chebanov_m_s_galich_e_v_rukovodstvo_po_iskusstv

51

4.2.3.3 Эндоскопия

Эндоскопические исследования, предполагающие визуальное определения полаистадийзрелости,являютсяболеесовременнымспособомизучениягонад осетровых (Ortenburger, Jansen and Whyte, 1996). Данный метод позволяет визуально оценить гонады с помощью медицинских диагностических инструментов, таких как цистоуретроскоп или борескоп, используемых для исследования заболеваний урогенитальной системы, (Рисунок 38).

Рисунок 38: Эндоскопическая система для определения пола и стадий зрелости.

Исследование гонад осуществляется через оптико-волоконную систему прибора. Разрешающая способность метода довольно высока, особенно для зрелых рыб, поскольку через оптическую систему прибора хорошо видны мельчайшие детали строения и окраска тканей (Сафронов и др., 2006). При этом, поскольку у зрелых рыб зонд борескопа вводится в полость тела через половое отверстие, диаметр и длина зонда должны соответствовать размерам генитального отверстия и семенного протока. Для исследования незрелых рыб требуется вводить зонд через небольшой (0,5–1,0 см) разрез в брюшной полости, сделанный между второй и третьей жучками на левом боку рыбы со стороны хвоста (Рисунок 39).

52

Рисунок 39: Введение зонда борескопа через разрез в брюшной полости незрелого осетра для определения его пола.

Хорошие результаты были получены при использовании борескопов с диаметром зонда 4 мм (Kynard and Kieffer, 2002). Минимальное стандартное фокусноерасстояниелинзборескопасоставляет1мм,поэтомудляповышения резкости изображения рекомендуется использовать фокусирующие насадки (кольца) (Kynard and Kieffer, 2002). Без них при соприкосновении зонда с тканью стенки урогенитального протока, изображение может стать нечётким. Важно также ограничивать глубину введения зонда в полость тела (путем использования гибких зондов), чтобы не повредить клапан воронки яйцевода. Поскольку, длина яйцеводов составляет 14–16% от длины тела рыбы, использованиеборескопасдлинойзонда16см,рекомендуется длясреднихпо размеру рыб, но для очень крупных рыб следует использовать зонды длиной

25 см (Kynard and Kieffer, 2002).

Во избежание травмирования внутренних органов рыб при проведении эндоскопии, необходимо все особи, даже небольшие, полностью обездвижить с помощью анестезирующих препаратов. Исследования можно проводить в небольших бассейнах. В этом случае рыбу переворачивают на спину, оставляя голову погруженной в воду, и вводят зонд борескопа в половое отверстие и далее в правый или левый яйцевод параллельно продольной оси тела, корректируя расположение зонда в теле визуально через объектив.

Гонады осетровых на I-II стадиях развития визуализируются как однородная розово-оранжевая ткань. (Рисунок40).

53

55

Наболеепозднихстадияхобычнохорошовиднырозовые,оранжевые,темные икринки и ооциты младшей генерации (Рисунок 41).

Рисунок 41: Эндоскопическое изображение ооцитов.

Как показали Гурвиц и др. (Hurvitz et al., 2005), с помощью эндоскопа пол русского осетра может быть определен уже в возрасте трех лет (при этом, количество рыб, у которых этим методом не удалось определить составило 5%). Точность определения пола составила более 98%. Вместе с тем, при введении эндоскопа через абдоминальный разрез 2% рыб было травмировано. Период восстановления этих особей осетра составлял две недели.

В отличие от биопсийных методов, эндоскопия имеет следующие преимущества:

•является минимально-инвазивным методом;

•может быть проведена в полевых условиях;

•продолжительность исследования составляет несколько минут;

•позволяет легко разделить рыб на готовых к нересту в текущем сезоне и незрелых;

•является легкой в освоении.

