vse_metody_MIKROB

робиома человеческого организма. Микробиом человека – общий генетиче-

ский материал микробных сообществ, населяющих человеческий организм.

Основные результаты изучения микробиома человека:

1.В организме одного человека живут 1014 (100 триллионов) бактерий.

2.В организме человека обитают более 10 000 видов бактерий.

3.Бактериальная масса в макроорганизме составляет около 3 кг.

4.На каждую клетку человека приходится 10 бактериальных клеток.

5.На каждый ген человека приходится 100 бактериальных генов.

Всоставе микробиоты человека выделяют:

резидентную (облигатную) микрофлору, которая в норме присутствует постоянно, в значительных количествах и выполняет ряд полезных функций для организма;

факультативную (необязательную) микрофлору, которая в норме либо отсутствует, либо присутствует в незначительных количествах. Это группа ус-

ловно-патогенных микробов, которая при снижении сопротивляемости орга-

низма может вызывать различные патологические процессы.

транзиторную микрофлору, которая не способна к длительному сущест-

вованию в организме.

Микробиота различных биотопов организма

Микробиота кожи.

Основное место обитания микроорганизмов кожи – роговой слой, протоки сальных желез и волосяные фолликулы. Кожа является внешним покровом, со-

стояние которого во многом зависит от состояния здоровья человека. Основны-

ми представителями микробиоты кожи являются S.epidermidis, Micrococcus spp., Corynebacterium spp., Propionibacterium spp., Peptococcus spp. Реже на коже ре-

гистрируют S.aureus, S.pyogenes. Candida spp. и другие микроорганизмы.

8

9

При ослаблении иммунитета микробиота кожи первой сигнализирует о возникновении патологического процесса в организме. Например, при сахарном диабете на коже могут возникать фурункулы и карбункулы (возбудитель –

S.aureus), при иммунодефицитном состоянии могут развиваться рожистое вос-

паление (возбудитель – S.pyogenes), герпетическое и папилломавирусное пора-

жения кожи.

Микробиота конъюнктивы.

Конъюнктива содержит небольшое количество микроорганизмов за счет действия лизоцима и других бактерицидных факторов слезной жидкости. Ос-

новными представителями данного биотопа являются коринебактерии и стафи-

лококки.

Микробиота верхних дыхательных путей.

Верхние дыхательные пути колонизированы широким спектром симбионт-

ных микроорганизмов (стафилококки, стрептококки, нейссерии, пептострепто-

кокки, бактероиды, пропионибактерии, фузобактерии, эубактерии и др.). В

бронхах и альвеолах микроорганизмы регистрируют реже.

Микробиота полости рта.

В 1 мл слюны содержится до 108 различных видов микроорганизмов. Пре-

обладают анаэробы (эубактерии, фузобактерии, лактобактерии, бифидобакте-

рии, бактероиды, анаэробные кокки), из аэробных бактерий в ротовой полости чаще присутствуют стафилококки, стрептококки и др. При нарушении микро-

биоценоза полости рта возможно возникновение зубного камня, кариеса, гинги-

вита, парадонтита и др.

10

Микробиота желудка.

В 1 мл желудочного сока содержится менее 103 микроорганизмов. В основ-

ном это лактобактерии, сарцины и кокки, устойчивые к низким значениям рН желудочного сока. При гастритах, язвенной болезни желудка обнаруживаются спириллы рода Helicobacter, количество которых резко увеличивается при этой патологии.

Микробиота тонкого кишечника.

В верхних его отделах присутствуют те же виды симбионтов, как в желуд-

ке, в нижних отделах – как в толстом кишечнике.

11

Микробиота толстого кишечника.

Общая масса микрофлоры этого биотопа составляет от 1 до 5 кг и представлена более чем 500 видами микроорганизмов. 1 г фекалий содержит около 1011

бактерий. Более 90% фекальной микрофлоры составляют анаэробы. Наиболее значимые микроорганизмы представлены в Таблице 4.

