vse_metody_MIKROB
.pdfКлассификация бактерий по типам питания и способам получения
энергии:
аутотрофы (лат. autos – сам, trophe – питание) – используют для построе-
ния своих клеток неорганический углерод в виде СО2;
гетеротрофы (лат. heteros – другой, «питающийся за счет других») – усваи-
вают углерод из сложных органических соединений.
Для накопления своей биомассы бактериям, помимо источника углерода,
требуется источник энергии. Энергия запасается бактериальной клеткой в форме молекул АТФ. Бактерии, для которых источником энергии является солнечный свет, называются фототрофами. Бактерии, которые для биосинтеза используют энергию химических реакций, называются хемотрофами. Хемо-
трофы получают энергию за счет окислительно-восстановительных реакций. В
патологии человека ведущую роль играют хемогетеротрофы.
К хемогетеротрофам относят:
сапрофиты (от греч. sapros – гнилой и phyton – растение) – источником пи-
тания для них служит мертвый органический материал. Например: клостри-
дии.
паразиты (от греч. parasitоs – нахлебник) – получают питательные вещест-
ва от макроорганизма и могут наносить ему вред. Различают облигатные и факультативные паразиты. Облигатные паразиты не могут жить вне клеток организма. Например: риккетсии, хламидии. Факультативные па-
разиты могут существовать внеклеточно и размножаться на питательных средах in vitro.
3. Культивирование бактерий. Питательные среды для бактерий, их
классификация.
Культивирование бактерий in vitro осуществляется на питательных средах,
которые должны отвечать следующим требованиям:
1.Необходимый набор питательных веществ и ростовых факторов;
2.Оптимальные значения рН (обеспечивают функционирование ферментов
5
бактерий);
3.Влажность;
4.Изотоничность (обеспечивает осмотическое равновесие между микробной клеткой и средой, облегчает процессы осмоса и диффузии питательных веществ);
5.Стерильность.
Питательные среды для бактерий
Классификации питательных сред.
По консистенции (физическим свойствам):
жидкие – мясо-пептонный бульон (МПБ), 1% пептонная вода;
6
полужидкие – полужидкий мясо-пептонный агар* (МПА с концентра-
цией агар-агара до 1%);
плотные – МПА (концентрация агар-агара 2-3%).
* Агар – полисахарид, получаемый из водорослей «агар-агар». Он плавится при температуре 1000С, а застывает при температуре 400С.
7
По составу:
простые (МПА, МПБ);
сложные (кровяной агар).
По назначению:
транспортные – для первичного посева и транспортировки исследуемо-
го материала в лабораторию;
элективные (селективные) – среды для избирательного культивирова-
ния бактерий определенного вида (1% пептонная вода и щелочной агар для холерных вибрионов, среда Плоскирева – для возбудителей брюш-
ного тифа и дизентерии);
дифференциально-диагностические – для дифференциации отдельных видов бактерий по ферментативным свойствам. Например: среда Эндо –
для кишечных бактерий.
8
Состав и механизм работы среды Эндо.
Состав: МПА + 1% лактозы + индикатор (фуксин, обесцвеченный гипо-
сульфитом натрия).
Дифференциация кишечных бактерий основана на различиях в способно-
сти расщеплять лактозу. Кишечные палочки расщепляют лактозу до кислоты,
которая нейтрализует гипосульфит натрия. В результате фуксин из связанного состояния переходит в свободное. Колонии кишечных палочек окрашиваются в красный цвет (лактозопозитивные). Возбудители брюшного тифа и дизенте-
рии не расщепляют лактозу, поэтому дают на среде Эндо бесцветные (лактозо-
негативные) колонии.
9
специальные – для выделения и культивирования бактерий, не расту-
щих на простых средах (сывороточный агар, кровяной агар);
Сывороточный агар |
Кровяной агар |
накопительные – для накопления возбудителя при его низкой концен-
трации в материале от больного (селенитовая среда – для культивирова-
ния возбудителей дизентерии).
4. Дыхание бактерий. Классификация бактерий по типу дыхания.
Сущность дыхания у микроорганизмов – получение энергии, образующей-
ся в процессе прямого биологического окисления веществ кислородом или пу-
тем ферментативного метаболизма. Накопление энергии происходит в мезосо-
мах.
В соответствии с потребностями в кислороде бактерии классифици-
руют на основные группы:
Облигатные (строгие) аэробы – микроорганизмы, которые растут и раз-
множаются только в присутствии кислорода. Например: Vibrio cholerae, Pseu-
domonas aeruginosa.
10
Облигатные анаэробы – микроорганизмы, которые растут и размно-
жаются только без доступа кислорода. Например: Clostridium botulinum, Clostridium tetani, Bacteroides fragilis.
Факультативные анаэробы – микроорганизмы, которые могут расти и размножаться как в присутствии кислорода, так и в бескислородных условиях.
Например: Escherichia coli, Salmonella typhi, Mycobacterium tuberculosis.
Микроаэрофильные бактерии – микроорганизмы, которые растут и раз-
множаются при повышенном содержании СО2 и низком содержании О2. На-
пример: Helicobacter pylori, Campylobacter coli.
5.Бактериологический метод диагностики инфекционных заболева-
ний. Методы культивирования бактерий. Получение чистой культуры аэ-
робов и анаэробов. Способы создания анаэробных условий.
Основным методом диагностики инфекционных заболеваний является
бактериологический. Он заключается в посеве исследуемого материала
(кровь, моча, фекалии, мокрота, мазок со слизистой оболочки ротоглотки и но-
са и др.) на искусственные питательные среды для выделения чистой культуры возбудителя. Затем проводят его идентификацию по морфологическим, тинкто-
риальным, культуральным, биохимическим, антигенным и др. признакам.
Выделение чистой культуры аэробных возбудителей достигается путем посева исследуемого материала на плотные питательные среды (в чашке Пет-
ри), что приводит к механическому разобщению отдельных микробных клеток друг от друга. Посев производят секторами бактериологической петлей и по-
мещают в термостат при температуре 370С. Размножение изолированных кле-
ток дает потомство (колонию) одного вида, т.е. чистую культуру микробов.
11
чашка Петри с плотной питательной средой
бактериологическая петля
Посев исследуемого материала секторами для получения изолирован-
ных колоний микроорганизмов
Для получения изолированных колоний и чистой культуры анаэробов
производят посев исследуемого материала петлей секторами на специальные
среды для анаэробов с последующим культивированием в анаэробных (бески-
слородных) условиях.
12
Способы создания анаэробных условий:
1) механическое удаление воздуха из анаэростата с последующим заполне-
нием газовой смесью (80% азота, 10% водорода, 10% углекислого газа);
2) использование газогенераторных пакетов с набором специальных реа-
гентов (боргидрит натрия, винная кислота, бикарбонат натрия) для создания бескислородной газовой среды в анаэростате.
13
Проведение бактериологического исследования по схеме.
Цель бактериологического исследования: выделение и идентификация (оп-
ределение вида) возбудителя.
I этап. Посев исследуемого материала на пластинчатый агар с целью полу-
чения изолированных колоний микроорганизмов.
II этап. Изучение выросших колоний и выделение чистой культуры с це-
лью накопления биомассы одного вида микроорганизмов.
III этап. Определение биохимических, антигенных, патогенных и других свойств выделенной культуры с целью идентификации бактерий.
IV этап. Учет свойств бактерий и вывод о виде возбудителя.
14