Сбор, хранение насекомых и клещей

(для определения видовой принадлежности и их пораженности патогенами при оценке эффективности дезинсекционных мероприятий и проведения биологической разведки в природных условиях)

П равильное определение видовой принадлежности членистоногих – переносчиков болезней – важная задача энтомолога и эпидемиолога (Рис. 30).

б)

а)

в)

Рис. 30. Членистоногие опасные для человека

а) блоха крысиная (Xenopsylla cheopis) – переносчик чумы б) клещ (Ixodea persulcstus) – переносчик энцефалитов и риккетсиозов

в) Посадка комара малярийного (An.maculipenig) и немалярийного (Culen pipieng)

Ниже приводятся наиболее простые, но хорошо разработанные методы вылова и хранения умерщвленных насекомых и клещей.

В

в)

связи с тем, что определение видовой принадлежности многих насекомых проводится не только по взрослым, но и по преимагинальным стадиям, чрезвычайно важно иметь в сборах все стадии их развития.

Оборудование, необходимое для сбора и хранения насекомых.

а) Водный сачок. Диаметр стандартного сачка 20 см, глубина 25см. Мешок сачка шьется из мельничного газа, капрона или другой плотной ткани, легко пропускающей воду. Стальной обруч сачка укрепляется на рукоятке, длина которой 1 м. Наличие рукоятки позволяет производить вылов водных стадий насекомых из малодоступных к подходу водоемов.

б) Кюветы или глубокие тарелки служат для вылова водных стадий насекомых из мелких водоемов, а также для просмотра содержимого водного сачка.

в) Пипетки и микросачки диаметром до 1 см, с короткой рукояткой служат для вылова водных стадий насекомых из кювет и переноса их в фиксатор.

г) Воздушный сачок. Диаметр сачка 40 см, глубина 70 см. Мешок сачка, сделанный из марли, сужается к вершине. Как и у водного сачка, обруч укрепляется на рукоятке. Служит для вылова летающих и сидящих в траве насекомых.

д) Морилки представляют собой стеклянные баночки с притертыми, корковыми или резиновыми пробками или широкогорлые пробирки с пробками, на дно которых помещается мелко нарезанная резина, смоченная хлороформом и прикрытая сверху 3-4 слоями фильтрованной бумаги. При испарении хлороформа резину смачивают повторно. Пары хлороформа убивают насекомых и клещей.

е) Куски бумазеи или вафельной белой ткани необходимы для сбора клещей в растительности.

ж) Коробки с ватными слоями – матрацами (рис.31). Коробки могут быть деревянными, картонными, металлическими, пластмассовыми и т.д. и иметь самые различные размеры. Матрацы делают из тонкого слоя ваты, прикрытой сверху слоем марли. Марля предохраняет от поломки тело насекомого при попадании на него волокон ваты. Матрацы вкладывают в бумажную обертку, свободно раскрывающуюся при раскладке на них насекомых. Ватные слои должны соответствовать размерам коробок.

Рис. 31. Коробка и матрацы для хранения умерщвленных насекомых и клещей.

з) Стеклянные банки, хорошо закрывающиеся пробками, служат для сохранения небольших пробирок со спиртовыми сборами. Каждую помещаемую в спирт пробирку прикрывают ватным тампоном.

и) Пробирки, стеклянные воронки, эмалированные тазы, глазные пинцеты, мягкие рисовальные кисточки, фильтровальная бумага, простые карандаши или черная тушь, марля, лейкопластырь, 96 и 70⁰ спирт, эфир или хлороформ, нафталин, камфара или тимол, ксилол и вазелин, касторовое масло и канифоль.

В очагах заболеваний разбор живого материала рекомендуется проводить в резиновых перчатках.

Правила хранения умерщвленных насекомых и клещей.

а) Выловленные насекомые и клещи должны быть умерщвлены. Окрыленных особей убивают в морилках парами эфира или хлороформа. Длительное выдерживание в морилках убитых насекомых недопустимо, так как тело насекомых становится ломким и, кроме того, прилипая к стеклу морилок, они теряют чешуйки и волоски, в результате чего создаются трудности в определении их видовой принадлежности. Некоторые виды насекомых и клещей погибают при фиксации их спиртом.

