5. Эпидемиология сибирской язвы

Сибирская язва - зоонозная инфекция, поражающая в основном травоядных животных, но могут болеть и плотоядные. Эпидемиоло­гическую опасность для человека , в первую очередь, представляют сельскохозяйственные животные: крупный и мелкий рогатый скот, лошади, верблюды, северные олени, свиньи и др. Животные инфици­руются на зараженных спорами B.anthracis пастбищах при поедании травы, вместе с которой в организм попадают комочки почвы, содер­жащие споры, а также через зараженные корма (комбикорм, костную муку и пр.) и воду.

У животных развивается кишечная форма сибирской язвы, кото­рая в 90% случаев заканчивается их гибелью. Возбудитель в большом количестве выделяется с мочой и испражнениями больных животных и, превращаясь в споры, заражает окружающую среду. Опасны шку­ры, шерсть, кровь, мясо, внутренние органы животных. Трупы погиб­ших животных запрещено вскрывать, их положено сжигать или, что хуже, глубоко закапывать в скотомогильники.

Люди заражаются при уходе за больными животными, их убое и разделке туш, при переработке животного сырья. Таким образом, за­болевания сибирской язвой носят преимущественно профессиональ­ный характер. Но встречаются и случаи бытового заражения при употреблении инфицированного мяса, воды, через носильные вещи и другие предметы, изготовленные из инфицированного животного сы­рья (полушубки, меховые воротники и шапки, валенки, ковры, кисточ­ки для бритья и т.п.).

Споры возбудителя проникают через поврежденные кожу и сли­зистые оболочки. Пути заражения - контактный, аспирационный (воз­душно-пылевой), алиментарный и трансмиссивный (через укусы оводов, мух-жигалок и др.).

В настоящее время в России сибирская язва встречается споради­чески, редко в виде локальных вспышек. Но имеется постоянная угро­за нарушения целости старых скотомогильников при строительстве, земляных работах, во время паводков, при подмывании берегов рек и водохранилищ, что способствует распространению инфекции.

Не следует забывать, что B.anthracis является одним из наиболее эффективных агентов, которые могут быть использованы в качестве биологического оружия. Пример этому — заболевания сибирской язвой в США {в 2001 г.) в результате рассылки по почте конвертов с порошком, содержащим споры возбудителя.

6. Лабораторная диагностика сибирской язвы

Для лабораторной диагностики сибирской язвы применяют мик­роскопический, бактериологический, биологический и серологичес­кие методы исследования, кожную аллергическую пробу и полимеразную цепную реакцию (ПЦР).

Материал для исследования зависит от клинической формы за­болевания, это: отделяемое везикул, карбункулов и язв, струпы, кровь, мокрота, испражнения, моча, пунктаты лимфоузлов, ликвор и аутопсийный материал.

Лабораторную диагностику проводят в специальных лаборато­риях с соблюдением правил работы с особо опасными инфекциями. Этих же правил придерживаются при взятии и транспортировке пато­логического материала.

Микроскопические исследования. Мазки из исследуемых ма­териалов окрашивают по Граму. Для выявления капсулы применяют методы Бурри-Гинса, Ребигера и другие. Наличие в мазках крупных грамположительных палочек, образующих короткие цепочки, окружен­ные общей капсулой, позволяют дать предварительный ответ в тече­ние одного часа. Иногда мазки окрашивают по методу Ожешке для обнаружения спор.

Дополнительно применяют прямой метод иммунофлюоресценции со специфической сибиреязвенной люминесцирующей сыворот­кой, служащий подтверждением результатов микроскопического исследования.

Бактериологический метод. Выполняют посевы исследуемого материала на чашки с МПА, кровяным агаром, на среды с сывороткой (для выявления капсулы), полимиксиново-желточный агар. Кровь и ликвор параллельно засевают на жидкие питательные среды.

В положительном случае, после суточной инкубации при 37°С, на чашках вырастают характерные R-колонии. Их исследуют и выде­ляют чистую культуру, которую идентифицируют.

Биологическая проба. Одновременно с посевами на питатель­ные среды, исследуемый материал подкожно вводят мышам, морским свинкам или кроликам. Обычно через сутки мыши погибают. Из их крови и органов готовят мазки-отпечатки (с целью обнаружения ха­рактерных капсульных палочек) и проводят посевы на питательные среды для выделения чистой культуры возбудителя. Через сутки часть выживших животных забивают и осуществляют аналогичные иссле­дование. За остальными животными наблюдают в течение 10 суток.

Идентификация выделенной чистой культуры возбудителя. Ее проводят с учетом широкого распространения непатогенных и ус­ловно-патогенных спороносных бацилл, обладающих сходной мор­фологией и рядом других общих свойств с сибиреязвенными бактериями. Для дифференциации используют комплекс признаков, присущих только B.anthracis:

- отсутствие подвижности;

- наличие капсул в организме человека и животных и капсулообразование на сывороточных средах;

- фаголизабельность специфическим сибиреязвенным бактерио­фагом;

- отсутствие гемолиза при росте колоний на кровяном агаре (не вполне надежный признак, так как некоторые почвенные бацил­лы также не дают гемолиза);

- положительный тест «жемчужного ожерелья». Он заключается в посеве трехчасовой бульонной испытуемой культуры на пенициллиновый агар, на котором под действием пенициллина, на­рушающего синтез пептидогликана, цепочки палочковидных бактерий превращаются в «ожерелье» из шаровидных форм (сферопластов), что выявляют при фазово-контрастной микроскопии.

