chebanov_m_s_galich_e_v_rukovodstvo_po_iskusstv

80

нерестовых температурах снижает их способность реагировать на гонадотропные инъекции и созревание.

Для восстановления реактивности клеток фолликулярного эпителия (в случаях содержания самок при нерестовых температурах) рекомендуется внутримышечное введение препарата трийодтиронина (Т-3), из расчета 20 мг на один кг веса в сутки (в течение 2–4 суток) при их преднерестовом выдерживании. Следует отметить, что инъекции трийодтиронина не эффективны в случае продолжительного действия неблагоприятных условий и необратимых изменений (атрезии) ооцитов (Детлаф, Гинзбург и Шмальгаузен, 1981).

Для повышения репродуктивного качества, увеличения плодовитости и ускорения синхронизации созревания диких самок и, как следствие, более высокой оплодотворяемости икры, предложен метод инъецирования витаминов С (аскорбиновая кислота) и Е (α-токоферола) в период преднерестового содержания производителей (Сорокина, 2004). Для этого используют фармацевтические препараты: раствор 10%-ной аскорбиновой кислоты (100 мг/мл) и 30%-го α-токоферола-ацетата (300 мг/мл). Наибольший эффект получен при разовом введении витамина С, из расчета 10 мг на один кг тела самки, и двухнедельном курсе введения витамина Е (четырехразовое инъецировании), из расчета 15 мг/кг (перед нерестом).

НаследующийденьпослеинъецированиявитаминовЕиСрекомендуется осуществлять инъекции цианокобаламина (витамин В12) в концентрации 500 мкг/мл или 50 мкг на один кг массы тела рыбы (Матишов, Пономарёв и Пономарёва, 2007), который наряду с улучшением рыбоводно-биологических показателей (процент оплодотворения и выживаемость потомства), способствует усилению защитных функций организма, повышению стрессоустойчивости самок осетровых рыб.

4.6 Гормональная стимуляция нереста произвоДИТЕЛЕЙ 4.6.1.Общиерекомендациипопроведениюгормональногостимулирования

Подготовку к гормональному стимулированию производителей начинают при температуре воды, близкой к значениям, оптимальным для инкубации икры, которые отличаются у различных видов осетровых (Таблица 14).

Таблица 14: Оптимальная температура воды (TоС) для инкубации икры осетровых.

Для стимуляции созревания осетровых рыб, наиболее часто используют следующие гонадотропные препараты:

•Ацетонированный гипофиз осетровых рыб (АГП);

•Ацетонированный гипофиз карповых рыб (АГП);

82

Для инъекций используют медицинские шприцы. Длину (2,5–3,8 см) и диаметр иглы, а также объем (1–5 мл) шприца подбирают в зависимости от размера рыбы, дозы и типа препарата. При использовании ацетонированных гипофизов необходимо использовать иглы большего диаметра (для внутривенных инъекций). При приготовлении раствора ГГП и суспензии ацетонированного гипофиза необходимо, чтобы объем готового препарата для рыб массой до 5 кг не превышал 2 мл, на каждые следующие 5 кг массы рыбы объем раствора увеличивается на 1 мл.

Инъекцию производят в спинные мышцы между спинными и боковыми жучкаминауровне3–5спиннойжучки(Рисунок59).Привведениипрепаратов в мышечные ткани необходимо соблюдать осторожность и следить за тем, чтобы рыба при сжатии мышц не вытолкнула препарат. При инъекции препарат не должен вводиться подкожно, опасно также слишком глубокое введение иглы.

Рисунок 59: Гонадотропная инъекция GnRHa: А – самцу севрюги, Б – самке русского осетра.

Если доза препарата для инъецирования велика, то её делят на две части и вводят в разные стороны спины. Приготовление и набор в шприцы суспензии ацетонированногогипофизапроизводитсяза30–40минутдоначалаинъекций. При разбавлении глицериновой вытяжки гипофиза осетровых используется дистиллированная вода. Вместе с тем, следует отметить, что в последние годы ГГП практически не применяется, вследствие прекращения производства осетрового гипофиза, получаемого от взрослых особей, обусловленного запрещением промысла осетровых.

4.6.3 Применение гипофизарных препаратов

При гормональной стимуляции нереста гипофизарными препаратами следует отдавать предпочтение дробным инъекциям. Общая доза препарата зависит от температуры воды и массы рыбы (Таблица 15), а доля предварительной инъекции - от степени зрелости ооцитов, оцениваемой по значению коэффициента поляризации (Таблица 16). Следует учесть, что истощенные

84

Таблица 16: Зависимость дозы гипофизарных препаратов, вводимой при предварительной инъекции, от коэффициента поляризации ооцитов.

