vse_metody_MIKROB

Основную роль в заражении брюшным тифом играют бактерионосители,

которые могут выделять сальмонеллы в течение многих лет.

Тифозная Мэри – самый известный нулевой пациент. Именно из-за нее в начале XX века в Америке началась эпидемия брюшного тифа. Мэри Маллон родилась в Ирландии и эмигрировала в Америку в начале XX века. Она выбрала себе профессию кухарки, и это ее решение стоило жизни нескольким жителям города Мамаронек. Мэри переезжала с места на место и за ней оставались горы трупов. На предложение сдать анализы на брюшной тиф Мэри очень сильно обиделась. Власти насильно отправили Мэри в лечебное учреждение на остров. Через три года Мэри дала присягу, что не будет работать кухаркой и ее освободили. Она начинает работать прачкой. Эта работа приносит маленький доход. Мэри меняет фамилию и снова работает кухаркой. И снова заболевают и умирают люди. После этого Мэри ссылают на остров пожизненно. Мэри умерла от пневмонии, когда ей было 69 лет. При вскрытии было установлено, что возбудители брюшного тифа все время жили в ее желчном пузыре.

Патогенез: из ротовой полости сальмонеллы попадают в тонкий кишеч-

ник, где внедряются в энтероциты, лимфатический аппарат тонкого кишечника,

а затем попадают в кровь (бактериемия и интоксикация). С током крови саль-

монеллы попадают в паренхиматозные органы: печень, почки, селезенка, кост-

ный мозг, где они размножаются в макрофагах. Далее происходит выделение сальмонелл с фекалиями, мочой и другими биологическими жидкостями. Вы-

деление бактерий с желчью приводит к повторному попаданию их в тонкий кишечник и внедрению в лимфатический аппарат. Развивается аллергическая воспалительная реакция замедленного типа с образованием язвенных пораже-

ний стенки тонкой кишки.

Клиника: подъем температуры, лихорадка, интоксикация, увеличение пе-

чени и селезенки. Вследствие образования язвенных дефектов в стенке тонкой кишки – развитие кишечных кровотечений и перфорации стенки.

Клиника паратифов отличается более острым началом и менее тяжелым течением.

6

Материал на исследование: кровь (в стадии бактериемии на первой неде-

ле заболевания), фекалии, моча, желчь, сыворотка крови (со второй недели за-

болевания).

Микробиологическая диагностика брюшного тифа.

1. Бактериологический метод: посев крови производят на желчный буль-

он, фекалии, мочу и желчь засевают на плотные питательные среды. Иденти-

фикацию чистой культуры проводят:

а) по биохимическим признакам (до рода) с помощью энтеротест-систем;

б) по антигенным признакам (до серогруппы, а затем до серотипа) в РА на стекле с диагностическими сыворотками;

в) фаготипированием (в эпидемиологических целях для установления ис-

точника инфекции).

2. Серологический метод: со 2-й недели заболевания сыворотку крови больного исследуют с помощью ИФА и в РНГА с O- и Vi-эритроцитарными диагностикумами.

Брюшной тиф – это заболевание, при котором нередко после выздоровле-

ния формируется носительство в связи с длительным сохранением сальмонелл в различных органах, чаще в желчном пузыре.

Современной особенностью эпидемиологии брюшного тифа является:

▪увеличение частоты завоза инфекции с эндемичных территорий;

▪высокий эпидемиологический риск за счет лиц без определенного места жительства, среди которых регистрируется высокая заболеваемость брюшным тифом.

С целью выявления брюшнотифозных бактерионосителей обследуют:

а) лиц, переболевших брюшным тифом и паратифом;

б) лиц, бывших в контакте с больными брюшным тифом и паратифом;

в) здоровых лиц (работников пищевых, детских и лечебных учреждений, а

также учреждений системы водоснабжения);

7

г) лиц с лихорадкой неясной этиологии более 5 дней.

Микробиологическая диагностика брюшнотифозного носительства.

