vse_metody_MIKROB

тикратные разведения надосадочной жидкости в тиогликолевом буфере в объе-

ме 4,5 мл от 10-1 до 10-9, используя при приготовлении каждого разведения от-

дельную пипетку.

Для определения количества микроорганизмов в исследуемом материале из разведений производят высевы (по 0,1 мл) на соответствующие пластинча-

тые среды (с распределением исследуемого материала стерильным стеклянным шпателем по поверхности среды) или в полужидкие среды в пробирках (табл.

4). Среды Блаурокка и Вильсона-Блера перед посевом регенерируют путем ки-

пячения в течение 40 минут на водяной бане (для удаления кислорода). Посев протея осуществляют в конденсационную воду скошенного МПА (по Шукеви-

чу). При этом практически вся скошенная часть остается незасеянной, чтобы в дальнейшем выявить ползучий рост протея, отличающегося высокой подвиж-

ностью. После посева агар для анаэробов помещают в анаэростат, откачивают воздух вакуумным насосом, заполняют анаэростат газовой смесью: 80% азота, 10% углекислого газа, 10% водорода. Посевы термостатируют при 370С в тече-

ние 2-7 суток.

II этап исследования.

18

Макро- и микроскопическое изучение характера роста на средах:

Бифидобактерии. На полужидкой среде Блаурокка образуют колонии в виде «тяжей», «гвоздиков» или шаровидных форм. Морфология: грамположи-

тельные палочки с раздвоением на одном или обоих концах. Спор и жгутиков не образуют.

Лактобактерии. На МРС растут серовато-белыми колониями. Морфоло-

гия: полиморфные грамположительные палочки от длинных и тонких до корот-

ких, неподвижные, спор не образуют.

Бактероиды. На агаре для анаэробов образуют мелкие и точечные коло-

нии от сероватого до черного цвета. Морфология: грамотрицательные неравно-

мерно окрашенные, полиморфные палочки. Могут варьировать от коккобакте-

рий до нитевидных форм. Есть подвижные и неподвижные варианты. Спор не образуют.

19

Эшерихии. На среде Эндо, как правило, образуют лактозопозитивные ко-

лонии, могут быть лактозонегативные варианты (не более 105 КОЕ/г).

Энтерококки (Е.faecalis, Е.faecium). На энтерококковом агаре образуют мелкие, выпуклые, сероватые колонии. Морфология: грамположительные кок-

ки, располагаются преимущественно попарно или в виде коротких цепочек; не-

подвижны, спор и капсул не образуют.

Стафилококки. Характеристика колоний и морфология описаны в учебно-

методическом пособии «Патогенные кокки и грамотрицательные бактерии.

Возбудители зоонозов».

Протеи. Характерной особенностью протея является ползучий рост (высо-

кая подвижность). Морфология: грамотрицательные палочки, средних разме-

ров, спор и капсул не образуют, подвижны.

20

Клостридии. Колонии клостридий, развивающиеся в глубине среды Виль-

сона-Блера, шаровидной или чечевицеобразной формы черного цвета. Морфо-

логия: грамположительные палочки со слегка закругленными концами, иногда с центрально или субтерминально расположенной спорой.

Дрожжеподобные грибы рода Candida. На среде Сабуро образуют вы-

пуклые, сметанообразные, блестящие, белого или кремового цвета. Морфоло-

гия: круглые или овальные почкующиеся клетки с нитями мицелия.

Подсчет микроорганизмов в 1 г фекалий.

Необходимо учитывать количество выросших колоний, степень разведения исследуемого материала и величину посевной дозы. Количественную оценку производят по формуле:

M= N x 10n+1,

где: М – количество микроорганизмов в 1 г фекалий;

N – количество выросших колоний; n – степень разведения фекалий.

21

Пример подсчета: на среде Эндо при посеве 0,1 мл из разведения фекалий

10-5 выросло 20 колоний эшерихий. По формуле определяют количество E.coli в 1 г фекалий: М=20 х 10(5+1) = 20 х 106 = 2,0 х 107 КОЕ/1 г.

Cравнение полученных результатов с нормативными показателями.

Выдача заключения на специальном бланке об изменениях в составе фе-

кальной микрофлоры и степени дисбактериоза.

№ анализа______

Ф.И.О.________________________________ Возраст _____________________

Дата поступления материала__________________________________________

При микробиологическом исследовании фекалий выделены:

Примечание: * – представители родов Klebsiella, Enterobacter, Hafnia, Serratia, Proteus, Morganella, Providencia, Citrobacter и др.; ** – Pseudomonas, Acinetobacter и др.

Дата выдачи результата _____________.

22

Занятие № 22 Тема: Микробиологическая характеристика сальмонеллезов (брюшного тифа,

паратифов, госпитальных сальмонеллезов), шигеллезов, кампилобактериозов и хеликобактериозов.

Цель занятия. Изучить характеристику сальмонелл, шигелл, кампилобактерий,

хеликобактерий и микробиологическую диагностику вызываемых ими заболе-

ваний.

I.Теоретические знания:

1.Характеристика возбудителей брюшного тифа и паратифов. Патогенез брюшного тифа. Микробиологическая диагностика.

2.Внутрибольничные (госпитальные) сальмонеллезы.

3.Возбудители дизентерии, их свойства. Микробиологическая диагностика бактериальной дизентерии.