Таблица 4 – Качественный и количественный состав микрофлоры толстой кишки у здоровых людей*

*- отраслевой стандарт «Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника». ОСТ 915000.11.0004-2003, Приказ МЗ РФ № 231 от 09.06.2003.

**- представители родов Klebsiella, Enterobacter, Hafnia, Serratia, Proteus, Morganella, Providencia, Citrobacter и др.

12

До недавнего времени считалось, что кишечник новорожденного стерилен, а

заселение его бактериями происходит после рождения. В конце прошлого века появились данные о наличии в первичном кале (меконии) некоторых видов бак-

терий. В настоящее время существует доказательная база о нестерильности плода, что свидетельствует о внутриутробной бактериальной транслокации

(проникновении бактерий из кишечника матери к плоду).

После рождения процесс колонизации толстого кишечника микробами

включает четыре этапа:

Первый этап происходит от момента рождения до двух недель жизни (чаще обнаруживают стрептококки, кишечные палочки, бактероиды, клостридии и другие бактерии). При естественном вскармливании преобладают бифидобакте-

рии, при искусственном – лактобактерии.

Второй этап продолжается до введения прикорма. В этот период увеличи-

вается количество бактероидов.

Третий этап длится до завершения грудного вскармливания и характеризу-

ется повышением количества бактероидов, пептококков и пептострептококков.

Четвертый этап соответствует окончанию грудного вскармливания и со-

храняется в течение жизни.

У детей, находящихся на искусственном вскармливании, завершение фор-

мирования микробиоты кишечника происходит в более ранние сроки.

13

Микробиота мочеполового тракта.

До недавнего времени считалось, что почки, мочевой пузырь, матка, простата

– стерильны. В настоящее время в моче здоровых женщин идентифицированы 45

родов бактерий с преобладанием лактобактерий и бактероидов. В моче здоровых мужчин обнаружены 72 рода бактерий с доминированием коринебактерий, стреп-

тококков и лактобактерий. В мочевом пузыре могут присутствовать до 14 родов бактерий с преобладанием лактобактерий.

Микробиота влагалища и ее значение для становления микробиоты но-

ворожденных.

Микробиота влагалища представляет собой динамическую экосистему. Влага-

лище при рождении стерильно. Затем, в течение нескольких дней заселяется пре-

имущественно грамположительной флорой (анаэробные бактерии, стафилококки,

коринебактерии). В это период рН влагалища нейтральна – 7,0. В период полового созревания под влиянием половых гормонов (эстрогенов) вагинальный эпителий утолщается и накапливает гликоген. Это, в свою очередь, стимулирует размноже-

ние лактобактерий, которые активно расщепляют гликоген с образованием молоч-

ной кислоты. рН влагалища снижается до 4,0. Подкисление лактобактериями вла-

галищного секрета и продукция ими перекиси водорода ведут к подавлению роста посторонней микрофлоры.

У женщин репродуктивного возраста молекулярно-генетическими методами выявлены более 265 видов бактерий. Микробный спектр влагалища отличается у женщин различных возрастных категорий и этнических групп. Основными (рези-

дентными) представителями микробиоты данного биотопа являются различные виды лактобактерий. Во влагалище в норме преобладают анаэробные микроорга-

низмы. Соотношение анаэробы/аэробы составляет 10/1. Анаэробы представлены бифидобактериями, бактероидами, пропионибактериями, пептострептококками и др., аэробы – коринебактериями, стафилококками, стрептококками и др. Реже в со-

ставе микробиоты обнаруживают гарднереллы (грамотрицательные анаэробные

14

коккобактерии), микоплазмы, мобилюнкусы (грамотрицательные палочки в виде полумесяца).

В период беременности бактериальное разнообразие уменьшается с преобла-

данием лактобактерий. Ребенок, проходя через родовые пути, контаминируется нормальными представителями микробиоты матери, что в дальнейшем положитель-

но влияет на формирование его микрофлоры.

