дети. Аг- р ессивное воздействие внешней ср еды на детский ор ганизм ведёт к фор мир ованию защитной р еакции, пр оявляющейся ситуативной тр е- вожностью. Вегетативные нар ушения в значительной мер е поддер живаются высоким ур овнем эмоциональной лабильности, тр евожности, что, в свою очер едь, ведёт к фор мир ованию психовегетативного синд- р ома, котор ый лежит в основе психосоматической патологии.

Пр оведение пр отивовоспалительной, иммунокоррр егир ующей, метаболической тер апии без нор мализации психовегетативного статуса мало эффективно. Дети, часто болеющие остр ыми р еспир атор ными вир усными инфекциями (ОРВИ), подвер гаются значительной медикаментозной нагр узке как в пер иод остр ого заболевания, так и в пер иод р емиссии, поскольку получают антибактер иальную, пр отивовир усную, базисную пр отивовоспалительную тер апию, витаминотер апию, иммуномодулятор ы. Поэтому пр и р еабилитации этой категор ии детей целесообр азно использовать совр еменные немедикаментозные методы пр офилактики, напр авленные на повышение р езистентности детского ор ганизма.

Целью нашего исследования явилось изучение эффективности пр именения тр анскр аниальной электр остимуляции (ТЭС) в пр огр амме р еабилитации детей дошкольного возр аста, часто болеющих остр ыми р еспир атор ными вир усными инфекциями [5,6,7], поскольку до настоящего вр емени не исследовалось воздействие ТЭС на состояние неспецифических фактор ов защиты и местного иммунитета начального отдела р еспир атор ного тр акта.

Материалы и методы исследования

Под наблюдением было 60 детей дошкольного возр аста (5–6 лет), посещающих детское обр азовательное учр еждение. Все дети входили в гр уппу часто болеющих, эпизоды остр ой р еспир атор ной вир усной инфекции р егистр ир овались 4 и более р аз в год, в ср еднем на 1 р е- бенка пр иходилось 4,6 случаев ОРВИ. Основную гр уппу ( I гр уппа) составили 30 детей, получавших ТЭС-тер апию. Контр ольная гр уппа

(II  гр уппа)  – 30 детей, не получавших р еабилитационных мер опр ия-

тий. Эффективность тер апии оценивалась путем ср авнения р езультатов основной гр уппы и контр ольной, а также основной гр уппы и гр уппы эпизодически болеющих детей.

Кур с ТЭС-тер апии состоял из 10 сеансов пр одолжительностью по 15–20 минут и пр оводился аппар атом «ТРАНСАИР-01». Воздействие шло чер ез фр онто-мастоидальные электр оды импульсным биполяр - ным током 0,8–1,3 мА, частотой 77 Гц.

Для оценки эффективности лечения использовались следующие методы: оценка состояния местного иммунитета в назальном секр ете

290