- вирулентность для мышей, морских свинок и главное - кроликов, так как некоторые бациллы, например B.cereus, введенные в боль­ших дозах, могут вызывать гибель мышей и морских свинок.

- кроме выявления этих признаков проводят биохимическое тес­тирование в системе API 20A или определяют протеолитические (B.anthracis разжижает желатину в виде «перевернутой елочки») и сахаролитические свойства (ферментирует с образованием кислых продуктов лактозу, глюкозу и мальтозу, вызывает покрас­нение лакмусового молока).

Серологическую идентификацию проводят методом прямой иммунофлюоресценции.

На основании результатов идентификации испытуемой культуры ставят окончательный диагноз сибирской язвы. Однако, выделить куль­туру возбудителя удается далеко не всегда, например при кожной фор­ме - менее чем в 50% случаев, что связано, главным образом, с ранним началом лечения антибиотиками.

Серологический метод. Его применяют для выявления сибире­язвенного антигена или возбудителя непосредственно в патологичес­ком материале в ранние сроки заболевания. Используют экспресс-методы: прямой РИФ, РИГА с эритроцитарным антительным диагностикумом (РОНТА), ИФА.

Антитела в сыворотке крови больных выявляют реже, в основ­ном при южной форме заболевания. Применяют РИГА (с эритроцитар­ным антигенным диагностикумом), а в последнее время применяют тест-системы ИФА с капсульным, протективным антигенами или леталь­ным токсином, позволяющие выявлять соответствующие антитела.

По наличию специфических антител у переболевших устанавли­вают ретроспективный диагноз сибирской язвы.

Сохраняет свое значение реакция термопреципитации Асколи, основное назначение которой - определение зараженности различно­го животного сырья (кожа, шкуры, шерсть, щетина и др.), а также объек­тов внешней среды, трупов людей и животных, даже разложившихся.

Для постановки реакции Асколи готовят термопреципитиноген из исследуемого материала, который измельчают, кипятят в изотони­ческом растворе NaCl и фильтруют. Прозрачный преципитиноген на­слаивают на сибиреязвенную сыворотку, налитую в узкую пробирку. В положительном случае на границе двух жидкостей образуется мут­но-белое кольцо преципитата. Одновременно ставят контроль с нор­мальной сывороткой, где преципитация должна отсутствовать.

Раньше эту реакцию использовали и для прижизненной диагнос­тики кожной формы сибирской язвы (термопреципитиноген готовили из струпа, покрывающего карбункул), но в настоящее время для этой цели реакцию Асколи почти не применяют.

Кожно-аллергическая проба. Её ставят для выявления аллергизации организма (развитие ГЗТ), возникающей при сибиреязвенной инфек­ции и сохраняющейся в течение многих лет у переболевших. Аллерген-антраксин вводят в объеме 0,1мл внутрикожно в ладонную поверхность предплечью. Результат учитывают через 24 и 48 часов. Реак­ция считается положительной при наличии инфильтрата и гиперемии ди­аметром 16-25мм и резко положительной, если диаметр 26мм и более. Положительную кожно-аллергическую пробу наблюдают у больных и переболевших кожной формой сибирской язвы почти в 90% случаев.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) является перспективным, чувствительным экспресс-методом, позволяющим выявлять присут­ствие ДНК возбудителя сибирской язвы в патологическом материале, взятом от больных, в том числе во время лечения антибиотиками, а также в объектах внешней среды. В настоящее время разработаны и апробированы на практике диагностические тест-системы, содержа­щие набор ингредиентов для постановки ПЦР.

7. Вакцина сибиреязвенная живая сухая для подкожного и внутри-кожного применения - препарат представляет собой живые споры вак­цинного штамма СТИ-1 сибиреязвенного микроба, лиофильно высушенного. В ампуле содержится от 4 до 5 млрд спор.

Препарат предназначен для профилактики сибирской язвы у лиц в возрасте от 14 до 60 лет. Двукратная вакцинация с интервалом 21 день обеспечивает развитие иммунитета в лечение 1 года с максималь­ной напряженностью в течение первого полугодия. Плановую вакци­нацию осуществляют по профессиональным показаниям,

Вакцина сибиреязвенная комбинированная жидкая для под­кожного применения • препарат представляет собой смесь спор вак­цинного штамма СТИ-1 сибиреязвенного микроба и очищенного, концентрированного, адсорбированного на геле алюминия гидроксида протективного сибиреязвенного антигена (ПА).

Препарат предназначен для профилактики сибирской язвы у лиц от 14 до 60 лет в плановом порядке и по эпидемическим показаниям, обес­печивая формирование напряженного иммунитета уже через 7 суток пос­ле однократного введения, который сохраняется в течение одного года.