Положительная роль нормальной микрофлоры для организма

1.Представители резидентной микрофлоры формируют своеобразную биопленку на поверхности кожи и слизистых оболочек. Это препятствует заселению их бо-

лезнетворными бактериями, попадающими извне. Способность нормальной мик-

рофлоры ограничивать рост патогенов называется колонизационной резистент-

ностью. В частности, для толстого кишечника колонизационную резистентность создают бифидо- и лактобактерии.

2.Обеспечивает иммуномодулирующую и иммуностимулирующую функции: ока-

зывает постоянное антигенное стимулирующее действие, что способствует раз-

витию лимфоидной ткани кишечника, синтезу секреторных IgА, активации фаго-

цитоза. Это приводит к формированию и нормальному функционированию им-

мунной системы.

15

3.Обладает анатагонистическим действием по отношению к болезнетворным бактериям. В частности, кишечная палочка является антагонистом возбудителей брюшного тифа и дизентерии.

4.Инактивирует токсические вещества и способствует их выведению из организма.

5.Участвует в энтеральном синтезе витаминов группы В, К, никотиновой кислоты.

6.Участвует в липидном, водно-солевом обмене, обмене желчных кислот.

7.Улучшает перистальтику кишечника и процессы всасывания питательных веществ в кишечном тракте.

Эубиоз и дисбиоз.

Организм человека и колонизирующие его микробы представляют единую экологическую систему, находящуюся в состоянии динамического равновесия.

Эубиоз – относительно стабильные видовые и количественные соотношения микробов, населяющих организм.

Дисбактериоз или дисбиоз – (от греч. dis – приставка отрицания и «bacteria») состояние микробного дисбаланса организма. Дисбактериоз не является болезнью, но может быть следствием какого-либо заболевания. В России под дисбактериозом обычно понимают дисбактериоз кишечника – это «клинико-лабораторный синдром, связанный с изменением качественного и/или количественного состава микрофлоры толстого кишечника» (Отраслевой стандарт «Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника». ОСТ 915000.11.0004-2003, Приказ МЗ РФ №

231от 09.06.2003).

Вофициальных международных классификациях болезней (МКБ-10), заболевания с названием «дисбактериоз» не существует.

За рубежом существует диагноз «синдром избыточного бактериального роста». Он ставится при обнаружении в 1мл содержимого тонкой кишки >105 микроорганизмов и/или появлении в ней флоры, характерной для толстой кишки.

16

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА

1. Выделение чистой культуры аэробов (продолжение).

III этап исследования. Через 24 часа на скошенном МПА обнаруживают одно-

родный рост в виде сплошного налета желтоватого цвета, а в МПБ – диффузно-

мутящий рост. С целью проверки чистоты выделенной культуры готовят мазок,

окрашивают по Граму и микроскопируют. Для оценки чистоты культуры необ-

ходимо просматривать не менее 10 полей зрения. Обнаружение в мазках со ско-

шенного МПА только гроздьевидно расположенных грамположительных кокков, а

в мазках из МПБ – грамотрицательных палочек свидетельствует о чистоте выде-

ленных культур.

Для биохимической идентификации грамотрицательных палочковидных бакте-

рий до вида используют набора реагентов «Мультимикротесты». Планшеты с тест-

системами помещают в термостат при температуре 370С на 24 часа.

IV этап исследования. Учет биохимических свойств выделенной культуры:

Вывод: из смеси бактерий выделены две культуры. Первая культура иден-

тифицирована как E.coli на основании морфо-тинкториальных (грамотрицательные палочки), культуральных (полупрозрачные, гладкие колонии средних размеров) и

биохимических свойств. Вторая культура идентифицирована как Staphylococcus spp.

на основании морфо-тинкториальных (грамположительные гроздьевидно располо-

женные кокки) и культуральных (гладкие выпуклые колонии золотистого цвета)

свойств.

2. Санитарно-бактериологическое исследование чистоты воздуха в бактериоло-

гической лаборатории.

I этап исследования. Производят посев воздуха аспирационным методом с по-

мощью аппарата Кротова. Для определения микробного числа воздух засевают в

17