Следует отметить, что этот метод имеет ряд ограничений. Существенным недостаткомданнойметодикиявляетсято,чтоопределениеполапроизводится по внешнему виду генеративной ткани, поэтому, зачастую невозможно различить гонады самок и самцов, находящиеся на ранних стадиях развития (Рисунок 40). Оптимальным является использование эндоскопии при работе со зрелыми самками для точного определения стадий зрелости икры и готовности к нересту. Применение метода эндоскопии для оценки самцов нецелесообразно.

56

Достоинством всех анатомических методовявляется невысокая стоимость применяемого оборудования, а недостатком – их травматичность. Проникновение в полость тела может не только отрицательно сказаться на физиологическом состоянии рыбы, но и является сильным стрессовым фактором. Кроме того, операционные методы предполагают отслеживание дальнейшего состояния рыбы, заживления операционных швови лечебнопрофилактические мероприятия (Глава 5).

4.2.3.4 Эндокринологический метод

Этот альтернативный, прижизненный, минимально инвазивный метод, заключающийся в оценке концентрации таких половых стероидов, как тестостерон (T), 11-кетотестерон (11KT), эстрадиола (E2 или 17ß-эстрадиол),

в плазме крови как диких (Webb et al., 2002; Ceapa, Williot and BacalbasaDobrovici, 2002; Barannikova, Bayunova and Semenkova, 2005; Semenkova et. al., 2005), так и выращенных (Amiri et al., 1996; Aхундов, 1997; Семенкова и др., 2006) осетровых рыб, широко используется. Ахундов (1997) отмечает, что данная методика позволяет достоверно различать пол самцов молоди севрюги (на основе различий в концентрации T и E2 в плазме) уже к моменту цитологической дифференцировки гонад самцов в возрасте 10–12 мес., как видно из Таблицы 8).

57

Таблица 8: Изменения в концентрации стероидов в плазме молоди севрюги при различных стадиях развития гонад (Ахундов, 1999).

1-ПодчеркиваниемобозначенысущественныеразличиявзначенияхE2иT(исоответственно отношения E2/T) для самок и самцов. Эти различия облегчают проведение процедуры

определения пола.

59

Семенкова и др. (2006) подтвердили данное заключение, но отметили, что эффективное и надежное использование этого метода требует, чтобы мониторинг состояния репродуктивной системы и измерения уровня T, 11KT и E2 у самок и самцов различного возраста, проводился на осетровых хозяйствах разного типа (прудовых, тепловодных, с рециркуляцией).

Основнымнедостаткомэндокринногометодаявляетсявысокаястоимость проведения испытаний как в полевых, так и в лабораторных условиях (Van Eenennaam,BruchandKroll,2001).Дляпроведенияанализовкровинеобходимо соответствующее оборудование, определенный тип системы мечения рыб, дополнительное рабочее время для двукратного вылова рыбы (первый раз для мечения и второй раз для отделения самцов от самок), а также время для проведения самих анализов (в достаточно крупных товарных хозяйствах-

порядка 15 000–20 000 проб).

4.2.3.5 Метод Фурье-преобразования инфракрасных спектров

В самых последних исследованиях, проведенных M. Вэбб и др. (Webb et al., 2009) и Лу и др. (Lu et al., 2010) было показано, как возможности радиоиммуного анализа и измерения содержания в плазме стероидных гормонов, кальция, протеинов и т.д. могут быть расширены с использованием метода инфракрасной спектроскопии с Фурье-преобразованием (ИК-Фурье) для определения стадии зрелости гонад самок белого осетра (Рисунок 44).

Рисунок 44: Метод Фурье–преобразования инфракрасных спектров (Webb et al., 2009).

Четкие различия в стадиях зрелости (превителлогенез, вителлогенез, поствителлогенез и атрезия ооцитов) были выявлены с помощью метода главных компонентов (МГК). Последовательность развития ооцитов на поздних стадиях вителлогенеза также контролировалось с использованием