43. Что такое валентность, аффинность, авидность антител.

Валентность – число эпитопов; определяет число молекул Ат, связанных с этим Аг

Аффинность — сила связи 1 паротопа с 1 эпитопом

Авидность — сила связи ат со всеми молекулами (эпитопами) аг

44. Типы антител: изотипы; аллотипы; идиотипы (приватные, публичные).

Изотип определяется по строению С доменов тяжелых цепей альфа, ню, гамма, епсилон, бета, соответственно классам Ig A M E D G

Аллотип индивидуальные (аллельные) различия доменов внутри изотипов. Выделяют 3 типа: Gm, Km, Am

Идиотипы - определяется антигенсвязывающими центрами FаЬ-фрагментов антител, т. е. антигенными свойствами вариабельных участков (V-областей). Идиотип состоит из набора идиотопов— антигенных детерминант V-области антитела.

Приватные и публичные?

45. Что такое генная инженерия антител. Виды генно-инженерных антител.

Целью генной инженерии ат является получение на основе генов иммуноглобулинов несуществующих в природе конструкций с заданными свойствами. Методы генетической инженерии дают возможность эффективно менять микроструктуру и макро искусственных антител.

Примером первого является изменение изотипа антитела путем использования генов, кодирующих соответствующую Fc-область.

Примером второго точечные замены аминокислот путем направленного мутагенеза, приводящие к изменению эффекторных функций, если замена произведена в Fc-области, или к изменению сродства (как повышению, так и понижению) к антигену, когда меняются остатки в CDR-участках вариабельных доменов.

Моноклональные АТ:

1.Химерные антитела первого поколения.

Ген вариабельного домена мышиного антитела клонируется и экспрессируется в системе вместе с генами константного домена человеческого антитела. Получают гибридные антитела с мышиным Fab- и человеческим Fc-доменом.

2. Гиперхимерные антитела второго поколения.

В этом подходе используются лишь минимальные фрагменты мышиного антитела, которые определяют его комплементарность к антигену, эти фрагменты как бы встроены в структуру человеческого антитела. Получаемые таким образом антитела больше похожи на человеческие, чем антитела первого поколения, и потому менее иммуногенны. Если химерное антитело содержит 30-35% мышиного и 65-70% человеческого белка, то в гиперхимерном (гуманизированном) антителе содержание человеческого белка достигает 90%, а мышиного остается только 10%. Частота образования нейтрализующих антител в ответ на введение этих модернизированных антител уменьшается с 74% в случае мышиных до 46% - химерных и 4% - гиперхимерных антител.

3. Получение биспецифических гуманизированных антител.

Биспецифичные антитела получают из моноклональных антител, специфичных к совершенно разным антигенам. Так, например, биспецифическое антитело, применяемое для лечения опухоли, одним плечом гипервариабельного домена связывается с поверхностным антигеном опухолевой клетки (HER2), а другим с антигенным рецептором Т-клетки (CD3), что обеспечивает их тесный контакт.

Мышиные и белки слияния?

46. Характеристика дизайнерских антител (химерные, гуманизированные, биспецифические). Что такое абзимы.

Чтобы уменьшить степень иммунологической несовместимости, применяют методы генной инженерии, позволяющие конструировать химерные или гуманизированные антитела, сочетающие элементы структуры антител мыши и человека. При создании химерных антител молекула антитела человека сохраняет все элементы тяжелых и легких цепей, за исключением вариабельных N-Концевых отрезков, которые замещают соответствующими отрезками моноклонального антитела мыши. Т.е антитело человека становится носителем антигесвязывающего фрагмента мышиного иммуноглобулина. Эти препараты на 75% состоят из белка человека, и 25% из белка мыши. Это обеспечивает высокое сродство к антигену и уменьшает возможность образования против них антител организмом хозяина, что может вызвать серьезные побочные реакции, влоть до развития анафилаксии. Пример химерного антитела- ремикейд.

Гуманизированные моноклональные антитела на 80 – 95% состоят из белка человека и только на 5-10% из белка мыши. Мышиного происхождения в этих молекулах только гипер вариабельные участки, формирующие антигенсвязывающий центр. Были созданы генно-инженерные полностью гуманизированные моноклональные антитела, молекулы которых полностью состоят из белков человека. Перспективное направление в создании новых препаратов на основе моноклональных антител - каталитические антитела Абзимы. Это молекулы обладающие свойствами антител и био катализаторов различных химических реакций. Области применения абзимов: 1) диагностика и лечение аутоиммунных заболеваний, 2) лечение инфекционных заболеваний, 3) биспецифические антитела взаимодействуют одновременно с двумя молекулярными мишенями. Биспецифичность позволяет проявлять необычные био эффекты, связывая друг с другом молекулы, процессы и клетки. Пример: при аутоиммунном тиреоидите у части больных появляется биспецифическое антитело, которое связывается одновременно с тиреоглобулином и тиреоидной пероксидазой и выполняет защитные функции, снижая активность системного воспаления.