Традиционно, самцов всех видов осетровых инъецируют однократно, перед разрешающей инъекцией самок. Доза вводимых гормональных препаратов для самцов в два раза меньше дозы, рассчитанной для самок.

Вэкспериментах с сибирским осетром (Williot, 2002: Wiliot et al., 2009) установлено, что наибольшая двигательная активность спермиев отмечается через 36 часов после инъекции. Поэтому рекомендовалось проводить инъецирование самцов за 2–4 часа до инъекции самок. Для стерляди Танькиным (1979) были показаны возможности получения спермы от самцов

втечение четырёх суток после однократного инъецирования. При этом многократное сцеживание спермы у самцов благоприятно сказывается на подвижности спермиев в последующих порциях спермы.

Вслучае отсутствия возможности надёжной оценки качества самцов (с помощью УЗИ) рекомендуется (Груcлова и Тренклер, 2001), особенно, для белуги и первых партий русского осетра, начинать инъецирование самцов на 1,5–2 суток раньше, чем самок. При этом полученную сперму сохраняют в гипотермических условиях (Раздел 5.1.4).

Груcлова и Тренклер (2001)также показали возможность неоднократного получения спермы путём повторного инъецирования гипофизарным препаратом (инъецирование GnRHa в этом случае менее эффективно) самцов, давших полноценную сперму через 3–4 суток после первого инъецирования.

При этом следует отметить, что данный подход (за исключением случая полного отсутствия самцов) может быть рекомендован только для товарного осетроводства,нонедлягенетическиобоснованныхпрограммискусственного воспроизводства (Глава 11), поскольку он приводит к снижению эффективной численности формируемых популяций. Повторное получение спермы от самцов белуги невозможно.

4.6.4. Рекомендации по применению суперактивного синтетического аналога гонадотропин-релизинг-гормона млекопитающих (GnRHa, сурфагона)

ПрииспользованииGnRHaнеобходимымусловиемсозреваниясамокявляется способностьгипофизавыделятьвкровьподдействиемпрепаратадостаточное количество гонадотропинов (Гончаров и др., 1991). При применении GnRHa негативную роль также может сыграть секреция в кровь в ответ на введение препарата, его ингибитора – дофамина (Гончаров, 1998). Подобная реакция

85

эндокринной системы чаще всего наблюдается у потамодромных видов и форм осетровых рыб (стерлядь и сибирский осетр ленской популяции).

Изучение движения ядра (зародышевого пузырька) и кортикальных реакций показало, что повышение дозы экзогенного гонадотропина может привести к овуляции икры, даже при неполном завершении созревания цитоплазмы и отсутствии компетентности созревания ооцитов (Nocillado, Van Eenennaam and Doroshov, 1999).

В отличие от гипофизарных препаратов, GnRHa не повреждают ооциты, даже при 400-кратном превышении доз инъекций (Гончаров, 1998).Это очень важно, особенно для белуг крупного размера (более 100 кг), когда не всегда возможно точно установить массу тела рыб. Отсутствие негативных последствий для воспроизводства при введении избыточной дозы GnRHa по сравнению с гипофизарными инъекциями было отмечено для севрюги (Чебанов и Савельева, 1996).

Важным условием успешного применения сурфагона GnRHa является соблюдение оптимального температурного режима с повышением температуры воды на 2–3оС после первой инъекции (Chebanov et al., 1998; Chebanov and Savelyeva, 1999). GnRHa не стимулирует созревание рыб в условиях колебаний температуры (особенно, резкого снижения), поскольку не содержит гонадотропных гормонов и рассчитан на “мягкую” физиологическую стимуляцию нейроэндокринных центров рыб , способствуя появлению эндогенного гонадотропина, что обычно обеспечивает высокое рыбоводное качество икры.

Препарат малоэффективен для больных, стрессированных или травмированных рыб, при резких перепадах атмосферного давления и нарушении гидрохимического режима.

Наиболее эффективен GnRHa при работе с самками проходных видов

– севрюги, русского осетра и белуги, и самцами всех видов, для которых минимальной дозой является 1–2 мкг/кг. Препараты могут вводиться единовременно или дробно (Таблица 17).

86

Таблица17:РекомендациипоприменениюGnRHaдлястимуляциисозревания производителей осетровых рыб (Чебанов, Галич и Чмырь, 2004).

В некоторых случаях возникает необходимость комбинированного применения гипофизарных препаратов и GnRHa. В этом случае, после предварительной гипофизарной, производится разрешающая инъекция GnRHa (1,0–1,5 мкг/кг),. Если GnRHa инъецировать перед гипофизарным препаратом, существует опасность, что введенный после него экзогенный гонадотропин будет «лишним», что приведет к повреждению (атрезии) ооцитов.