б) Собранный материал будет иметь ценность только в том случае, если он будет своевременно и правильно этикетирован. На этикетке простым карандашом или тушью должны быть указаны следующие сведения: место сбора (название местности с указанием более крупной административной единицы, название государства, дата сбора, характер биотопа, фамилия сборщика). При сборах эктопаразитов необходимо дополнительно указывать название животного-хозяина, с которого были сняты насекомые или клещи.

в) Умерщвленные насекомые и крупные клещи должны быть разложены на ватные матрацы с помощью глазного пинцета. Каждый сбор раскладывают отдельно, и если он занимает весь матрац, то этикетка делается общей. Если сбор занимает лишь часть матраца, то отдельные сборы отделяют друг от друга отрезками темных ниток или отчерчивают на марле цветной тушью. Написанную этикетку вкладывают под верхнюю обертку матраца.

Насекомых кладут на бок или спинной стороной кверху. Ниже для каждой крупной систематической группы переносчиков будет указано, как их нужно укладывать для наилучшей сохранности собранного материала.

г) Для предохранения коллекций от вредителей внутренние и наружные поверхности коробок обрабатывают контактными инсектицидами (ДДТ, ГХЦГ и др.). Дополнительно между матрацами надо вкладывать камфару, нафталин и другие отпугивающие вещества. Рекомендуется крышку коробок склеивать с ее корпусом лейкопластырем.

д) Водные стадии развития насекомых, мелкие клещи, москиты, мошки фиксируются и сохраняются в 70⁰ спирте. Учитывая, что при фиксации водных стадий развития насекомых в спирт попадает некоторое количество воды, рекомендуется после окончания фиксации материала сливать спирт и заменять его новой неразбавленной порцией. При небольших сборах можно рекомендовать вынутых из воды особей помещать на фильтровальную бумагу, а затем быстро переносить их в 70⁰ спирт.

Каждый сбор помещают в отдельный сосуд, внутрь которого вкладывают этикетку. На дно общей банки, заполненной спиртом и предназначенной для хранения заспиртованного материала, разложенного по маленьким пробиркам или другим мелким сосудам, должен быть положен слой ваты. Каждый ряд этих пробирок также перекладывают ватой.

Методики сбора окрыленных кровососущих насекомых.

К группе свободно нападающих насекомых, контактирующих со своей добычей только во время акта кровососания, относятся все малярийные и немалярийные комары, мошки, мокрецы, москиты и кровососущие мухи.

Так как кровососами у всех перечисленных насекомых, кроме мух, являются только самки, то в момент сбора насекомых на добыче улавливаются только самки. Самцы вылавливаются при сборах в растительности, а также в роях.

Наиболее простыми способами вылова кровососов в помещениях человека и животных являются:

а) Вылов пробирками. Вылов комаров, мошек, мокрецов и москитов проводится в затемненных частях помещений, в местах отсутствия сквозняков. Вылов слепней и многих видов мух, которые являются светолюбивыми насекомыми, проводится на внутренних сторонах закрытых окон. Пробирка осторожно подносится к сидящему на потолке или стене кровососу, который в результате вспугивания попадает в эту ловушку.

б) Вылов липучками. Липучки представляют собой стандартные листы писчей, пергаментной или полупрозрачной бумаги, пропитанные касторовым маслом. Качество липучек повышается при добавлении к касторовому маслу канифоли и вазелина. При изготовлении липучек бумага смазывается только с одной стороны, другая пропитывается при складывании их в пачки. Листы липучек после употребления могут быть повторно смазаны и использованы. Липучки развешивают в затененных углах помещений с целью вылова москитов и мошек. Прилипших к липучкам насекомых снимают мягкой кисточкой (или ватой, туго навернутой на пинцет или спичку), смоченной спиртом, и переносят для хранения в 70⁰ спирт.

Вылов кровососущих насекомых в природных условиях проводится следующими способами.

а) Вылов на себе или на добыче. При нападении кровососов на исследователя или на домашнее животное их собирают пробирками или стеклянными воронками.

Воронка применяется в основном при массовом нападении мокрецов. Узкий конец воронки закрывают ватой, смоченной эфиром или хлороформом. Широким концом прикрывают участки на брюхе домашних животных в местах массового скопления кровососов.

б) Вылов воздушным сачком проводится около добычи. Взмахами сачка вылавливают подлетающих к жертве кровососов.

в) Вылов сачком в травянистой растительности, в местах убежищ насекомых путем взмахов сачком по травостою. В этих сборах наряду с самками попадаются и самцы.

г) Вылов насекомых пробирками и эксгаустером из мест их естественных убежищ (ямы, норы, растительность и т.д.).