1. Серологический метод:

а) ИФА – для определения IgG, как маркеров ранее перенесенного заболевания;

б) РНГА с эритроцитарным Vi-диагностикумом. Vi-антитела быстро исчезают после полного выздоровления, но при наличии брюшнотифозного носительства присутствуют постоянно.

Все лица, сыворотки которых дали положительный результат в ИФА и РНГА, подлежат тщательному многократному бактериологическому обследо-

ванию.

2. Бактериологический метод проводится по обычной схеме (см. выше бактериологическую диагностику брюшного тифа). На исследование забирают фекалии и мочу 5-кратно с интервалом 1-2 дня и однократно желчь. Оконча-

тельный диагноз брюшнотифозного носительства может быть установлен толь-

ко после выделения возбудителя из исследуемого материала.

Специфическая профилактика брюшного тифа проводится по эпидеми-

ческим показаниям химической сорбированной брюшнотифозной вакциной,

обогащенной Vi-антигеном (малоэффективна).

Существует фагопрофилактика с использованием брюшнотифозного

бактериофага.

2. Внутрибольничные (госпитальные) сальмонеллезы.

Основным возбудителем внутрибольничных сальмонеллезов является

S.typhimurium, который отличается множественной устойчивостью к антибио-

тикам, дезинфектантам, антисептикам и не лизируется типовыми сальмонел-

лезными бактериофагами.

Источники инфекции: больной человек или бактерионоситель.

Пути заражения: воздушно-пылевой: при вдыхании воздуха, содержаще-

го пылевые частицы с адсорбированными на них сальмонеллами; контактно-

8

бытовой: через руки персонала и больных, аппаратуру (эндоскопы, зонды, ап-

параты для ИВЛ и др.), предметы ухода за больными; алиментарный. Наибо-

лее восприимчивы к инфекции дети до 1 года, поэтому заболевания чаще реги-

стрируют в детских стационарах среди новорожденных.

Клинические формы:

- гастроинтестинальная – гастроэнтериты с резким обезвоживанием ор-

ганизма и интоксикацией.

-генерализованная – септицемия, менингит с высокой летальностью.

3.Возбудители дизентерии, их свойства. Микробиологическая диагностика бактериальной дизентерии.

Возбудителей бактериальной дизентерии относят к роду Shigella. По меж-

дународной классификации выделяют 4 основных вида: S.dysenteriae (Григорь-

ева-Шига), S.flexneri, S.sonnei, S.boydii.

Морфология: грамотрицательные палочки средних размеров, неподвиж-

ны, спор и капсул не образуют.

Культуральные свойства: на средах Эндо и Плоскирева образуют лакто-

зонегативные колонии, т.к. не ферментируют лактозу. На селенитовой (накопи-

тельной) среде – диффузное помутнение.

Рост S.dysenteriae на среде Эндо.

9

Биохимические свойства: биохимически менее активны, чем эшерихии и сальмонеллы. Изучение биохимических свойств проводят с помощью энтеро-

тест-систем.

Антигенная структура шигелл:

О – соматический антиген;

К – оболочечные антигены.

Факторы патогенности шигелл:

1. Адгезины для прикрепления шигелл к колоноцитам с помощью pili, а также липополисахаридов наружной мембраны.

2.Инвазины (кодируются плазмидами) для проникновения в эпителиальные клетки толстого кишечника и размножение в них. В результате происходит разрушение эпителия и образование язв.

3.Белки внутриклеточного распространения вызывают лизис мембран колоноцитов, что обеспечивает межклеточное распространение шигелл.

4.Экзоэнтеротоксин. Его продукция наиболее выражена у S.dysenteriae (в 1000 раз выше, чем у других видов). Экзоэнтеротоксин шигелл состоит из 2 субъединиц: А и В. А-субъединица – собственно токсическая, нарушает синтез белка в клетках эпителия толстого кишечника и эндотелия капилляров; В- субъединица способствует прикреплению токсина к клеткам эпителия кишечника и проникновению в клетку А-субъединицы.

