Билет 18: Оценка качества свежеполученной спермы барана.

Оценка качества свежеполученной спермы — обязательный этап при племенной работе, искусственном осеменении или криоконсервации, включающий макроскопические, микроскопические и, при необходимости, биохимические исследования.

Макроскопическая оценка спермы. Оценка проводится визуально сразу после получения эякулята. Определяется объем эякулята, который у баранов составляет в среднем 0.8-1.5 мл, с использованием градуированной пробирки или шприца. Оценивается цвет и консистенция: нормальная сперма имеет молочно-белый или слабо-кремовый оттенок, равномерную опалесцирующую консистенцию. Красный или бурый цвет указывает на гемоспермию (примесь крови), зеленоватый — на возможное гнойное воспаление, прозрачность — на олигоспермию (низкую концентрацию спермиев). Отмечается наличие посторонних примесей (гной, кровь, моча).

Определение подвижности сперматозоидов. Каплю неразбавленной спермы помещают на предварительно подогретый предметный столик микроскопа (температура 38-40°C) и накрывают покровным стеклом. Подвижность оценивают при увеличении 200-400 раз с использованием фазово-контрастной или темнопольной оптики. Оценка проводится по 10-балльной шкале, где 10 баллов соответствует прогрессивно-поступательному движению 90-100% сперматозоидов, 1 балл — движению менее 10%. Для использования в искусственном осеменении подвижность должна быть не менее 7-8 баллов. В поле зрения оценивают характер движения: прямолинейное, манежное (по кругу), колебательное или отсутствие движения.

Подсчет концентрации сперматозоидов. Проводится с помощью счетной камеры Горяева, гематологического анализатора или фотометрическим методом. Для подсчета в камере Горяева сперму разводят в 200 раз 3% раствором хлористого натрия с добавлением метиленового синего для фиксации. Средняя концентрация спермы барана составляет 2-4 млрд сперматозоидов/мл. Низкая концентрация требует проверки функционального состояния производителя и техники получения спермы.

Оценка морфологии сперматозоидов. Приготовление мазка для выявления патологических форм. Каплю спермы размазывают на обезжиренном предметном стекле, фиксируют и окрашивают по Романовскому-Гимзе или эозином-нигрозином. Под иммерсионной системой микроскопа (увеличение 1000 раз) анализируют не менее 200 спермиев. Подсчитывают процент нормальных и патологических форм. Патологии делят на первичные (аномалии головки, шейки) и вторичные (дефекты хвоста). Доля патологических форм в качественной сперме не должна превышать 10-15%. Наличие тератоспермии (более 20-30% аномалий) указывает на нарушения сперматогенеза.

Дополнительные тесты оценки качества. Определение резистентности сперматозоидов к 1% раствору хлористого натрия (проба на осмотическую резистентность). Оценка рН спермы с помощью индикаторной бумаги или pH-метра — в норме 6.8-7.2. При необходимости проводят биохимические исследования для определения целостности мембран сперматозоидов (пробы с эозином, гипоосмотический тест) и оценки энергетического метаболизма.

Интерпретация результатов и решение о пригодности спермы. Сперма считается пригодной для дальнейшего использования (разбавления, замораживания) при соответствии следующим минимальным критериям: объем не менее 0.5 мл, цвет молочно-белый, концентрация не ниже 1.5-2 млрд/мл, общая подвижность не менее 70% (7 баллов), доля патологических форм не более 20%. Результаты заносятся в протокол оценки. Несоответствие по одному или нескольким показателям требует повторного получения эякулята или проведения углубленного исследования производителя.