д) Вылов воздушным сачком во время роения насекомых. При этих выловах в сачок попадают в основном самцы.

е) Вылов липучками, развешенными в растительности.

ж) Своеобразен вылов мух цеце. Они являются хорошими летунами и легко догоняют движущиеся машины. Догнав машину, они садятся на ее борта или проникают внутрь, где и могут быть выловлены пробирками или воздушными сачками.

Методика сбора преимагинальных стадий кровососущих насекомых. Вылов личинок и куколок малярийных и немалярийных комаров (рис.32), некоторых видов мокрецов и слепней (последних в ранних стадиях развития) может быть осуществлен следующим образом:

а) С помощью водного сачка. Сачком облавливают поверхностный и придонный слой воды, при этом тень от сборщика не должна падать на поверхность водоема и опускание сачка не должно вызывать колебание водной поверхности. При нарушении последнего условия надо начинать облов водоема через 1-2 минуты, не вынимая при этом уже ранее опущенного сачка. Содержимое сачка выполаскивают в кювете или другом сосуде с чистой водой, после чего проводят вылов личинок и куколок пипетками или микросачками и последние переносятся в фиксатор.

Рис. 32. Водные стадии развития комаров.

А – личинка малярийного комара; Б – личинка немалярийного комара; В – куколка.

б) Из мелких водоемов вылов проводится непосредственно кюветами или другими плоскими сосудами.

в) Из водоемов с малодоступными берегами вылов может быть проведен с помощью черпаков, прикрепленных к рукояткам различной длины.

г) Из водоемов, образующихся в дуплах деревьев и пазухах листьев, вылов проводится с помощью резиновых сифонов, трубок, выкачивателей.

Во всех случаях при высокой численности преимагинальных стадий развития комаров содержимое кювет пропускают через частый сачок и затем всю массу материала, находящуюся на дне сачка, фиксируют одномоментно.

В связи с чрезвычайным разнообразием мест выплода кровососущих насекомых, сбор материала рекаомендуется проводить во всех местах скопления воды независимо от размеров водной площади.

Сбор личинок и куколок мошек (рис. 33) производится с взятой из воды растительности, с ветвей деревьев и кустарников, погруженных в воду, а также с придонных камней и различных подводных предметов, к которым они прикрепляются. Необходимо помнить, что развитие мошек осуществляется только в текучих водоемах (реки, ручьи). Из мелких водоемов субстрат для вылова мошек добывают руками, из глубоких – с помощью грабель или крючков. В местах, малодоступных для сбора преимагинальных стадий развития мошек, рекомендуется применять примитивные уловители – пучки голых ветвей равной длины. Такие веники с подвязанным к ним грузом прикрепляют к надводным предметам. При малом числе особей их снимают с предметов пинцетом или кисточкой и фиксируют спиртом. При необходимости сбора большого количества материала уловители или погруженную растительность завертывают в клеенку или влажную ткань и переносят в лабораторию и помещают в тазы. Сборы заливают водой, подогретой до 60-70⁰. В результате этого личинки и куколки отпадают от субстрата, их вылавливают пипеткой или микросачком и переносят в спирт.

Учитывая трудности определения видовой принадлежности многих видов мошек, крайне желательно иметь в сборах свежевылетевших особей одновременно и пустые шкурки куколок, из которых они вылетели. С этой целью надо помещать уже почерневших куколок вместе с субстратом, к которому они прикреплены, в индивидуальные пробирки. Шкурку и окрыленную мошку фиксируют вместе.

Рис 33. Фазы развития мошек.

А – расположение личинок и куколок мошек на листе растения по отношению к току воды; Б – яйцекладка; В – яйцо; Г – взрослая личинка; Д – куколка – вид сбоку; Е – куколка в коконе, вид сверху.

В связи с трудностью обнаружения преимагинальных стадий развития москитов (рис. 34) и слепней и невозможностью определения по ним видовой принадлежности специальных сборов личинок и куколок этих насекомых можно не проводить. При случайных находках их фиксируют в 70^о спирте.

Сбор коконов мух цеце проводится в рыхлой, хорошо проветриваемой почве, в прибрежных участках рек, ручьев, заболоченностей, под упавшими деревьями, заброшенными лодками и т.д.

Рис. 34. Фазы развития москитов (по П.П.Перфильеву)

А – яйцо; Б – личинка первого возраста; В – личинка четвертого возраста; Г – куколка.

