36) Оценка состояния врожденного иммунитета
Для оценки состояния врожденного иммунитета применяют почти исключительно функциональные тесты, поскольку численность миелоидных клеток определяют с помощью элементарного анализа крови. Чаще других функций оценивают фагоцитарную активность клеток. Традиционно ее определяют микроскопически, в окрашенных мазках, с использованием в качестве фагоцитируемых частиц как микроорганизмов, так и инертных корпускул, например, частиц латекса. При этом вычисляют фагоцитарный индекс (процент клеток, осуществивших фагоцитоз тест-частиц)и фагоцитарное число (среднее число частиц, фагоцитированных клеткой). Такой подход в принципе адекватен, но он трудоемок, практически не поддается стандартизации и потому в значительной степени субъективен. Современные методы оценки фагоцитоза основаны на проточной цитометрии с применением объектов фагоциоза (бактерий, частиц), меченых флуорохромами.
С функциональной точки зрения более значима оценка бактерицидности фагоцитов, которую раньше определяли с помощью теста на завершенность фагоцитоза. Основой теста служило определение степени снижения числа микроорганизмов, высеваемых из лизата фагоцитов. Естественное стремление к упрощению и стандартизации позволило разработать несколько вариантов метода, основанных на проточной цитометрии. Помимо этого давно используют косвенную оценку бактерицидного потенциала фагоцитов в реакции восстановления нитросинего тетразолия. Активность фагоцитов определяют по появлению синего окрашивания в результате отложения гранул формазана — продукта восстановления нитросинего тетразолия. Дальнейшее усовершенствование метода состояло в разработке способа оценки способности клеток генерировать активные формы кислорода, которые выявляли по выраженности хемолюминесценции, усиливаемой в присутствии люминофоров (люминола, люцигенина). Как правило, параллельно оценивается спонтанная и индуцированная различными стимуляторами люминолзависимая хемолюминесценция. Хемилюминесценцию регистрируют автоматически на специальном приборе — хемилюминометре.
К группе тестов, характеризующих активность клеток врожденного иммунитета, относят определение их способности секретировать провоспалительные цитокины (IL-1β,TNFα и др.). Корректный вариант — постановка тестаin vitro со стимуляцией лейкоцитов крови или выделенных макрофагов бактериальными стимуляторами (обычно ЛПС изEscherichia coli) с последующим иммуноферментным определением цитокинов. Менее адекватно иммуноферментное определение цитокинов в сыворотке крови. При таком подходе невозможно разграничить процессы секреции и потребления цитокина, а также определить его происхождение.
Для характеристики состояния естественных киллеров параллельно используют функциональные тесты и определение численности клеток. Для идентификации NK-клетокобычно выявляют мембранные молекулы CD56 и CD16 методом проточной цитомтерии с использованием соответствующих антител.
Еще одна группа показателей, характеризующих функциональный потенциал системы врожденного иммунитета, позволяет оценить состояние системы комплемента. Реакции, основанные на титровании комплемента с определением 50% гемолиза, не используют в связи с их громоздкостью. С помощью иммуноферментного анализа оценивают концентрацию в сыворотке крови основных компонентов комплемента, в первую очередь C3.
45) Вирусная нагрузка – это количество вируса ВИЧ в крови инфицированного. Чем выше вирусная нагрузка, тем быстрее упадет уровень CD4 и тем больше риск развития симптомов ВИЧ или СПИД - ассоциированных (оппортунистических) заболеваний.
Тесты на вирусную нагрузку определяют количество копий РНК вируса, циркулирующих в жидкой части крови (плазме). Результат анализа на вирусную нагрузку описывает количество копий РНК вируса ВИЧ на микролитр крови
На данный момент существуют несколько способов определения вирусной нагрузки. Каждый из них использует особый способ подсчета количества копий ВИЧ, но все тесты одинаково надежно показывают высока или низка вирусная нагрузка человека.
В мире обычно используют ультрачувствительные тесты на вирусную нагрузку. Они могут определить крайне низкое количество вируса, например 50 копий/мкл. если вирусная нагрузка меньше 50/мкл, то говорят что она «неопределяемая»; для большинства людей достижение «неопределяемой» вирусной нагрузки – это одна из главных задач АРВ-терапии.
Значение уровня вирусной нагрузки
Вирусная нагрузка более 100 тыс. копий/мкл считается высокой, а меньше 10 тыс. копий/мкл – низкой. Но необходимо учесть, что если человек не принимает АРВ-терапию, то его вирусная нагрузка может колебаться в широких пределах от одного теста к другому, при этом подобные флуктуации не влияют на здоровье.
Изучив колебания показателей вирусной нагрузки людей, не принимающих АРВ, врачи определили, что два отдельных теста одного и того же образца крови могут давать достаточно разные результатыъ
На вирусную нагрузку может влиять время дня, когда проводился забор крови, к тому же вирусная нагрузка может временно повыситься, если человек чем-то заболел, а затем снова снизиться.
Беспокоиться следует, если уровень вирусной нагрузки повышается в течении нескольких месяцев, или если он увеличился больше чем в три раза.
«Неопределяемая» вирусная нагрузка
У всех тестов на определение вирусной нагрузки есть нижний порог чувствительности, т.е. количество копий вируса в крови, меньше которого они не могут определить наличие ВИЧ в организме. Тесты, используемые в Великобритании, имеют границу определения 50 копий/мкл.
Если количество копий ВИЧ-вируса в крови меньше 50 на микролитр, тогда говорят, что он неопределим. Но даже если уровень ВИЧ слишком низок, чтобы его определить, это не означает, что вируса ВИЧ в крови нет. Вполне может быть, что его количество просто слишком мало, чтобы его можно было определить.
Так как тесты на вирусную нагрузку определяют количество вируса только в крови, вирусная нагрузка в других частях тела, например в лимфоузлах или сперме/влагалищной смазке может быть достаточно высокой для определения. Неопределимая вирусная нагрузка – хороший признак Неопределимый уровень вирусной нагрузки желателен по двум причинам.
Во-первых, это означает, что риск заболеть болезнями, связанными с ВИЧ очень низок, а во-вторых, так же очень низкий риск того, что у данного человека разовьется резистентность (невосприимчивость) к данному виду АРВ - терапии. Вирус ВИЧ может стать резистентным к лекарству только в том случае, если он продолжает размножаться даже в то время, когда человека его принимает. Если репродукция вируса ВИЧ сдерживается на очень низком уровне, появление резистентности к лекарству будет отсрочено во времени, возможно, даже на очень длительные сроки.
Это означает, что данный вид АРТ продолжает выполнять свои функции по подавлению развития вируса ВИЧ в организме. Именно поэтому инфекционисты (специалисты по лечению ВИЧ/СПИД) подчеркивают важность того, что целью современной АРВ - терапии является уменьшение вирусной нагрузки до неопределимого уровня как можно скорее, в идеале в пределах 24 недель от начала лечения.
37.ВИЧ механизм проникновения вируса в клетки: Гликопротеин gp120 способен связываться с сд4 и играет ключевую роль в проникновении вируса в клетку-мишень. Значительное количество молекул gp120 отрывается от вирусных частиц и попадает в кровь и в ткани. Этот процесс называется шеддингом антигена и играет существенную роль в патогенезе вич-инфекции. В первую асимптоматическую стадию, которая может продолжаться несколько лет, идет медленное разрушение сд4, поэтому вич-инф чувствуют себя удовлетворительно и ведут обычный образ жизни.( наверно так, потому что нигде толком ничего не написано)
38.ВИЧ