4.Характеристика кампилобактерий и хеликобактерий, вызываемые заболева-

ния. Микробиологическая диагностика кампилобактериозов и хеликобакте-

риозов.

II.Практические навыки:

1.Изучение схемы бактериологического исследования крови больного с клини-

ческим диагнозом «брюшной тиф». Учет и интерпретация результатов.

2.Серологическая диагностика брюшнотифозного бактерионосительства (по демонстрации).

3.Изучение схемы бактериологического исследования фекалий больного с клиническим диагнозом «дизентерия». Учет и интерпретация результатов.

1

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ К ЗАНЯТИЮ

1. Характеристика возбудителей брюшного тифа и паратифов. Патогенез

брюшного тифа. Микробиологическая диагностика.

Возбудителей брюшного тифа относят к роду Salmonella, который включа-

ет более 2500 серотипов. Современная классификация сальмонелл основана на строении их ДНК и включает только 2 вида, из которых патогенным для чело-

века является вид Salmonella enterica с 6 подвидами и множеством серотипов в каждом. Это связано с изменчивостью генов, кодирующих синтез белков (фла-

геллинов) жгутиков. По современной номенклатуре возбудителя брюшного ти-

фа, как и возбудителей паратифов, относят к подвиду еntericа и обозначают как

S.еntericа еntericа, серотип typhi. Однако, во избежание путаницы, используют следующие названия возбудителей, соответственно их серотипу:

-возбудитель брюшного тифа – S.typhi;

-возбудитель паратифа А – S.paratyphi A;

-возбудитель паратифа В – S.paratyphi B;

-возбудитель паратифа С – S.paratyphi C.

Морфология: грамотрицательные палочки средних размеров, перитрихи,

спор и капсул не образуют.

Чистая культура S.typhi в окраске по Граму.

2

Культуральные свойства: растут на простых питательных средах: МПА

(S-колонии), МПБ, 20% желчном бульоне (диффузно-мутящий рост). На диф-

ференциально-диагностических средах Плоскирева и Эндо все виды сальмо-

нелл образуют бесцветные или цвета среды колонии, т.к. не ферментируют лак-

тозу, на висмут-сульфитном агаре возбудители брюшного тифа растут в виде черных колоний с металлическим блеском и почернением подлежащей среды.

Рост S.typhi на висмут-сульфитном агаре.

Биохимические свойства: сальмонеллы биохимически менее активны,

чем эшерихии. S.typhi ферментирует углеводы до кислоты, S.рaratyphi А и В до кислоты и газа. Изучение биохимических свойств сальмонелл проводят с по-

мощью энтеротест-систем.

Антигенная структура сальмонелл:

О – соматический антиген;

Н – жгутиковый антиген;

К – оболочечные антигены.

В системе оболочечных антигенов у S.typhi присутствует Vi-антиген (у ви-

рулентных штаммов), являющийся рецептором для Vi-бактериофагов.

На основании определения основных антигенов сальмонелл Ф. Кауфман и П. Уайт построили их классификацию (табл.1). Согласно этой классификации сальмонеллы делят на серогруппы (по наличию общих О-антигенов), которые обозначают буквами латинского алфавита: A, B, C и т.д.

3

Согласно схеме Кауфмана-Уайта, S.typhi относят к группе Д, S.рaratyphi A,

S.paratyphi B, S.paratyphi C к группам А, В, С соответственно. Дифференциация серотипов сальмонелл внутри группы проводится по Н-антигену.

Факторы патогенности сальмонелл:

1.Адгезины для прикрепления сальмонелл к энтероцитам с помощью pili.

2.Инвазины обеспечивают проникновение бактерий в макрофаги лимфоидной ткани тонкого кишечника (пейеровы бляшки) и размножение в них.

3.Vi и K-антигены обеспечивают защиту от фагоцитоза.

4.Эндотоксин (ЛПС).

5.R-плазмиды (кодируют формирование устойчивости к нескольким антибио-

тикам).

4

6. Острова патогенности (хромосомные гены, которые кодируют способ-

ность к адгезии, инвазии, защите от фагоцитоза).

Механизмы патогенного действия эндотоксина сальмонелл

на макроорганизм:

1.Вызывает выработку в организме веществ, обусловливающих лихорадочное состояние.

2.Приводит к расстройствам гемодинамики, резкому снижению артериально-

го давления.

3.Оказывает токсическое действие на нервную систему.

4.Вызывает выраженную лейкопению.

5.Активирует синтез простагландинов, что приводит к повышению цАМФ,

гиперсекреции солей и воды из клеток в просвет кишечника. Возникает

диарея.

Брюшной тиф – острое антропонозное кишечное инфекционное заболева-

ние, характеризующееся поражением лимфатического аппарата тонкого ки-

шечника, паренхиматозных органов, бактериемией, лихорадкой с явлениями общей интоксикации (головная боль, помрачение сознания, бред, галлюцина-

ции) и розеолезными высыпаниями на коже.

Особенности современного течения брюшного тифа:

-менее выраженная симптоматика;

-короткий период лихорадки;

-редко возникает status typhosis (помрачение сознания, бред, галлюцинации);

-частые рецидивы;

-преобладают стертые и абортивные формы (короткое течение, отсутствие ро-

зеолезных высыпаний и поражений внутренних органов).

Источники инфекции: больной человек или бактерионоситель.

Путь заражения: алиментарный при употреблении инфицированной воды

и молочных продуктов.

5