Кроме того, в течение последних 15 лет, использование традиционного гипофиза осетровых для стимуляции созревания производителей осетровых в бассейне Азовского моря часто приводило к снижению качества гамет осетровых рыб. Сравнительный анализ реакции севрюги, пойманной в реке, настимуляциюгипофизарнымпрепаратомиGnRHaподтвердил,чтоинъекции GnRHa оказывают негативное влияние на «речную» рыбу, которая находится ближе к нерестовому состоянию и являются катализатором, активизирующим гипофиз зрелых рыб (Chebanov and Savelyeva, 1999).

87

Глава 5 Получение зрелых половых продуктов и инкубация икры

5.1 ПоЛУЧЕНИЕ зреЛЫХ поЛОВЫХ прОДУКТОВ 5.1.1 Контроль за ходом созревания самок и самцов

Время созревания производителей зависит от температуры воды (Детлаф, Гинзбург и Шмальгаузен, 1981) (Таблица 18).

Таблица 18: Продолжительность созревания самок осетровых рыб при различной температуре (в часах после гипофизарной инъекции) (данные Детлаф, Гинзбург и Шмальгаузен, 1981). А – время просмотра первых самок; Б–время,послекоторогонеудаетсяполучитьрыбоводно-продуктивнуюикру.

Примечание: Жирным шрифтом с подчеркиванием (например, 22) обозначены оптимальные нерестовые температуры; жирным шрифтом без подчёркивания (например, 22) –

экстремальные нерестовые температуры.

88

В случае если для самок применялась однократная инъекция GnRHa, расчеты производятся с учетом 5–6 часовой задержки созревания.

Просмотррыбначинаютвсоответствиисрасчетнымвременемсозревания первых самок. Небольших рыб сгибают в латеральном направлении и оценивают степень овуляции по выделению овариальной жидкости или икры (Рисунок 60):

•рыб, дающих струю икры, готовят к операции по сцеживанию (время от просмотра до сцеживания икры у таких рыб не должно превышать 30–40 минут, например, у севрюги это может привести к полной резорбции всей икры);

•рыб, дающих овариальную жидкость или отдельные икринки, – просматривают через 1 час;

•рыб, не показывающих признаков созревания, – просматривают через

2–3 часа.

Рисунок 60: Просмотр зрелой самки для оценки степени овуляции.

У крупных самок периодически пальпируют брюшко, и по степени его мягкости, определяют наиболее зрелых из них. Для оценки степени овуляции крупных рыб целесообразно использовать метод УЗИ (Глава 14), применение

89

которого позволяет избежать возможных стрессов. При этом рыба остается рыб в воде (Chebanov and Galich, 2009). Рыб, не показавших признаков созревания по истечение предельного времени созревания, бракуют. Для снижения стрессирующего воздействия в ходе осмотра необходимо разделять самок на группы по степени готовности к овуляции и рассаживать их по бассейнам отдельно. Для снижения потерь икры от произвольного выбоя – крупных рыб целесообразно размещать по одной или по две особи на бассейн.

Взятие половых продуктов у самцов начинают после того, как первые самки показали явные признаки созревания – обильная струя овариальной жидкости с единичными икринками. В случае обнаружения самок, готовых к немедленному отбору икры, сначала получают икру, а потом сперму.

Приемы просмотра производителей, в принципе общие для всех видов осетровых, но конкретные особенности их применения зависят от вида, размеров рыб, типа рыбоводных емкостей, в которых содержатся самки после инъекции. При просмотре самок необходимо снизить до минимума стрессирующие воздействия (шум и резкие изменения освещённости). Установка мелких сит на сливных трубах из бассейнов, позволяет улавливать овулировавшие икринки, оптимизируя контроль за созреванием самок. Для снижениястрессовоговоздействиявтёмноевремясутокследуетиспользовать красныйсветсдлинойволны680нм,которыйневоспринимаетсяосетровыми (Сбикин, 1973).Для облегчения работы с самками при их просмотре, переносе к месту отбора икры и самом отборе необходимо иметь специальное оборудование и материалы (столы, носилки, рыбоводные рукава и т.п.).

5.1.2 Отбор овулировавшей икры

Недостаток производителей, заготовленных в естественных водоемах, длительность и трудоемкость процесса формирования маточных стад вызывают необходимость прижизненного получения икры у самок осетровых рыб. Существует несколько методов прижизненного отбора икры.

5.1.2.1 Метод Подушки С.Б.

В последние годы наиболее эффективным способом отбора овулировавшей икры является метод надрезания яйцеводов с последующим сцеживанием икры (Подушка, 1986), являющийся наименее травматичным для рыб (Рисунок 61).