Небольшими лопатками снимают поверхностные слои земли на глубину до 5 см. Темно-коричневые коконы легко выделяются на фоне почвы. Из собранных в природе коконов в лаборатории могут быть выведены взрослые особи. Для этого коконы с субстратом помещают в коробку, в крышку которой вставляется широкогорлая пробирка для улавливания новорожденных особей.

Выловленных и усыпленных окрыленных комаров раскладывают на матрац на боковой стороне, всех остальных перечисленных насекомых – спинной стороной кверху. Мошек и москитов можно, кроме того, сохранять в спирте.

Сбор и хранение триатомовых клопов. В жилых помещениях триатомовых клопов вылавливают в щелях стен, в трещинах, в мебели, в складках постели. Одновременно могут быть выловлены особи во всех стадиях развития. Клопов вылавливают руками (в очагах заболеваний – в резиновых перчатках), пинцетами или кисточками, смоченными спиртом. Из глубоких щелей и нор животных клопов вылавливают деревянной палочкой, на вершину которой наматывают вату, смоченную спиртом. Таким же способом выбирают клопов из трещин стволов деревьев.

Собранных клопов усыпляют наркозом и сохраняют на ватных матрацах. Яйца и мелкие личинки фиксируются в 70⁰ спирте.

Сбор и хранение иксодовых клещей. Сбор иксодовых клещей (рис. 35) производят с животных и человека, которые являются прокормителями клещей. При сборе клещей со скота, осматривают в первую очередь ушные раковины, шею, подгрудок, паховую и хвостовую части, а также вымя. Присосавшихся клещей значительно легче снимать после смазывания их вазелиновым или другим маслом. С диких мелких животных и птиц клещей снимают частым гребнем или кисточкой, смоченной спиртом. Для сбора клещей можно использовать мелких домашних животных, специально привязанных в заклещевленных местах.

Сбор клещей можно проводить на себе. Сборщик, одетый в противоклещевой костюм, проходит по тропам, по которым систематически прогоняют на пастбище скот. Сборщику необходимо тщательно осматривать свой костюм и собирать заползающих на него клещей.

Сбор клещей в растительности проводят с помощью волокуши или флага, которые представляют собой отрезок вафельной ткани, фланели или любой ворсистой белой ткани длиной до 2 м и шириной 40-60 см. В узкие подшитые края волокуши вставляют рейки, и наблюдатель сбоку от себя тянет волокушу за веревку, прикрепленную к передней рейке. Голодные клещи цепляются за волокушу.

Рис. 35. Общий вид взрослых иксодовых клещей.

А – самка Ixodes persulcatus (по Е.Н.Павловскому); Б- самец Dermacentor pictus (по Б.И.Померанцеву).

Осмотр ее и сбор клещей производят систематически каждые несколько минут нахождения в пути. Кроме того, сборщик должен тщательно осматривать себя и собирать заползающих на него клещей.

Во всех случаях клещей рекомендуется снимать мягким пинцетом и фиксировать в 70⁰ спирте. Крупные виды клещей после умерщвления могут сохраняться на ватных матрацах. В очагах заболеваний сборщик должен работать в резиновых перчатках.

Вылов и хранение аргасовых клещей. Разработан ряд методов, с помощью которых одновременно могут быть выловлены клещи во всех стадиях их развития.

а) Вылов клещей из субстрата, взятого из нор животных, трещин глинобитных построек, пещер, из-под камней и других подобных мест. Субстрат рассыпают тонким слоем на белую ткань или клеенку, разложенную на солнце. Под влиянием света клещи становятся подвижными и хорошо видимыми. Вылавливают их пинцетом. Клещи на месте фиксируются спиртом или усыпляются эфиром или хлороформом. Во избежание укусов зараженных клещей субстраты просматривают с помощью совков, маленьких лопаток, ложечек.

б) Вылов клещей на себе. Сборщик, одетый в противоклещевой костюм, садится на разостланную белую ткань и вылавливает на ней всех подползающих клещей. Клещей вылавливают пинцетом и затем умерщвляют.

в) Вылов клещей с ног домашних животных.

г) Вылов клещей в жилых помещениях человека и животных производится с помощью пинцета, которым паразитов достают из трещин стен, из мест отставания штукатурки или из взятого здесь субстрата. Клещи фиксируются и хранятся в спирте, крупные особи могут сохраняться после умерщвления на ватных матрацах.