5.Эндотоксин (угнетает фагоцитоз и вызывает поражение слизистой оболочки толстого кишечника).

6.R-плазмиды кодируют формирование устойчивости к нескольким антибиотикам.

7.Эклипсные антигены с тканью толстого кишечника.

Дизентерия – кишечное инфекционное заболевание, характеризующееся поражением дистальных отделов толстого кишечника и интоксикацией. Клас-

сическими симптомами заболевания являются жидкий стул с примесью слизи и крови («инфекционный гемоколит»), а также тенезмы (резкие болевые ощу-

щения в области ануса), которые создают ложные позывы к дефекации.

10

Источники инфекции: больной человек или бактерионоситель. Болеют чаще дети в возрасте до 10 лет.

Путь заражения: алиментарный через инфицированную воду и пищевые продукты. Заболевание имеет выраженную сезонность – летне-осенний период.

Материал на исследование: фекалии.

Микробиологическая диагностика дизентерии.

1. Бактериологический метод (основной): из фекалий для посева заби-

рают слизистые и гнойные комочки с примесью крови. Посев исследуемого ма-

териала производят на дифференциально-диагностическую среду Плоскирева и накопительную селенитовую среду.

Выделенную культуру идентифицируют:

а) по биохимическим признакам с помощью энтеротест-систем;

б) по антигенным свойствам (в РА на стекле с диагностическими сыворотками).

2. РНГА по Рыцаю, РИФ: для определения шигеллезного антигена в фе-

кальном материале.

После перенесенных брюшного тифа и дизентерии у человека формирует-

ся стойкий кишечный дисбактериоз, требующий длительной корригирующей терапии. Специфическое лечение и профилактика не разработаны.

4.Характеристика кампилобактерий и хеликобактерий, вызываемые за-

болевания. Микробиологическая диагностика кампилобактериозов и

хеликобактериозов.

Возбудителей кампилобактериозов относят к роду Campylobacter, семей-

ству Campylobacteriaceae: C.jejuni, C.coli, C.fetus, C.upsaliensis.

Морфология: тонкие, грамотрицательные изогнутые палочки, имеющие форму запятой, латинской буквы S, крыльев летящей чайки. Спор и капсул не образуют, монотрихи.

11

Чистая культура кампилобактерий в окраске по Граму.

Культуральные свойства: микроаэрофилы, растут на специальных средах с добавлением крови при пониженной (5-10%) концентрации кислорода. Тем-

пературный оптимум 420С. Патогенные виды культивируют в присутствии га-

зовой смеси (5% О2, 10% СО2, 85% N2). Рост на плотной среде в виде росинок или капель прозрачной воды.

Факторы патогенности кампилобактерий:

1.Адгезины (для прикрепления к эпителию кишечного тракта).

2.Инвазины обеспечивают проникновение бактерий в эпителиальные клетки тонкого и толстого кишечника.

3.Токсинопродукция (выработка эндотоксина, экзоэнтеротоксина, цито-

токсина).

Источником инфекции при всех кампилобактериозах являются сельско-

хозяйственные животные и птицы, в некоторых случаях – собаки и кошки.

Пути заражения: алиментарный (через инфицированную воду и пищевые продукты), контактный (при уходе за животными).

Основные клинические проявления:

-гастроэнтериты с диареей, лихорадкой и болью в животе;

-колиты (боли в животе, имитирующие острый аппендицит);

-внекишечные формы – чаще реактивный артрит.

C.fetus вызывает сепсис, тромбофлебит, менингоэнцефалит. Может вы-

звать самопроизвольные аборты с внутриутробным инфицированием плода.

Материал на исследование: фекалии, кровь, ликвор.

12

Микробиологическая диагностика кампилобактериозов.

1. Бактериологический метод с идентификацией выделенной культуры по биохимическим и антигенным признакам.

2. Серологический метод: РСК, РИФ, ИФА.

