Задача 4.

1. Нет.

2. Гонококки.

3. 4. Лабораторная диагностика урогенитального хламидиоза.

Для диагностики урогенитального хламидиоза применяют микроскопический, культуральный, серологический и молекулярно-генетический методы, используют экспресс-диагностику.

Исследуемый материал: соскобы эпителия слизистых уретры, цервикального канала, конъюнктивы век, реже - соскобы со слизис­тых прямой кишки и глотки; сыворотка крови.

Экспресс-диагностика. Применяют метод прямой иммунофлю­оресценции с видоспецифическими моноклональными антителами (против основного белка наружной мембраны С. trachomatis), который позволяет обнаружить возбудителя в соскобах с пораженных слизис­тых оболочек за 30-40 мин).

Культуральный метод. Исследуемым материалом, предваритель­но гомогенизированным и обработанным антибиотиками для освобож­дения от посторонней микрофлоры, заражают культуры клеток, например, L-929, MacCoy, HeLa. Для обнаружения хламидий в зара­женных культурах клеток применяют метод прямой иммунофлюорес­ценции. Культуральный метод высокочувствителен, он позволяет обнаруживать и выделять возбудителя, а также устанавливать излеченность больных хламидиозом. Недостатки метода — трудоемкость и длительность исследования. Доступен только в крупных специальных лабораториях.

Серологический метод. Заключается в обнаружении специфи­ческих антител в сыворотке больных. Применяют РСК, РНГА, микро­метод непрямой иммунофлюоресценции и ИФА. Серологический метод применяют при осложненном хламидиозе и хроническом течении ин­фекции, а также при пневмонии новорожденных, у которых выявляют специфические IgM антитела.

Молекулярно-генетический метод. Является самым чувстви­тельным методом. Особенно чувствительна наиболее часто применяе­мая ПЦР. Исследуемым материалом является соскоб эпителия слизистых.

Используют также лигазную цепную реакцию, транскрипцион­ную амплификацию и метод ДНК-зондов.

5. Chlamydia tracbomatis -возбудитель урогенитального хламидиоза

Хламидии - мелкие прокариотные грамотрицательные микроор­ганизмы, обладающие облигатным внутриклеточным паразитизмом и уникальным внутриклеточным циклом развития. Они выделены в от­дельный порядок - Chlamydiales, куда входят три вида хламидии, па­тогенных для человека, это С. trachomatis, С. psittaci и С. pneumoniae. Они вызывают инфекционные заболевания, получившие название хламидиозов. Наибольшее распространение среди них имеет урогенитальный хламидиоз - инфекция, передающаяся половым путем.

Морфология хламидии. Хламидии по своей структуре близки грамотрицательным бактериям, несколько отличаясь от них строением клеточной стенки, у которой имеется наружная мембрана (ЛПС), но отсутствует пептидогликан. Ригидные функции выполняют белки кле­точной стенки перекрестно связанные дисульфидными мостиками. Хламидии являются «энергетическими» паразитами и зависят от ме­таболизма клетки-хозяина, так как не способны синтезировать АТФ и у них отсутствуют цитохромы. Поэтому хламидии не растут на пита тельных средах и их культивируют в желточном мешке куриных эмб­рионов или в культурах клеток.

Хламидий существуют в двух основных формах, это: элементарные тельца (ЭТ) - инфекционные внеклеточные и ретикулярные тельца (РТ) -вегетативные, внутриклеточные. В процессе жизненного цикла ЭТ пре­вращаются в РТ, которые размножившись, снова преобразуются в ЭТ.

Элементарные тельца - мелкие клетки (0,2-0,3 мкм) сферичес­кой формы. Имеют плотную, малопроницаемую клеточную стенку и компактный нуклеоид. По Романовскому - Гимзе они окрашиваются в красный цвет; непрозрачны для электронов и на электронограммах выглядят темными. ЭТ метаболически неактивны и приспособлены к внеклеточному существованию, хотя не обладают значительной устой­чивостью к воздействию факторов внешней среды. ЭТ - инфекцион­ные формы хламидий, ответственные за процесс прикрепления к чувствительным клеткам (клетки-мишени) и проникновение в них.

Ретикулярные тельца - более крупные клетки (0,8-1,5 мкм), со­держат рыхлый нуклеоид сетчатой структуры, их клеточная стенка очень тонка. По Романовскому - Гимзе РТ окрашиваются в синий цвет, они прозрачны для электронов и на электронограммах имеют ретику­лярную сетчатую структуру. РТ метаболически активны (синтезируют ДНК, РНК и белки), приспособлены к внутриклеточному существова­нию, находясь в тесном метаболическом контакте с клеткой Ретику­лярные тельца размножаются поперечным делением, обеспечивая репродукцию хламидий. Эта неинфекционная форма хламидий не спо­собна существовать вне клетки.

Цикл развития хламидий начинается с прикрепления элемен­тарных телец к плазматической мембране чувствительной клетки и проникновения в клетку путем эндоцитоза. Оказавшись в фагосоме (эндосоме, вакуоли) метаболически инертные ЭТ подвергаются изме­нениям, образуя промежуточные формы, и превращаются в метаболи­чески активные ретикулярные тельца. После многократного деления РТ реорганизуются, превращаясь через промежуточные формы в эле­ментарные тельца нового поколения. В эндосоме образуются большие скопления РТ, промежуточных форм и ЭТ хламидий (к концу цикла остаются ЭТ), которые образуют микроколонии - хламидийные цитоплазматические включения, окруженные хламидой - оболочкой клеточного происхождения. Цикл заканчивается после того, как инфицированные клетки, заполненные микроколониями хламидий, раз­рушаются (сначала происходит разрыв оболочки расширившейся эндосомы, а затем и плазматической мембраны клетки). Освободившиеся ЭТ инициируют новый инфекционный цикл, проникая в окружающие клетки или попадая в другой организм. Продолжительность жизнен­ного цикла хламидий составляет от 48 до 72 часов.