Возбудителей хеликобактериозов относят к семейству Helicobacteriaceae,

роду Helicobacter: H.pylori, H.fenneliae (вызывает гастроэнтериты, колиты, сеп-

сис).

Морфология: спиральные грамотрицательные палочки, имеющие S-

образную форму. Спор и капсул не имеют. Лофотрихи.

H.pylori, лофотрихи.

Культуральные свойства сходны с кампилобактериями.

Факторы патогенности H.pylori:

1.Адгезины (для прикрепления к гастроцитам).

2.Ферменты инвазии: уреаза, муциназа и др.

3.Цитотоксины.

4.Острова патогенности (гены, кодирующие синтез цитотоксинов).

Источник инфекции: человек, а также домашние животные.

Пути передачи: алиментарный, контактный (со слюной), возможно зара-

жение контактно-бытовым путем.

H.pylori причастен к возникновению гастритов, язв желудка и двенадцати-

перстной кишки, аденокарциномы желудка.

Материал на исследование: биоптаты слизистой желудка.

13

Методы микробиологической диагностики.

1.Микроскопия биоптатов желудка.

2.Определение уреазной активности биоптатов желудка.

3.Молекулярно-биологический метод: ПЦР.

4.Бактериологический метод (малоэффективен).

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА

1.Изучение схемы бактериологического исследования крови больного с клини-

ческим диагнозом «брюшной тиф».

I этап исследования.

От больного с подозрением на брюшной тиф на 1-й неделе заболевания, в

период лихорадки, берут 10 мл крови из локтевой вены и производят посев в

20% желчный бульон в соотношении 1:10. Посевы ставят в термостат на 24 ча-

са при температуре 370С. II этап исследования.

Учет характера роста в желчном бульоне __________________________.

Высев из флакона на среду Эндо. Посевы ставят в термостат на 24 часа при температуре 370С.

III этап исследования.

Учет характера роста на среде Эндо ______________________________.

Идентификацию выделенной культуры проводят:

а) по антигенным признакам – постановка реакции агглютинации на стекле с диагностическими сальмонеллезными сыворотками О2, О4, О9 (определение серогруппы сальмонелл), а затем с соответствующей Н-сывороткой – установ-

ление серотипа возбудителя – см. табл.1 (классификация Кауфмана-Уайта)

______________________________________________________________;

б) по биохимическим признакам – с помощью энтеротест-систем;

в) с целью определения фаготипа производят посев 4-часовой исследуемой культуры на чашку с МПА сплошным газоном, затем наносят капли типовых брюшнотифозных бактериофагов (Vi, А, В, С, Д, Е, F).

14

г) для выбора эффективной антибиотикотерапии определяют чувствительность выделенной культуры к антибиотикам диско-диффузионным методом.

IV этап исследования.

Учет результатов и выдача заключения о серотипе и фаготипе выделенной культуры, чувствительности ее к антибиотикам.

2.Серологическая диагностика брюшнотифозного носительства: учет РНГА с эритроцитарным Vi-диагностикумом (по демонстрации).

Заключение о результатах серодиагностики.

3.Изучение схемы бактериологического исследования фекалий больного с клиническим диагнозом «дизентерия».

I этап исследования.

Посев фекалий больного на среду Плоскирева и селенитовую среду. Посевы ставят в термостат на 24 часа при температуре 370С.

II этап исследования.

Макроскопическое изучение характера роста на средах

_______________________________________________________________.

Отбор лактозонегативных колоний со среды Плоскирева и пересев их на скошенный МПА для накопления чистой культуры. Посевы помещают в термостат на 24 часа при температуре 370С.

III этап исследования.

Отмечают характер роста на скошенном МПА______________________. Затем проводят идентификацию выделенной культуры:

а) по антигенным признакам – постановка реакции агглютинации на стекле со смесями диагностических адсорбированных дизентерийных сывороток (смеси №1, 2, 3), а затем с монорецепторными диагностическими сыворотками (Зонне, Флекснера, Бойда)_____________________________________________;

б) по биохимическим – с помощью энтеротест-систем;

15